MIAPaca-2细胞加入不同浓度的Embelin共孵育60h后再加入3H胸腺嘧啶继续孵育12h,取细胞裂解液用同位素γ闪烁计数仪检测3H-CPM数值以判断细胞增殖程度。对DMSO对照组与Embelin实验组的组蛋白OD值与3H-CPM数值分别进行比较分析。结果Embelin实验组的MIAPaCa-2细胞株组蛋白OD值显著高于DMSO对照组而3H-Trichostatin A订单CPM数值明显低于DMSO对照组(P<0.01),且实验组Embe-lin的作用浓度与组蛋白OD值呈正相关(r=0.996,P<0.01),而与3H-CPM数值呈负相关(r=-0.993,P<0.01)。结论Embelin呈剂量依赖性地诱导人胰腺癌细胞株MIAPaCa-2凋亡并抑制其增殖,有肿瘤抑制效应。"
“[目的]实寻找更多现蚓激酶基因在大肠杆菌中的高效表达。[方法]采用RT-PCR技术,以含蚓激酶基因的质粒pMD18-Tf3为模板进行RT-PCR扩增,克隆了蚓激酶基因Tfc,并进行测序,之后将蚓激酶基因Tfc克隆到大肠杆菌表达载体pBV220,转化大肠杆菌DH5α,用LB培养基于30℃培养24 h后,然后调温至42℃继续培养2 h诱导蚓激酶selleck GSK-3 抑制剂基因表达,收集菌体,进行SDS-PAGE电泳,利用纤维平板法检验蚓激酶的活性。[结果]测序发现该基因全长729 bp,共编码243个氨基酸,GenBank登录号为EU167735。SDS-PAGE电泳表明诱导表达后菌体总蛋白在28 kD处有一特异性条带,而含空质粒pBV220的大肠杆菌经诱导表达后无该条带,表达蛋白主要以包涵体形式存在,无纤维蛋白酶活性。[结论]该研究为创新蚓激酶的生产工艺提供了依据。