4在HSC细胞中,三种MAPK抑制因子均可抑制Imp7表达及入核。三种抑制因子均可抑制Imp8表达,p38抑制因子可减少Imp8入核。提示,在HSC细胞中ERK、JNK通路对Smad2/3/4复合物的转位入核的调控可能与Imp7/Imp8的表达及Imp7的入核有关；而p38通路对Smad2/3/4复合物的转位入核的调控可能与Imp7/Imp8表达及入核有关。而在HepG2细胞中,三种MAPK抑制因子均可抑制Imp7入核,尤其是p38抑制因子。ERK抑制因子、JNK抑制因子可抑制Imp8入核,p38抑制因子对Imp8核浆分布无明显影响。提示,在HepG2细胞中,ERK、.JNK通路对Smad2/3/4复合物的转位入核的调控可能与Imp7/Imp8的入核有关；p38通路对Smad2/3/4复合物的转位入核的调控可能与Imp7的入核有关。 5.5ERK、JNK、P38抑制因子均能明显抑制HSC细胞内TGF-β1诱导的靶基因PAI-lmRNA的表达。提示,ERK、JNK、p38通路均参与HSC细胞内TGF-p1信号通路靶基因PAI-1转录活性的调控。ERK、JNK、P38抑制因子均能明显抑制HepG2内TGF-β1诱导的靶基因PAI-1mRNA的表达。提示,ERK、JNK、p38通路均参与HepG2内TGF-β1信号通路靶基因PAI-1转录活性的调控。
Selleckchem AUY922 总之,在HSC细胞内p38、ERK通路可能主要通过调控Smad3蛋白连接区的磷酸化及Smad2/3/4复合物的形成而影响靶基因PAI-1的转录,JNK通路主要通过调控Smad2/3/4复合物的转位入核影响靶基因PAI-1转录。而在HepG2细胞内p38通路可能主要通过调控Smad3蛋白连接区的磷酸化及Smad2/3/4复合物的形成而影响靶基因PAI-1的转录；ERK通路主要通过调控Smad2/3/4复合物的转位入核影响靶基因PAI-I转录；JNK通路可能通过调控Smad3蛋白连接区的磷酸化及Smad2/3/4复合物的形成及调控Smad2/3/4复合物的转位入核影响靶基因PAI-1转录。
摘要 第一章槟榔碱对原代培养口腔粘膜上皮细胞和成纤维细胞增殖、凋亡及DNA损伤作用的影响 目的：研究槟榔碱对原代培养口腔粘膜上皮细胞和成纤维细胞增殖、凋亡及DNA损伤作用的影响。 方法：体外培养、扩增口腔粘膜上皮和成纤维细胞,通过细胞形态学及角蛋白和波形丝蛋白免疫组织化学染色等鉴定细胞；MTT实验检测高浓度槟榔碱短时间干预及低浓度槟榔碱长时间作用对上皮细胞和成纤维细胞增殖的影响；流式细胞术分析槟榔碱干预对上皮细胞和成纤维细胞的细胞周期的影响；彗星实验检测槟榔碱对上皮细胞和成纤维细胞DNA损伤的影响。 结果：所培养的细胞具有典型的上皮细胞和成纤维细胞形态,角蛋白和波形丝蛋白染色阳性。高浓度(0.2mM-0.8mM)槟榔碱短期(0-72小时)作用于上皮细胞和成纤维细胞后,上皮细胞随槟榔碱浓度的增加及作用时间延长而活力下降,形态变化明显,差异具有统计学意义(P0.05)。在对细胞周期影响方面,0.8mmM槟榔碱干预48小时导致了上皮细胞位于G2/M期的比例相比对照组明显增加,差异具有统计学意义(P0.05)。0.6mM槟榔碱干预24小时可诱导上皮细胞出现凋亡,呈现剂量和时间的依赖性,差异具有统计学意义(P0.05)。低浓度槟榔碱显著抑制上皮细胞生长的条件是0.1mM作用12天后,差异具有统计学意义(P0.05)。各浓度槟榔碱作用成纤维细胞24小时后,成纤维细胞DNA损伤情况与对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05)；上皮细胞DNA损伤情况与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05),且与槟榔碱具有浓度依赖性。低浓度槟榔碱(0.1mM)长时间(24小时)处理口腔粘膜上皮细胞后,细胞继续培养24小时,MMP-2表达显著高于对照组,差异有统计学意义(P
酸敏感离子通道(acid-sensing
ion channels, ASICs)是一类由胞外酸激活的阳离子通道,开放的通道对Na+、Ca2+有通透性,进而引起细胞一系列生理病理变化。目前为止,已发现4个基因编码的7个ASICs亚基(ASIC1a、ASIC1b、ASIC1b2、ASIC2a、 FHPI制造商 ASIC2b、ASIC3、ASIC4),均属于DEG/ENaC家族成员。近年来ASICs研究备受关注,其不仅在神经系统中存在表达并发挥疼痛、感觉、神经传递等调节作用,还在非神经系统如肿瘤、炎症、缺血性损伤、胃肠道疾病中发挥作用,这些病理反应中共同的特点是局部组织环境酸化、pH值下降,诱发ASICs激活导致Na+、Ca2+内流,进而引起各种病理生理效应。本课题组前期研究发现SD大鼠关节软骨中存在ASIC1a、ASIC2、和ASIC3的表达,在佐剂性关节炎(Adjuvant Arthritis, AA)大鼠关节软骨中ASIC1a、 ASIC2a和ASIC3的表达均明显高于正常组,ASICs非特异性阻滞剂Amiloride、非甾体类抗炎药阿司匹林能明显抑制。ASICs表达,并对AA大鼠关节软骨具有保护作用。进一步考察ASICs在关节炎中作用机制发现,当大鼠关节炎症发生时,可造成局部关节酸化,ASICs表达增加和通道开放,Ca2+流入关节软骨细胞内,导致关节软骨细胞外基质(Extracellular
确认细节 matrix, ECM)代谢失衡引起关节软骨损伤。 肝纤维化(hepatic fibrosis, HF)是慢性肝病的共同病理过程,是形成肝硬化的中间阶段。目前研究认为,病毒感染和酒精的过量摄入导致肝脏炎症是肝纤维化形成的主因。当炎症刺激时,肝脏产生氧化应激和脂质过氧化损伤,酸性代谢产物增加,肝星状细胞(Hepatic stellate cells, HSCs)活化增殖,转化为肌样成纤维细胞,表达α-SMA,合成和分泌细胞外基质(extracellular matrix, ECM)增加,导致ECM的合成与降解失衡,致使过多的ECM在肝组织沉积形成纤维化。该病理进程与关节炎症类似,即同样存在炎症导致的局部酸化,同样引起ECM代谢的失衡,那么,肝脏是否存在ASICs的表达?当肝纤维化时肝组织的酸性代谢会否导致ASICs的表达增加和通道激活,进而发挥其病理生理学作用?为此,我们研究以下内容： LASICla在大鼠肝组织、肝星状细胞的表达 分离大鼠肝组织,RT-PCR检测.ASIC1a mRNA表达,发现大鼠肝组织中存在ASIC1a的表达,CC14诱导的肝纤维化模型大鼠ASIC1amRNA表达增加；采用ASIC1a, α-SMA免疫荧光双标染色模型组大鼠肝组织,发现大鼠肝组织ASIC1a与α-SMA染色区域高度重叠,提示ASIC1a主要表达与活化肝星状细胞。肝灌注分离正常组、模型组大鼠HSC细胞进行RT-PCR, Western blot发现,正常组HSCs存在ASIC1amRNA及其蛋白表达,模型组表达高于正常组。选择HSC-T6表型活化细胞株,用酸诱导HSC-T6体外模型(pH6.0),考察不同pH值环境下ASIC1a在HSC-T6的动态表达,研究发现,与pH7.4组相比,pH6.0酸诱导HSC-T6组ASIC1a表达增加。 2.