Results:Nitrofen inhibited thecell proliferation of A549 cells in

Results:Nitrofen inhibited thecell proliferation of A549 cells in a dose-and time-dependent manner,accompa-nied by downregulation of PCNA.As a result,the DNA synthesis of nitrofen-treated A549 cells decreased,while cell cycle was arrested at G_0/G_1 phase.Moreover,nitrofen induced apoptosis of A549 cells,which was not abolished by Z-Val-Ala-Asp(OCH_3)-fluoromethylketone.In addition,nitrofen decreased the expressionof Bcl-x_L,but not of Bcl-2,Bax,and selleck化学药品 Bak,resulting in a loss of mitochondrialmembrane potential and the nuclear translocation

of apoptosis-inducing factor(AIF).Meanwhile,nitrofen strongly activated the p38 mitogen-activated proteinkinase (p38-MAPK).Pretreatment of cells with SB203580 (5 μmol/L) blockednitrofen-induced phosphorylation of p38-MAPK and abolished nitrofen-inducedAIF translocation and apoptosis in A549 cells.Conclusion:Nitrofen suppressesthe proliferation of cultured type Ⅱ pneumocytes accompanied by thedownregulation of PCNA,and induces mitochondria-mediated apoptosis involv-ing the activation of p38-MAPK.
AIM: To investigate whether heat shock pretreatment(HSP) improves mesenchymal

stem cell(MSC) repair via autophagy following hepatic ischemia-reperfusion injury(HIRI).METHODS: Apoptosis of MSCs was induced by 250 m M hydrogen peroxide(H2O2) for 6 h. HSP was carried out using a 42 ℃ water bath for 1, 2 or 3 h. Apoptosis of MSCs was analyzed by flow cytometry, and Western blot was used to detect Bcl-2, Bax and cytochrome C expression. Autophagy of MSCs was analyzed by flow cytometry and transmission electron microscopy, and the expression of beclin Ⅰ?and XAV-939制造商 LC3-Ⅱ was detected by Western blot. MSCs were labeled in vivo with the fluorescent dye, CM-Dil,

and subsequently transplanted into http://www.selleckchem.cn/products/ipi-145-ink1197.html the portal veins of rats that had undergone HIRI. Liver levels of proliferating cell nuclear antigen(PCNA) were quantified by fluorescent microscopy. Serum aminotransferase activity and the extent of HIRI were also assessed at each time point.RESULTS: HSP for 2 h reduced apoptosis of MSCs induced by H2O2 as seen by a decrease in apoptotic rate, a decrease in Bax and cytochrome C expression and an increase in Bcl-2 expression(P < 0.001). In addition, HSP for 2 h induced autophagy of MSCs exposed to H2O2 as shown by an increase in acidic vesicular organelle-positive cells, beclin 1 and LC3-Ⅱ expression, and autophagosome formation(P < 0.05). Treatment with 3-methyladenine attenuated HSPinduced autophagy and abolished the protective effects of HSP on the apoptosis of MSCs. Rapamycin failed to have additional effects on either autophagy or apoptosis compared with HSP alone. The phosphorylation of p38 MAPK was significantly elevated and the phosphorylation of m TOR was downregulated in heat shock pretreated MSCs. Treatment with the p38 MAPK inhibitor, SB203580, reduced HSP-induced autophagy in MSCs.

建立了SNX-2112在生物样品中的分离与测定方法。3 研究了SNX-2112的药代动力学。采用建立的SNX-2112生物样品测定

建立了SNX-2112在生物样品中的分离与测定方法。3.研究了SNX-2112的药代动力学。采用建立的SNX-2112生物样品测定方法进行了大鼠药代动力学实验,探讨了SNX-2112在大鼠体内动态变化的规律及其特点。 结果表明,SNX-2112在大鼠体内的动力学符合二室模型。单次给药2.5,5, 10mg/kg后,三个剂量组的浓度-时间曲线下面积(AUC)分别为:7.62±1.03,8.10±0.77,15.80±1.00 那个 (μg/ml)*h;分布半衰期t1/2a分别为:0.63±0.09,0.38±0.03,0.51±0.06h;消除半衰期t1/2β分别为:9.96±4.32,10.43±4.06,10.41±4.38h。在分布实验中,采用HPLC法测定单次SNX-2112(10mg/kg)静脉注射给药后大鼠各组织中原形药物在4个不同时间点的浓度,其结果表明SNX-2112在体内分布较广泛而迅速,其中以肝分布最多。在排泄实验中,大鼠尾静脉注射SNX-2112(10mg/kg)后,用HPLC法测定表明,原形药物的排泄量依次为粪便>尿液>胆汁;本实验还测定了SNX-2112对大鼠肝药酶的影响。此外,本实验还用超滤法测得了SNX-2112与大鼠及人的血浆蛋白结合率,并对SNX-2112的代谢做了初步研究。以上实验为该化合物的临床研究提供了科学依据。
研究目的:食管鳞癌是一种常见的预后较差的胃肠道恶性肿瘤,尽管目前手术、放疗及化疗等手段不断改进,食管鳞癌患者的5年生存率仍不足30%。食管鳞癌预后主要与肿瘤侵犯的深度、转移淋巴结数目、远处转移与否等有明显相关性。除了这些临床病理因素外,目前用于预测食管鳞癌发生发展及预后有关的分子标记物研究也取得了很大进展,食管癌分子标记物可以进行食管癌早期检测或者区分食管鳞癌高风险及低风险病人以得到最佳治疗。PTEN

(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome 10)又名TEP1或者MMAC1,位于染色体10q23.3, PTEN蛋白的脂类磷酸酶活性主要作用机制是可将3,4,5-三磷酸盐(PIP3)去磷酸化形成4,5-二磷酸盐(PIP2),进而抑制PIP3与PDK1/Akt的丝苏氨酸位点结合,此作用导致了Akt及其下游通路的激活受抑制。PTEN蛋白通过此拮抗PI3K/Akt信号通路而起到了肿瘤抑制作用,因此其被认为是重要的抑癌基因。目前很多研究表明PTEN (phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome 10)与前列腺癌、乳腺癌及脑恶性胶质瘤等有明显相关性,但是PTEN在食管鳞癌中的表达情况及其与食管鳞癌患者预后的关系研究仍存在矛盾的结论,仍需进一步的研究证实其相关性。除此之外,PTEN失表达与食管鳞癌患者术后淋巴结转移复发关系目前仍无任何报道。PTEN基因启动子上具有富含CpG岛的区域,为DNA甲基化提供了一种可能。目前多项研究表明PTEN启动子的甲基化与多种肿瘤组织中的PTEN蛋白低表达有明显相关性,例如低分化的脑胶质瘤、黑色素瘤及肺癌等中均发现PTEN启动子甲基化是参与PTEN表达降低的一种机制。但是目前关于PTEN甲基化在食管鳞癌中的报道较少,仅有Pan研究了哈萨克斯坦族的食管鳞癌病人的甲基化情况,其发现PTEN甲基化水平在食管鳞癌病人(中位甲基化率10%)中明显高于正常人(中位甲基化率6.0%),男性食管鳞癌病人的PTEN甲基化水平明显高于女性,同时PTEN甲基化水平与食管鳞癌的淋巴结转移及肿瘤分化程度有关(p0.05);慢病毒稳定抑制PTEN表达的食管鳞癌细胞系相比于阴性对照组细胞系的细胞增殖速度、细胞迁徙、细胞侵袭能力明显增强(p<0.05),裸鼠体内移植瘤生长实验表明稳定抑制PTEN表达后移植瘤的生长速度明显增强(p
研究背景 LBH589分子重量 还有 慢性髓性白血病(chronic myeloid leukemia,CML)是一种发生于造血干细胞水平的、常见的血液系统恶性克隆增生性疾病,其分为慢性期(chronic phase, CP)、加速期(accelerated phase, AP)、急变期(blastic phase, BP)三期。Phl染色体是CML的特征性细胞遗传学改变,其是由t(9;22)(q34;q11)染色体易位形成的,即9号染色体的abl原癌基因移至22号染色体的bcr断裂点形成bcr-abl融合基因并表达bcr-abl融合蛋白。该bcr-abl融合蛋白具有很强的酪氨酸激酶活性,能够持续不断的激活下游增殖信号转导通路,促进细胞的增殖和存活,抑制细胞凋亡,并引起正常骨髓前体细胞的恶性转化。伊马替尼(Imatinib,IM)是第一代以bcr-abl融合蛋白为靶目标的分子靶向药物,它已成为治疗CML的一线药物。但在伊马替尼(IM)时代之前,干扰素α是治疗慢性髓性白血病慢性期(CML-CP)的一线药物。国内外均有文献报道,应用干扰素α治疗CML-CP患者能让少部分患者获得细胞遗传学及分子生物学缓解,改善长期生存,但是绝大部分患者不能获益或者因不能耐受药物毒副反应而终止治疗。目前,在我国CML患者发病率占总体白血病患者的20%左右,是一种很常见的恶性血液病,发病年龄在中老年人居多,IM时代之前多数患者中位生存期为3-4年,发生急变后预后极差。在一些偏远山区或者低收入家庭中,由于经济条件等因素限制,国内仍有部分患者选择干扰素α作为一线治疗;其中一些患者干扰素α治疗失败或者不耐受后再选择伊马替尼。有关伊马替尼治疗干扰素a失败或者不耐受患者的疗效如何,以及IM治疗新诊断CML组与干扰素失败组CML疗效差异程度,国内均无系统报道。本文回顾性分析和比较了伊马替尼治疗新诊断和干扰素α治疗失败的CML患者的疗效差异情况以及毒副作用,以期为临床治疗策略的制定提供依据。

目的 1.比较伊马替尼(IM)治疗新诊断组和干扰素治疗失败或者不耐受组的慢性髓性白血病患者的疗效差异,包括6个月时获得部分细胞遗传学缓解率、达到完全细胞遗传学缓解的平均时间、获得完全分子生物学反应率。 2.比较伊马替尼(M)治疗新诊断组和干扰素治疗失败或者不耐受组的慢性髓性白血病患者的原发和继发性细胞遗传学耐药差异。 3.比较在CML的早期慢性期(early chronic phase,ECP)、晚期慢性期(late chronic phase,LCP)接受IM治疗的新诊断组和干扰素治疗失败或者不耐受组之间的疗效差异,包括6个月时的部分细胞遗传学缓解率、达到完全细胞遗传学缓解的平均时间、获得完全分子生物学反应率。 4.

荧光显微镜、流式细胞仪观察Ena对活性氧的影响;免疫细胞染色观察Ena对磷酸化p38MAPK核转位的影响;W estern blo

荧光显微镜、流式细胞仪观察Ena对活性氧的影响;免疫细胞染色观察Ena对磷酸化p38MAPK核转位的影响;W estern blot观察Ena对磷酸化p38MAPK表达的影响;免疫细胞荧光染色法和Western blot检测Ena对TGF-β_1表达的影响。结果表明:Ena通过降低活性氧水平抑制p38MAPK核转位,降低TGF-β_1表达从而起到抗心肌纤维化作用。
中草药可抗炎被人们所深信,为数众多的中草药常被宣称具有抗炎的功效,然而大多数缺乏科学性的佐证。因此,若能构建一套可筛选中草药或其提取化合物抗炎的评估方法,尤其使用以分子及细胞学为基础的被国际上认可的方法,在开发中草药的抗炎功效是一项非常重要的发展策略。核转录因子(nuclear factor,NF)-κB是调控基因转录的重要因子,活化的NF-κB可控制许多基因的表达,包括参与炎症反应的多种细胞因子、化学趋化因子以及许多免疫系统的受体,NF-κB可谓是免疫系统的中心枢纽。NF-κB的适度活化对于机体抵御病原微生物的危害具有重要意义,但NF-κB过度活化并导致多种炎症介质的过量表达释放则是引起SIRS、急性呼吸窘迫综合征以及MODs发生的重要机制。因此,构建快速与特异的NF-κB活性检测方法,发现以NF-κB为靶点的化合物,将为炎症和肿瘤防治开辟一条新的途径。在本研究中,我们将pNF-κB-分泌型胎盘碱性磷酸酶(secreted

p38 MAPK activity alkaline phosphatase,SEAP)-新霉素磷酸转移酶(neomycin phosphotransferase,NPT)质粒成功地转入小鼠RAW 264.7单核巨噬细胞,该转染细胞含有NF-κB基序的增强子、SEAP报告基因和新霉素(neomycin)抗性筛选基因,通过检测SEAP报告基因表达水平可反映NF-κB的活化状态。另外,我们在实验体系中引入已知的NF-κB激活剂脂多糖(lipopolysaccharide,LPS),结果证明LPS可以时间和剂量依赖性地促进pNF-κB-SEAP-NPT转染的RAW

通常 264.7细胞的SEAP报告基因的表达。由于LPS使NF-κB活化至一定水平,提高了实验体系中SEAP基础水平,有利于发现待测化合物的NF-κB抑制作用。该筛选体系具有稳定、特异、高通量等特点,利用该体系,我们对61种中药单体进行了活性筛选,并从中发现了一些对LPS诱导的NF-κB的活化具有较强抑制作用的化合物。一氧化氮(nitric oxide,NO)为炎症反应的标志之一,为了进一步对待测化合物进行抗炎活性筛选,本文利用LPS诱导的RAW 264.7巨噬细胞为模型,测定了各待测化合物对LPS诱导的NO产生的影响,结合NF-κB活性抑制筛选结果,我们从诸多化合物中选择了三个既对NF-κB活性具有抑制作用,又能减少NO生成的化合物进一步考察其抗炎活性及作用机制。 其中,从厚朴中提取的新木脂素4-methoxyhonokiol及首次从枳实中提取的三萜类化合物21(α,β)-methylmelianodiol均对LPS诱导的NF-κB活化及NO的生成具有显著的抑制作用。因此,本文应用现代药理学研究手段,首先考察了4-methoxyhonokiol和21α-methylmelianodiol(21α-MMD)对多种急性炎症动物模型的影响,进而应用细胞培养技术、荧光分光光度法、紫外分光光度法、免疫印迹和多聚酶链式反应等方法,在分子、细胞及整体动物水平系统地研究了4-methoxyhonokiol和21α-MMD的抗炎作用及其机理。毛细血管通透性增加是急性炎症反应的一个重要特征,醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增加实验则是研究炎症初期反应的一个典型的体内炎症模型,另外,角叉菜胶致足肿胀模型也是一个公认的评价药物抗炎作用的经典方法。因此,我们首先利用这两个模型考察了4-methoxyhonokiol和21α-MMD的体内抗炎活性。实验结果表明:4-methoxyhonokiol(20mg/kg和100mg/kg,i.p.)和21α-MMD(20mg/kg和100mg/kg,i.p.)均对醋酸诱导的小鼠腹腔毛细血管通透性的增加以及角叉菜胶致小鼠足肿胀具有显著的抑制作用。在LPS诱导的全身性急性炎症模型中,4-methoxyhonokiol(20mg/kg和100mg/kg,i.p.)和21α-MMD(5mg/kg和20mg/kg,i.p.)均可降低LPS诱导的小鼠血浆NO的生成。结果提示4-methoxyhonokiol和21α-MMD均具有体内抗炎活性。

并且 体内NO和PGE_2的产生有赖于细胞诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxidesynthase,iNOS)及环氧化酶(cyclooxygenase,COX)-2的表达或酶活性,过量NO和PGE_2的产生与慢性炎症和癌症过程密切相关,因此,通过抑制iNOS和COX-2的表达或活性,有效控制活化的巨噬细胞产生过多的NO和PGE_2可降低炎症疾病和癌症的发生。在LPS诱导的小鼠RAW 264.

05,P0 05)。 4 对肝脏TGF-β1蛋白表达的影响: (1) TGF-β1蛋白在正常肝组织中仅弱表达; (2)模型组较正常

05,P0.05)。 4.对肝脏TGF-β1蛋白表达的影响: (1) TGF-β1蛋白在正常肝组织中仅弱表达; (2)模型组较正常组TGF-β_1蛋白表达明显增多(P0.05)。 5.对肝脏Caspase-3蛋白表达的影响: (1)模型组Caspase-3蛋白的表达较正常对照组明显增高(P0.05)。 6.对TGF-β1的mRNA表达的影响: (1)模型组TGF-β1的mRNA的表达较正常对照组比较明显升高(P0.05) 实验结论 1.甘草黄酮具有抗硫代乙酰胺诱导大鼠肝纤维化的作用。 2.甘草黄酮抗硫代乙酰胺诱导大鼠肝纤维化的作用可能与下调TGF-β1和Caspase-3的蛋白表达有关。
哺乳动物硫氧还蛋白还原酶(TrxR),能催化NADPH依赖的硫氧还蛋白(Trx)的还原,参与调节机体氧化还原反应、细胞生长与凋亡等许多重要的生命活动。大量的研究发现TrxR在肿瘤细胞中高表达,与肿瘤的发展和化疗治疗的耐药性密切相关,可能是干预治疗的靶点。我们通过检测白血病敏感(K562)细胞和白血病耐药(K562/ADM)细胞中TrxR的活性,发现TrxR活性在K562/ADM细胞中明显升高。体外实验发现,临床上广泛应用于治疗类风湿性关节炎的药物—金诺芬(Auranofin)作用于K562/ADM细胞24

h,能够显著抑制细胞内TrxR的活性。采用MTT法检测不同浓度金诺芬和阿霉素对K562/ADM细胞生长抑制的影响,分别以0.25、0.5、1、2和3μM金诺芬和阿霉素作用K562/ADM细胞6h后,阿霉素用药组其细胞存活率下降0%、1.1%、7.9%、3.9%和6.6%,而金诺芬用药组明显地依次下降22.8%、34%、52.9%、67%和81.3%;随着药物作用时间延长至24

h和48 h,与阿霉素用药组相比,金诺芬用药组的细胞数目显著性地呈时间依赖性地减少。采用流式细胞术(Flow cytometry, FCM)分析细胞凋亡率和凋亡相关caspase-3蛋白表达,结果显示3μM金诺芬作用K562/ADM细胞24 h的凋亡率增加24.6%,明显高于阿霉素用药组(4.8%,与金诺芬用药组比较P
目的急性心肌梗死发生后,因血栓形成、心肌细胞炎症反应、残余心肌细胞工作负荷加重、多种体液因子发生剧烈变化等因素,致使患者心输出量急剧下降、心脏扩大等病理过程相继发生并造成严重后果。本研究采集急性心肌梗死患者外周静脉血样,通过分子生物学技术检测急性心肌梗死患者不同时间点外周静脉血单核细胞中p38蛋白的表达,初步探讨p38蛋白的表达与心梗后炎症反应的关系。 获悉更多 方法 1.病例采集:采集宁夏医科大学总医院、银川市第一人民医院心内科急性心肌梗死患者40例做为实验组(又称心梗阻),根据患者心梗时间将实验组分为四个亚组,分别为心梗后3、6、12及24小时组;同期采集健康成人20例做为健康对照组;对于入组的实验组或健康对照组成员,符合病例收集标准(见正文)并取得其同意后,抽取其外周静脉血9ml-10ml送实验室处理。 2.分子生物学检测:2.1单核细胞的采集:将所采集的血样平均分装于3个离心管中,等倍生理盐水稀释。另外选用3个离心管,每个离心管各加入单核细胞分离液3ml。分别将前述稀释好的血样缓缓加入单核细胞分离液中,以血样和单核细胞分离液之间明显分层为佳。将其放入水平低温离心机中,3000rmp/min离心25分钟后取出,此时可见离心管中呈现明显分层现象。收集最上层的淡黄色血清并置入-80℃备用,同时将离心管中淡黄色血清之下的单核细胞层收集于EP管中。2.2单核细胞的裂解及总蛋白的提取:将上述所收集的含有单核细胞的EP管放入4℃离心机中,3000rmp/min离心5分钟,取出EP管,目视可见白色单核细胞沉积于EP管底部,弃上清液之后,用PBS缓冲液吹悬单核细胞后再次3000rmp/min离心5min,完成后再次弃去上清,PBS缓冲液吹悬、离心,该过程重复2-3次后可在2个EP管中得到较为纯净的单核细胞,此后为三个EP管编号为1、2、3号。向1号EP管中加入Trizol试剂裂解单核细胞后置于-80℃保存;向2、3号EP管中加入事先配置好的蛋白提取液200ul,放于4℃摇床上轻摇15分钟后置于4℃离心机中,14000rmp/min离心15分钟后收集上清,置于另外两个EP管中,-80℃保存备用。此后,每份血样中单核细胞内p38α基因的转录水平、p38蛋白的翻译水平可分别由荧光定量PCR和western 查找更多 GDC-0449 blot等技术检测,血清中TNF-α的含量可由ELISA测定。结合上述数据可研究p38蛋白在急性心肌梗死患者外周血单核细胞内的表达以及其同TNF-α表达关系。

结果 1、荧光定量结果:心梗组中四个亚组与健康对照组相比,其p38α基因表达校对值的差异存在显著性(F=54.70,P=0.000<0.05);在此基础上,以健康对照组患者p38α基因表达量为1,在急性心肌梗死发生后的3、6、12、24小时后,患者外周血单核细胞中p38α基因的表达量分别是健康人的1.196倍、1.429倍、1.673倍和1.165倍; 2、Western blot印迹结果:心梗组中四个亚组p38总蛋白与健康对照组p38总蛋白相比,差异无统计学意义(F=1.763,P=0.149>0.05);病例组中各个亚组磷酸化p38蛋白与健康对照组磷酸化p38蛋白校对值相比,差异有统计学意义(F=1857.56,P=0.000<0.05);病例组内各个亚组相比,差异亦有统计学意义(P=0.000<0.05);提示发生急性心肌梗死后,患者单核细胞中p38总蛋白未见明显变化,而磷酸化p38蛋白发生较为明显变化,其随心梗时间延长而蛋白表达量逐步增高,并于急性心肌梗死12小时后达到高峰,随后磷酸化p38蛋白含量逐步下降; 3、ELISA测定血清中TNF-α浓度:心梗组中四个亚组和健康对照组患者血清中TNF-α的浓度相比,差异有统计学意义(F=360.25,P=0.000<0.05);四个亚组之间比较差异仍有统计学意义(P=0.000<0.05);提示急性心肌梗死发生后(24小时之内),患者血清中TNF-α的浓度随时间延长而逐步增高。 1.结论急性心肌梗死后12小时之内,患者血液中单核细胞内p38α基因持续激活,表达量持续增加,其功能可能并非是增加p38蛋白的翻译水平,而是执行某种潜在的信号转导。 2.急性心肌梗死后12小时之内,患者血液中单核细胞内总p38蛋白表达量未见明显变化,而磷酸化蛋白表达量持续增加,其功能可能在于启动其下游的相关信号分子,并在心梗后心脏功能的恶化过程中发挥极其重要的作用。 3.