We have reported that a combination o…
Objective:this study was

to discuss the effect of warmedinfusion on extensive bums complicated with low bodytemperature during its shock resuscitation stage.methods:we used rabbit 35%TBSAⅢburn model to undergoresuscitation.Fluids warmed to 38-39℃were applied inexperiment group.Fluids at room tem…
背景和目的:丹酚酸B(SA-B)是丹参的水溶性成份之一(C36H30O16,Mr 718)。临床观察发现,SA-B有抗慢性乙型肝炎肝纤维化作用;实验研究证实,SA-B能抑制TGF-β1刺激的肝星状细胞活化与Smad2磷酸化。肝星状细胞活化是肝纤维化细胞学基础,TGF-β1是重要的促肝纤维化因子,可通过TGF-β受体及其Smads蛋白通路促进肝星状细胞活化。本研究主要目的在于探讨SA-B干预肝星状细胞中TGF-β1信号转导的抗肝纤维化作用。方法:分离培养原代肝星状细胞(HSC),于培养4d(细胞处于中间活化状态)时,随机分为正常培养、TGF-β1刺激组、抑制剂对照组(10μM Z VAD FMK SB-431542…
We aimed to study whether the PPAR-g agonist pioglitazone (PIO) induces apop-tosis in vascular smooth muscle cells (VSMC) from diabetic patients and its relationship with TGF-b. Methods: VSMC were isolated by explants from internal mammary arteries. Apoptosis induced by PIO 100mcM was analyzed b…
Hyaluronic acid (HA) is a key glycosaminoglycan (GAG) mediating vascular smooth muscle (VSMC) proliferation and migration. We investigated

the effect of TGF – betal. on HA turnover in primary human VSMC obtained from the pulmonary artery. Cells were incubated with TGF- betal for 6, 12 and 24 h. …
Aim:To investigate the mechanism selleck怎么样

selleck好不好

selleck怎么样 of UVB inducing apoptosis in HaCaT cells via iNOS/NO/TGF-β/Smads pathway

and Polypeptide 或者 from Chiamys farreri(PCF) protecting HaCaT cells from UVB by 20 mJ/cm~2 UVB-induced apoptotic model of HaCaT cells and iNOS transient transfected HaCaT cells.Methods:UVB-induc…
目的Rho激酶(ROCK)活化在压力超负荷介导的左心室重构中发挥重要作用,其潜在的病理分子机制尚不明确。在本研究中,我们发现TGF-β1可诱导ROCK活化,并通过抑制内源性BMP-2加重心肌纤维化。因此,利用外源性补充BMP-2分子观察是否有效改善压力超负荷下TGF-β1引起的心肌纤维化,并阐明内在的病理机制。方法通过机械牵张心肌细胞,在不同时间段(0、12、24、48 h)观察细胞BMP-2、TGF-β1以及ROCK蛋白的表达;
Selenium has been reported to possess potent anti-oxidant, anti-hyperglycemic and anticarcinogenic propertiesHowever, the precise biological role of selenium in formation of skin fibril remains unknownSelenium exists in various forms such as selenate, selenite, and methylseleninic acidAmong them, we…
目的SB431542是TGF8的Ⅰ型±受体的特异性抑制剂,利用它阻断TGF-β1/SMADs信号通路对严重烧伤后促炎性细胞因子IL-1β、IL-6、表达的影响。方法雄性SD造成后躯干30%TBSAⅢ。烧伤,伤后按ParkLand公式补液抗休克。分为对照组(单纯烧伤)和抑制剂组(烧伤前1h腹腔内注射SB431542,剂量2.53ug/g,烧伤同对照)。于烧伤后2h、8h采集血清,ELISA法测定血清IL-1β、IL-6、TNF-α水平。结果伤后2h,8h血清IL-1β、IL-6、TNFα水平抑制组均显著低于对照组(P
目的探讨TGF-β/Smads信号转导通路在C-57小鼠皮肤组织损伤愈合过程中的作用。着重研究其对重上皮化的影响。方法动物分组:1、正常组(N)。2、正常鼠应用受体抑制剂SB-431542组(NS)。3、Smad4基因敲除组(S)。4、Smad4基因敲除应用TGF-β受体抑制剂SB-431542(S S)。每组小鼠3只。1、3组小鼠造成Ⅱ度烫伤,模型。2、4组小鼠于烫伤前30分钟给予腹腔应用SB-431542(5X10-8/g),并每日给药一次,持续5天,观察小鼠烫伤后愈合速度;1组与3组小鼠于伤后5天从创伤边缘取材,剪程1mmX2mm组织块,于无血清培养基中培养,1组分NT和NST、亚组,3…

采用实时荧光定量PCR法（Q-PCR）检测经病理学确诊的67例NSCLC患者新鲜肿瘤组织ERCC1和RRM1基因表达状态，患者均接受含铂双药方案化疗，收集并分析患者疗效数据，χ2检验分析ERCC1、RRM1基因表达状况与患者临床特征及其疗效的关系。 结果： 1.回顾性分析239例接受含铂双药方案化疗的晚期NSCLC的疗效发现：紫杉醇+铂组、吉西他滨+铂组、多西他赛+铂组3组患者ORR和DCR分别为42.5%、43.1%、35.2%（P=0.612）和84.1%、75.0%、74.1%（P=0.198），均无统计学差异；PFS分别为5.6、5.8、3.2个月，有统计学差异（P≤0.001）。

2.252例患者行EGFR基因突变状态检测，其中，110例存在突变，突变率为43.7%。EGFR基因突变率在女性（63.8%vs.29.3%男性）、不吸烟（59.8%vs.25.8%吸烟）、腺癌（50.3%vs.14.9%鳞癌）、IIIb-IV期（46.7%vs.26.3%Ia-IIIa期）患者中显著增高。110例存在EGFR基因突变的患者中，19-Del和21外显子L858R位点突变率分别为50.9%、42.7%，两者占到总突变的93.6%。47例患者行KRAS基因突变检测，KRAS基因突变率为4.3%。80例EGFR突变型患者接受EGFR-TKIs靶向治疗，ORR达72.5%，DCR达93.8%。亚组分析发现，一线与二线靶向治疗、19-Del与L858R位点突变、突变丰度强弱、不同靶向药物种类治疗的患者ORR均无统计学差异。 哪里 3.67例患者行ERCC1和RRM1基因表达状态检测。其中，ERCC1基因高、中高、中低、低表达患者分别为19.4%、34.3%、16.4%、29.9%。ERCC1基因表达状态与患者分期有关（P=0.014）。RRM1基因高、中高、中低、低表达患者分别为49.3%、26.9%、11.9%、11.9%。RRM1基因表达水平与性别有关（P=0.018）。分析患者ERCC1基因表达状态与接受含铂双药联合方案化疗疗效的关系发现：高、中高、中低、低表达组四组患者的ORR和DCR分别为46.2%、39.1%、45.5%、45.0%（P=0.971）和92.3%、87.0%、90.9%、75.0%（P=0.587），高+中高、低+中低表达组中位PFS分别为5.0和5.3月（P=0.507），均无统计学差异。因采用吉西他滨化疗的患者仅9例，故未能分析RRM1基因表达状态与吉西他滨疗效间的关系。

结论： 1.紫杉醇+铂、吉西他滨+铂、多西他赛+铂三组方案治疗晚期NSCLC均取得了较好疗效。三组方案在短期疗效上相似；在延缓肿瘤进展上，吉西他滨组和紫杉醇组较多西他赛组更有优势。 还有 2.我国西南地区NSCLC患者中，女性、不吸烟、腺癌三种人群是EGFR突变的优势人群；EGFR基因突变以外显子19、21突变最常见，占93.6%；EGFR突变型患者接受EGFR-TKIs靶向治疗疗效好，EGFR突变是NSCLC患者使用EGFR-TKIs治疗获益的最重要疗效预测因子。 3. ERCC1基因目前尚不能作为一个理想的分子标志物预测铂类的疗效。
背景与目的： 目前，肺癌是癌症死亡的最主要原因。近些年来，在全世界范围内肺癌的发生率一直在增加。非小细胞肺癌大约占据肺癌总死亡人数的80%左右，约有70%以上的患者在明确诊断时大都是晚期，青年非小细胞肺癌（年龄≤40岁）在总发病人群中相对少见，来自欧洲及日本的研究调查数据显示，青年非小细胞肺癌发病率呈现出逐年上升的趋势，且其有与老年非小细胞肺癌不同的临床特点，青年非小细胞肺癌患者病情发展快，预后差。很多临床病理因素影响青年晚期非小细胞肺癌患者的预后。本文对2011年1月到2012年1月年在郑州大学第一附属医院和河南省肿瘤医院就诊的青年晚期非小细胞肺癌患者的患者临床资料，分析患者发病时的临床表现，明确患者的发病与这些因素的关系，以寻找影响患者预后的因素，提高对这些因素的重视。 点击此处 材料和方法 收集自2011年1月到2012年1月年在郑州大学第一附属医院及河南省肿瘤医院就诊的青年患者的病历，共计78例，其中59例来自郑州大学第一附院医院，19例来自河南省肿瘤医院。搜集并记录患者的临床资料包括：年龄，性别，吸烟，合并症，最初表现，PS评分，分期，淋巴结转移情况，诊断，治疗方式和反应，确诊时血红蛋白，血小板，C-反应蛋白，肝功能（谷丙转氨酶，谷草转氨酶）以及随访结果。用SPSSl7.0软件进行统计学分析。 结果： 1.随访截止时，全组78例青年晚期非小细胞肺癌患者生存时间为4～31个月，平均生存时间为14.9±6.1个月，中位生存时间为14.0个月，1年的生存率为57.7%，2年生存率为15.2%。单因素分析显示：性别，分期，BMI, PS评分,血红蛋白，血小板，CRP,治疗方式对生存期有影响（P＜0.05）。 2.青年晚期非小细胞肺癌患者的治疗方式患者生存时间有影响，对症支持治疗组的中位生存时间是6.8个月。单一治疗组的中位生存时间是14.0个月。综合治疗组的中位生存时间是19.0个月。

3.多因素COX比例风险回归分析表明：性别，分期，BMI,血红蛋白，C反应蛋白,治疗方式是影响青年晚期非小细胞肺癌患者生存的独立因素（P＜0.05）。 结论： 1.青年晚期非小细胞肺癌性别，分期，BMI,PS评分，血红蛋白，血小板，C反应蛋白,治疗方式是青年患者生存时间的影响因素。 2.总生存上，综合治疗的患者优于单一治疗组和支持治疗组。 3.青年晚期非小细胞肺癌患者的性别，分期，BMI，血红蛋白,C反应蛋白,治疗方式是影响青年晚期非小细胞肺癌患者生存的独立因素。女性、IIIb期，BMI≥25，血红蛋白≥110g/L，C反应蛋白＜5mg/L，积极采取综合治疗都是青年晚期非小细胞肺癌患者良好预后因素。
目的： 恶性淋巴瘤是头颈部继鳞状细胞癌和涎腺肿瘤后第三类最常见的肿瘤，其临床表现非常多样化，病理分型的也十分繁琐。对头颈颌面部恶性淋巴瘤临床资料和病理资料进行分类整理，分析其性别、年龄、首发临床表现、发病部位、病理类型、免疫组化检查等特点，进一步探讨临床病例特点与患者预后的关系，为本地区的头颈颌面部恶性淋巴瘤的预防、早期诊断、有效治疗及判断预后等提供一定的临床依据。 材料与方法： 收集2006年1月至2012年12月期间，在河南省军区医院病理科，经河南省抗癌协会病理会诊中心专家会诊，并经病理组织学检查和免疫组织化学检查确诊首发于头颈颌面部的恶性淋巴瘤初诊患者病例762例，并对其中的132例进行随访。所有符合纳入标准的患者均进行手术切除活检，并以最终的病理诊断结果为指标，均诊断为头颈颌面部恶性淋巴瘤。采用Epidata3.1对数据进行双录入，运用SPSS17.0软件的Kaplan-Meier法和Log rank检验进行生存分析，采用COX多因素回归分析来讨论淋巴瘤的生存相关影响因素。以α=0.

PCR法成功扩增出Cln-1 cDNA全长序列,并将其克隆至慢病毒表达载体pRNAi-u2.6,病毒包装后得pRNAi-u2.6-Cln-1慢病毒。 2.获得原代培养的肺泡Ⅰ型上皮细胞,纯度可达85%~98%,细胞总量为3-5×10~6。 3.慢病毒载体转染肺泡Ⅰ型上皮细胞后,在倒置荧光显微镜下可观察到绿色荧光,细胞转染效率>95%。Western blotting法可检测到相应目的蛋白的表达,24hr后Cln-1表达开始升高,36hr的表达量比转染前表达量显著升高,72hr达到峰值。

4. LPS干预AT-1细胞后,在2hr及4hr时相点,高表达Cln-1实验组细胞上清液TNF-α、IL-6的表达水平均显著高于对照组,P<0.05。EMSA法测定核蛋白的表达结果显示:实验组NF-κB的表达均显著高于对照组,P0.05。 5. LPS干预c57BL6小鼠后,在2hr及4hr时相点,高表达Cln- 1实验组小鼠血清TNF-α、IL-6的表达均显著高于对照组,P
促红细胞生成素(Erythropoietin,Epo)是一种低氧诱导的谱系特异性的内分泌激素,可调节红细胞的形成,临床上广泛应用于各种原因引起的贫血,如终末期肾病、获得性免疫缺陷综合征以及需要化疗的非造血系统恶性肿瘤。后来研究发现Epo受体在心血管系统有着广泛的分布,基础研究揭示Epo可保护缺血再灌注心肌和限制心肌梗死的范围。有关Epo对心肌细胞肥大影响的报导在国内外非常有限。本研究以Epo作为干预因素,离体培养新生大鼠心肌细胞作为研究对象,以明确Epo对心肌肥大的影响并初步探讨其肥厚相关的信号通路。 查找更多 第一部分新生大鼠心肌离体培养和Epo刺激后形态学观察 目的:1)取得稳定的新生大鼠心肌细胞离体培养模型,cTnI免疫组化染色观察Epo刺激不同时间对于心肌细胞大小的影响;2)观察Epo刺激引起的细胞超微结构改变。

方法:取新生大鼠原代心肌细胞经10%FBS的DMEM培养液培养24h,更换为2%FBS低血清培液同步化24h。实验分为:空白对照组、AngⅡ组和Epo组。AngⅡ终浓度为1×10~(-6)M;Epo终浓度为10U/ml。于24h、48h和72h固定各组细胞,cTnI免疫组化染色,光镜下测量心肌细胞面积。电镜观察心肌细胞超微结构所用的低血清培养液含0.1%FBS,实验分组同前。于24h、48h和72h固定各组细胞,电镜下观察各组心肌细胞超微结构。 结果:1)干预24h,对照组心肌细胞面积2135.6±524.8μm~2,AngⅡ干预组3202.3±661.2μm~2,Epo组2586.2±165.3μm~2,AngⅡ组相比对照组和Epo组,心肌细胞明显增大,P＜0.05。干预48h,对照组心肌细胞面积1844.5±323.3μm~2,AngⅡ干预组3321.0±428.8μm~2,Epo组3318.9±321.3μm~2,AngⅡ组和Epo组相比对照组,心肌细胞明显增大,P＜0.05;AngⅡ组与Epo组相比,差别无统计学意义。干预72h,对照组心肌细胞面积2213.90±149.5μm~2,AngⅡ干预组3222.20±225.3μm~2,Epo组3317.20±196.1μm~2,AngⅡ组和Epo组相比对照组,心肌细胞明显增大,P＜0.05;AngⅡ组与Epo组相比,差别无统计学意义。Epo干预48h和干预72h相比24h组,细胞面积明显增大,P＜0.05。2)电镜观察,培养72h,对照组心肌细胞肌丝溶解,细胞器大多破坏;AngⅡ组和Epo组细胞核不规则,核膜凹陷,核仁较清晰,染色质浅;线粒体数量增多,肿胀;内质网以及高尔基器等与合成分泌有关的细胞器发达,72小时观察到细胞内出现亚细胞结构的空泡化改变。 ZD6474订单 结论:Epo刺激可使心肌细胞增大,使心肌细胞出现肥厚的亚细胞结构改变。 第二部分Epo对心肌细胞蛋白激酶活性及肥大相关基因的影响

目的:考察Epo刺激后细胞外信号调节激酶ERK的激活和心肌细胞肥大相关基因ANP、BNP、c-fos Angiogenesis抑制剂 mRNA的表达量的变化。 方法:取新生大鼠原代心肌细胞经10%FBS的DMEM培养液培养24h,更换为0.1%FBS低血清培液同步化24h,加入Epo干预。1)Epo终浓度为10U/ml,分别在0 min(对照组)、10min、15min、30min、60min和120min终止干预,提取心肌细胞总蛋白,Western blot检测心肌细胞磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)含量;2)Epo终浓度为0 U/ml(对照组)、5 U/ml、10 U/ml、100 U/ml,干预30min,提取心肌细胞总蛋白,Western blot检测心肌细胞p-ERK1/2含量;3)实验分两组,对照组和Epo组,Epo10U/ml干预30min,提取心肌细胞总RNA,RT—PCR法测定两组c-fos mRNA表达量;同样Epo和对照组分组干预2h,RT—PCR法测定ANP mRNA和BNP mRNA表达量。 结果:1)Epo10U/ml干预心肌细胞后p-ERK2表达随时间出现先升高后下降的变化,30min时达到高峰,与干预前和干预后120min相比,P＜0.05;p-ERK1在Epo干预后也观察到先升高后降低的趋势。2)Epo不同浓度干预心肌细胞,随Epo干预浓度增大,p-ERK2水平升高,10 U/ml及100 U/ml浓度干预组与对照组相比,差别有统计学意义(P＜0.05)。p-ERK1在Epo处理后也观察到随浓度升高而升高的趋势。3)Epo10U/ml干预心肌细胞,RT-PCR结果显示,30min c-fosmRNA表达量与对照组相比差异不明显,2h ANP mRNA和BNP mRNA表达量和对照组相比,明显升高,P＜0.05。 结论:1)Epo刺激使心肌细胞p-ERK1/2呈时间相关性和浓度依赖性升高;2)要观察p-ERK1/2变化,可取Epo10U/ml刺激30min做为最佳观察条件;2)Epo刺激促进了心肌肥大相关基因表达。 第三部分Epo引起心肌细胞肥大反应信号通路初探 目的:1)观察Epo刺激对心肌AGT mRNA表达量的影响;2)初步探讨心肌中Epo-ERK信号通路和RAS系统之间是否存在相互关系。 方法:取新生大鼠原代心肌细胞经10%FBS的DMEM培养液培养24h,更换为0.

5 h 再以100 nmol/L FⅦa刺激 LOVO 细胞8 h 及100 nmol/L FⅦa刺激 TFRNAi LOVO 细胞系8 h Everolimus数据表 后 MMP-7mRNA 水平。结果 Northern blot 结果显示 FⅦa刺激MMP-7mRNA 表达存在时间、浓度依赖性;Western blot 测定 FⅦa刺激 p-P38表达存在时间依赖性。应用 P38通路阻断剂 SB203580后 MMP-7mRNA 基因表达下降59.2%,转染组织因子干扰质粒的LOVO 细胞中,MMP-7mRNA 的表达水平较 LOVO 细胞组下降48%。结论活性Ⅶ因子与组织因子结合诱导体外大肠癌 LOVO 细胞系表达 MMP-7mRNA,其机理可能与 P38通路有关。
目的探讨地塞米松(Dex)对血管内皮细胞11β羟基类固醇脱氢酶1(11β-HSD1)mRNA表达的影响,以及p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)和糖皮质激素(GC)受体在其中所起的作用。方法先给予不同浓度(10-9、10-8、10-6、10-5、10-3mol/L)的Dex与血管内皮细胞共同培养24h,应用RT-PCR测定各浓度组中11β-HSD1

mRNA水平,其中不接触Dex的细胞为正常对照组;采用p38MAPK特异性抑制剂SB203580(10-2mol/L)及GC受体特异性抑制剂RU486(10-6mol/L)与细胞作用2h后,再加入Dex(10-6、10-3mol/L)作用24h,RT-PCR测定11β-HSD1

mRNA水平,其中仅用Dex处理的细胞作为阴性对照组,不加干扰因素的细胞作为正常对照组。结果Dex(10-9、10-8、10-6、10-5、10-3mol/L)各个浓度组中11β-HSD1 mRNA/β-actin mRNA(分别为0.120±0.040、0.140±0.020、0.280±0.030、0.360±0.060、0.460±0.040)均不同程度高于正常对照组(0.030±0.004,P0.05);而RU486组中11β-HSD1 selleck化学药品 mRNA/β-actin mRNA值(分别为0.21±0.02、0.36±0.05)与阴性对照组相比显著降低(P<0.05)。结论Dex可能部分通过GC受体诱导11β-HSD1基因转录增强,而与p38MAPK通路的激活无关。
目的探讨JNK/p38 MAPK在β淀粉样蛋白多肽片段25~35(Aβ25~35)诱导的阿尔茨海默病(AD)样胎鼠皮层神经元Tau蛋白过度磷酸化中的作用。方法应用蛋白免疫印迹和免疫细胞化学染色的方法,观察Tau蛋白磷酸化和JNK/p38丝裂原活化的蛋白激酶(JNK/p38 有 MAPK)的表达情况。结果凝聚态Aβ25~35(20μmol/L)作用于皮层神经元12h,Tau蛋白Ser396、Ser199/202、Thr205位点的磷酸化水平明显增高,同时JNK/p38

MAPK的总量及其活性形式-磷酸化JNK/p38 MAPK的蛋白表达水平也增加。结论Aβ25~35可通过激活JNK/p38 MAPK使Tau蛋白的磷酸化水平增高。
目的:观察活化凝血Ⅶ因子(actived factorⅦ,FⅦa)对大肠癌LoVo细胞系表达基质金属蛋白酶-7(ProMMP-7)的影响,探讨其可能的组织因子信号转导通路。方法:(1)用Western blot检测100nmol/L FⅦa刺激LoVo细胞系不同时间点及不同浓度FⅦa刺激LoVo细胞系12h后细胞ProMMP-7蛋白水平;用Western blot检测5mg/L组织因子(tissue factor,TF)抗体预孵育LoVo细胞系0.5h后再给予100nmol/L FⅦa刺激12h后细胞ProM-MP-7蛋白水平。(2)观察用100nmol/L FⅦa刺激时丝裂原激活蛋白激酶(MAPKs)各亚通路信号蛋白(包括细胞外信号调节激酶ERK1/2,丝裂原激活蛋白激酶P38及c-Jun-N末端蛋白激酶JNK)磷酸化水平变化。(3)在FⅦa刺激前0.5h分别加入ERK1/2,P38和JNK信号通路特异阻断剂PD98059,SB203580和SP600125,培养12h后检测细胞ProMMP-7蛋白的变化。结果:(1)FⅦa可刺激LoVo系细胞表达ProMMP-7并呈时间依赖性和剂量依赖性,在刺激的12h左右ProMMP-7达峰值,是正常对照组的5.5±0.6倍(P=0.006);用TF抗体预处理的LoVo细胞系,其FⅦa上调ProMMP-7表达的作用被完全阻断。(2)用100nmol/L FⅦa刺激LoVo细胞5min时,MAPKs磷酸化活性蛋白p-ERK1/2和p-P38表达水平开始增加,至10min时达峰值(分别为对照组的2.2±0.3倍和3.9±0.5倍,P值分别为0.02和0.01),存在时间效应关系,而p-JNK活性无改变(为对照组的1.1±0.1倍)。(3)ERK1/2通路阻断剂PD98059及P38通路阻断剂SB203580可部分减少FⅦa上调LoVo细胞系表达ProMMP-7的效应,分别降低了32%±5%(P=0.01)和61%±10%(P=0.

脑缺血再灌注大鼠模型缺血半暗区脑组织及血液中肿瘤坏死因子(TNF-α)含量明显升高,眼针可使其表达下调。 8.本课题揭示了眼针治疗缺血性脑血管病可能是通过抑制凋亡信号传导,从而抑制细胞凋亡,挽救缺血半暗区,从而对脑缺血再灌注损伤起保护作用。
目的 由于目前尚无特异有效的治疗方法,急性肺损伤(Acute

lung injury,ALI)和急性呼吸窘迫综合征(Acute respiratory distress syndrome,ARDS)的死亡率一直居高不下。最近,肾素-血管紧张素系统(Renin-angiotensin system,RAS)引起关注,有证据提示RAS与ALI/ARDS存在重要关联。为系统研究RAS与ALI/ARDS的关系,我们首先建立盲肠结扎穿孔术(Cecal 寻找更多 ligation and puncture,CLP)诱导的ALI/ARDS动物模型,以观察ALI/ARDS中RAS系统的变化规律,并通过干预RAS系统观察动物病情和预后的改变;在此基础上,进一步研究RAS药物氯沙坦干预ALI/ARDS炎症反应通路的机制;同时,还观察ALI/ARDS模型的血管内皮细胞超微结构,并在体外实验验证氯沙坦干预人脐静脉内皮细胞(HUVEC)凋亡的作用。期望通过这一系列的实验,为ALI/ARDS治疗探索新的途径。 研究内容和方法 第一部分: ALI/ARDS动物模型中RAS系统的变化 建立CLP诱导的ALI/ARDS动物模型,在手术后18小时观察小鼠的症状、血气分析、肺湿/干重比(W/D)和肺组织病理等指标;采用免疫组织化学、蛋白质免疫印迹法(Western blotting)和放射免疫等方法研究ALI/ARDS动物模型中RAS系统几种关键酶(ACE、ACE2和AngⅡ)的变化规律。 第二部分:RAS药物对ALI/ARDS的影响 小鼠ALI/ARDS模型复制成功后,分别给小鼠腹腔注射卡托普利(ACE拮抗剂)、重组小鼠ACE2(recombinant mouse ACE2,rm ACE2)和氯沙坦(AngⅡ的AT1受体阻滞剂),观察它们对ALI/ARDS动物的影响,在此基础上,着重观察RAS下游阻滞剂氯沙坦对ALI/ARDS的治疗效果。 第三部分:氯沙坦治疗ALI/ARDS的可能机制 收集假手术组、手术组和氯沙坦组的小鼠肺组织,分别提取肺组织细胞胞浆蛋白和胞核蛋白,采用Western blotting方法检测胞浆IκB-α表达的变化,采用电泳迁移率变动分析实验(Electrophoretic Mobility 也许 Shift Assay,EMSA)检测胞核中NF-κB的表达变化;另外提取肺组织总蛋白,采用Western blotting方法检测肺组织中丝裂原活化蛋白激酶(Mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路的变化(包括ERK1/2、p38和JNK)。 第四部分:氯沙坦对人脐静脉内皮细胞凋亡的影响 先用透视电镜观察ALI/ARDS肺血管内皮细胞的变化,提示ALI/ARDS病理变化中存在血管内皮细胞的变化;在此基础上,在体外培养原代人脐静脉内皮细胞(HUVEC),培养成功后先用AngⅡ刺激细胞,采用流式细胞术观察细胞的凋亡率;然后再加入氯沙坦与AngⅡ共同作用于HUVEC,再次测定细胞的凋亡率,评价氯沙坦对血管内皮细胞的保护作用。

研究结果 第一部分: ALI/ARDS动物模型中RAS系统的变化 1、CLP能够诱导小鼠在手术后18小时出现典型的ALI/ARDS改变,手术组较假手术组小鼠肺水含量明显增多(W/D:6.08±0.64 vs 4.38±0.93,P
目的评价中药降压胶囊对老年单纯收缩期高血压(EISH)的疗效与作用机制。同时,探讨病证结合治疗模式的临床效应与作用途径。 方法(1)检索古代相关文献、近十年来老年高血压及老年单纯收缩期高血压的文献资料,整理分析西医、中医及中西医结合领域对老年高血压及老年单纯收缩期高血压的研究现状。(2)采用多中心、随机、双盲、对照的研究设计方法,将符合纳入病例标准的270例EISH患者分为三组,即中药降压胶囊组(简称中药组),降压胶囊联合尼莫地平组(简称联合组)和西药尼莫地平组(简称西药组)各90例。共241例患者完成试验,29例脱落,脱落率为10.7%,其中中药组脱落10人,联合组脱落14人,西药组脱落5人。试验疗程为4周,分析评价各组对患者临床症状、降低血压及改善生活质量的作用;观察各组治疗前后尿免疫球蛋白(IgG)、尿微量白蛋白(mALB)、β_2微球蛋白(β_2-MG)、转铁蛋白(TRF)和尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)五项联检指标的变化情况,分析各组对早期肾损害的防治作用。观察各组治疗前后血清一氧化氮(NO),血浆内皮素-1(ET-1)、血栓素B_2(TXB_2)、6-酮-前列腺素F_(1α)(6-Keto-PGF_(1α))以及血清超敏C反应蛋白(hs-CRP)含量变化,探讨药物治疗作用的可能机制与途径。(3)以自发性高血压大鼠(SHR)模型为研究对象,将SHR66只,随机分为6组(每组11只):模型组(给予等量纯净水)、降压胶囊小剂量组(2g生药/kg,简称中药小剂量组)、降压胶囊大剂量(4g生药/kg,简称中药大剂量组)组、降压胶囊小剂量(2g生药/kg)+尼莫地平(5mg/kg)组(简称联合小剂量组)、降压胶囊大剂量(4g生药/kg)+尼莫地平(5mg/kg)组(简称联合大剂量组)、尼莫地平(5mg/kg)组(简称西药常量组)。连续灌胃8周。观察血压、左室重量指数(LVMI)、内皮素-1(ET-1)、降钙素基因相关肽(CGRP)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、心肌血管紧张素1型(AT1)受体蛋白及mRNA的表达情况。

SP600125分子量 结果(1)老年单纯收缩期高血压属老年高血压的一个常见类型,具有随年龄增长收缩压逐渐升高、波动不稳、易发生心血管事件并严重影响生活质量的特点。中医药对老年高血压有较好的降压作用,尤其在改善症状、提高生活质量等方面有突出优势,但中西医结合的治疗模式,能明显取得优势互补临床效应。目前尚缺乏大样本符合循证医学原则治疗EISH的中医或中西医结合研究证据。 (2)降压胶囊治疗后能明显降低EISH收缩压,联合尼莫地平治疗有明显协同降压效应(P＜0.05),且联合用药降低收缩压作用明显优于单纯中药或单纯的西药治疗(P＜0.05)。降压胶囊对阴虚阳证候患者的降压效应明显优于非阴虚阳亢证候患者(P＜0.05):中西联合用药对阴虚阳亢证候患者的降压作用,又明显优于单纯中药或西药两组阴虚阳亢证候患者(P＜0.05)。降压胶囊及其联合尼莫地平两组对EISH患者24h收缩压及白天收缩压均较治疗前明显降低(P＜0.05):而联合用药对患者夜间收缩压也有明显降低(P＜0.05),同时,对白天收缩压的降低作用既明显优于单纯中药和单纯的西药组(P＜0.05)。降压胶囊及其联合尼莫地平两组均能明显改善患者的临床症状积分值(P＜0.

56mmol/L)DMEM培养液进行培养。高糖组采用高糖(葡萄糖浓度:25mmol/L)DMEM培养液进行培养。(1)对照组(NC组、HC组);(2)缺氧/复氧组(NH/R组、HH/R组);(3)七氟烷后处理组(NS-Post组、HS-Post组);(4)七氟烷预处理联合后处理组(NS-Pre+S-Post组、HS-Pre+S-Psot组);(5)SB216763组(NSB组、HSB组);(6)二甲基亚砜组(N-DMSO组、H-DMSO组)。复氧结束后对各组细胞存活率、细胞凋亡率、培养液LDH活性、磷酸化GSK-3β(P-GSK-3β)水平进行检测。结果:与NH/R组相比,NS-Post组、NS-Pre+S-Post组细胞存活率升高,细胞凋亡率降低,培养液LDH活性降低,P-GSK-3β水平上调(P0.05)。结论:七氟烷预处理联合后处理亦无法对高糖培养心肌细胞缺氧/复氧损伤发挥保护作用,GSK-3β参与了高糖所致七氟烷心肌保护作用弱化的过程。
目的2型糖尿病(Type 2 diabetes mellitus,T2DM)是一种以胰岛抵抗和胰岛素分泌不足为特点的全身性代谢紊乱疾病,其患者发生心血管事件的可能性较常人显著提高。心脏的心肌缺血再灌注损伤(Myocardial

Selleckchem Birinapant Ischemia reperfusion injury,MIRI)是指已有心肌缺血的部位发生再灌注时,产生更加严重的心肌损伤现象。舒芬太尼是一种对μ受体高度选择的阿片类激动剂,使用舒芬太尼后处理可通过影响磷酸化糖原合成激酶3β(Glycogen synthase kinase 不 3β,GSK3β)的表达水平有效减轻缺血再灌注对心肌的损伤作用,但舒芬太尼后处理对2型糖尿病再灌注心肌的保护作用则大幅削弱。有报道指出,在分子水平,通过使用组蛋白去乙酰化酶抑制剂辛二酰苯胺异羟肟酸(Suberoylanilide hydroxamic acid,SAHA)调节组蛋白乙酰化与去乙酰化修饰可有效影响糖代谢。langendorff离体灌注模型是利用离体心脏通过体外灌注,在排除神经体液干扰的情况下对心脏生理进行研究,而且具备了良好的稳定性、可重复性、廉价、操作简单等诸多优点。本研究将采用langendorff离体心脏灌注模型进行观察并探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂辛二酰苯胺异羟肟酸在2型糖尿病因素削弱舒芬太尼后处理心肌保护中的作用。方法使用清洁级雄性SD大鼠,体重250~300g,以随机数字表法将大鼠分成5组(n=6),分别为缺血再灌注组(IR组)、1nmol/l舒芬太尼后处理组(1SP组)、3nmol/l舒芬太尼后处理组(3SP组)、10nmol/l舒芬太尼后处理组(10SP组)、30nmol/l舒芬太尼后处理组(30SP组),探讨离体灌注模型下舒芬太尼后处理最佳剂量。大鼠经麻醉后取下心脏置于langendorff离体灌注模型中依次接受30min平衡灌注、30min无灌注、舒芬太尼后处理再灌注15min、再灌注105min,并在以下时间段记录左室发展压(Left

ventricular developed pressure,LVDP),心率(Heart rate,HR)、左室内压最大上升速率(+dp/dtmax)、左室内压最大下降速率-dp/dtmax:平衡灌注期末,再灌注开始后30min、60min、120min。根据实验结果选择舒芬太尼后处理最佳剂量用于后续实验。使用清洁级雄性SD大鼠,体重250~300g,分成糖尿病组(DM组)和非糖尿病组(NDM组),每组再以随机数字表法将大鼠分成5组(n=8),分别是:假手术组(SHAME组)、缺血再灌注组(IR组)、舒芬太尼后处理组(SP组)、SAHA预处理组(SA组)、SAHA预处理+舒芬太尼后处理组(SASP组)。糖尿病各组使用高脂饲料喂养4周后,采用腹腔注射链脲佐菌素35 CP-673451购买 mg/kg的方法制备2型糖尿病模型,再高脂饲料喂养4周;非糖尿病组普食喂养4周后,进行腹腔注射50

mg/kg枸橼酸钠,再行普食喂养4周。NDM-S组和DM-S组进行180min持续灌注。其余各组接受平衡灌注30min,其后停止灌注30min,再灌注120min。NDM-SP组、NDM-SASP组、DM-SP组、DM-SASP组在再灌注起始时分别接受含舒芬太尼K-H液灌注15min。试验完毕每组随机取4只大鼠心脏计算左心室面积(Left ventricular size,LV)、梗死区面积(Infarct size,IS)、IS/LV比值。每组剩余4只大鼠心脏取心尖部组织,采用Western blot法检测磷酸化GSK3β的表达水平。结果舒芬太尼后处理组10SP组、30s SP组的LVDP在再灌注30min、120min高于IR组(P<0.05)。30SP组HR在再灌注开始后30min、60min、120min等时刻低于IR组和10SP组(P<0.05)。1SP组、3SP组、10SP组、30SP组心肌梗死面积均低于IR组(P<0.05)。大鼠血流动力学情况NDM组大鼠与DM组在平衡灌注30min末期血流动力学差异有统计学意义(P<0.05)。NDM组中,NDM-S组、NDM-SASP组和NDM-SP组的再灌注开始后各时刻血流动力学指标相比于NDM-IR组差异有统计学意义(P<0.05)。DM-SASP组再灌注开始后血流动力学指标相比于DM-IR组差异有统计学意义(P<0.05)。大鼠心肌梗死面积NDM-SASP组、NDM-SP、NDM-SA组心肌梗死面积低于NDM-IR组(P<0.05)。DM-SASP组心肌梗死面积低于DM-IR组与DM-SP组(P<0.

7倍(P＜0.05),氟伐他汀和缬沙坦治疗组CTGFmRNA表达分别下降20%,28%(P＜0.05),联合治疗组下降35%(P＜0.05)。

5、Western blot印迹检测结果:糖尿病组大鼠心肌组织TGF-β1、CTGF蛋白表达较正常对照组明显增加,作为ECM的主要成分胶原蛋白Ⅰ和胶原蛋白Ⅲ表达明显增加(P＜0.01);各个治疗组胶原蛋白表达均有所下降(P＜0.05),联合治疗组优于单独治疗组。 有 结论: 1、CTGFmRNA和TGF-β1过度表达,参与了糖尿病大鼠心肌纤维化的过程,导致左室舒张功能的异常。 2、缬沙坦和氟伐他汀均能够抑制CTGF及TGF-β1的表达,使得Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原合成明显减少,抑制心肌纤维化,从而改善心功能。两药联合治疗对糖尿病心肌组织起到协同保护作用。
前言 缺血再灌注(ischemia/reperfusion;Ⅰ/R)损伤是组织器官在缺血的基础上恢复血流后损伤反而加重的现象,是内、外科常见的一种损伤。肠道对缺血最敏感的组织器官之一,肠缺血再灌注常见于严重创(烧)伤、休克、感染、肠移植、新生儿缺血坏死性肠炎及危重病患者,肠缺血再灌注(intestinalischemia/reperfusion;Ⅱ/R)常常原发或继发性肠道疾病,是临床众多疾病的病理生理基础,是引发脓毒症及多器官功能衰竭的始动因素之一。缺血再灌注肠损伤后肠黏膜屏障功能受损,通透性增加,促使肠道细菌及内毒素移位、大量氧自由基生成、炎性细胞浸润增加,细胞因子和炎症介质的失控性释放,不仅引起肠道局部损伤,而且造成远隔器官损害,尤其是肺损伤,诱发全身炎症反应综合症及多器官功能衰竭,病情凶险、严重,在临床上具有极高的发病率和病死率。由于肠缺血再灌注肠损伤在各类临床疾病中均可能原发或继发性发生,对于其发病机制的探讨一直是学者们的研究热点。

丝裂原活化蛋白激酶(Mitogen activated protein kinases;MAPKs)是真核细胞内一组高度保守的丝/苏氨酸蛋白激酶,目前已知MAPKs有c-Jun氨基末端激酶(JNK)、细胞外信号蛋白激酶(ERK)和p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)三种主要形式。在损伤应激、氧自由基、感染和炎症等刺激条件下,细胞内MAPKs蛋白的苏氨酸/酪氨酸双位点磷酸化反应从而被顺序激活,通过细胞内信号传递级联效应使基因表达发生变化,在调节组织炎症反应、细胞增殖与凋亡和免疫反应等病理生理过程发挥重要作用。由于各种MAPK本身和其作用底物各有特点,MAPKs三个主要成员成具有相对独立而又相互联系的信号传递网络,三种形式的MAPKs执行不同的生理功能。有研究表明,MAPKs参与了缺血再灌注肠损伤的发病过程,但是,在肠缺血再灌注早期,有关MAPKs蛋白表达及活化过程尚不清楚,MAPKs蛋白及其下游信号通路参与肠缺血再灌注损伤的机制尚未阐明。采用夹闭肠系膜上动脉方法造成小鼠肠缺血再灌注损伤,本实验第一部分观察损伤后肠组织MAPKs及其下游信号通路的变化,探讨小肠组织MAPKs活化及其介导凋亡信号通路在小鼠小肠缺血再灌注损伤中的可能作用。 一般 肺脏不仅是气体交换的器官,也是一些细胞因子和激素生与灭活的场所,经过各种途径入血的毒素、内源性炎性介质等物质经静脉回流后都要进入肺循环,加上肺脏本身在解剖结构上相对较脆弱,肺循环具有面积大、流速慢、压力低的特点,使肺脏实质细胞暴露在毒性物质的机会和时间增加,因此,在诸多脏器中,肺脏最易受到各种致病因素的打击,也是机体失控炎性损害的主要靶器官之一。尽管目前对肠缺血再灌注肺损伤进行大量的研究,但是其分子机理尚未完全阐明。肠缺血再灌注导致肠粘膜损,肠屏障功能破坏,引起细菌/内毒素移位,氧自由基、细胞因子及炎性介质等有害物质释放并进入全身循环,导致远隔器官损害;同时,它们又都是刺激MAPKs信号通路活化的有力因素。我们由此推测,肠缺血再灌注可能通过激活肺组织MAPKs信号通路活化,参与肠缺血再灌注肺损伤的发生。肺损伤特征性主要表现为肺部剧烈炎症反应,炎症细胞浸润和炎性细胞因子合成、释放增加,其中细胞因子TNF-α、IL-1β在肺组织炎症反应中起着关键作用。第二部分通过观察p38 MAPK信号通路活化在肠缺血再灌注肺损伤的活化过程,使用特异性p38 MAPK抑制剂SB239063抑制p38 MAPK蛋白活性,探讨其在小肠缺血再灌注肺损伤中的作用及可能机制。 第一部分MAPKs蛋白活化在小肠缺血再灌注损伤的作用

目的:观察小肠缺血再灌注后小肠组织MAPKs蛋白活化过程及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和活化型Caspase-3的变化,探讨MAPKs活化及其介导凋亡信号通路在小肠缺血再灌注损伤中的可能作用。 方法:采用夹闭肠系膜上动脉(superior mesenteric artery;SMA)后再灌注造成小肠缺血再灌注损伤小鼠动物模型,经腹腔注射1%戊巴比妥钠50mg.kg~(-1)麻醉。(1)8-10周龄的雄性C57 BL/6小鼠随机分为肠缺血30min、40min、50min和60min,每组8只,观察14d内肠缺血再灌注后小鼠生存率。(2)小鼠随机分为假手术组(sham),肠缺血再灌注处理组(Ⅱ/R):分再灌注即刻(0)、0.5h、1h、4h、6h和12h不同再灌注时间组。夹闭SMA BLU9931体内 40min再灌注造成小鼠Ⅱ/R模型,假手术组同样进行开腹手术但不夹闭动脉。假手术后及肠缺血再灌注后不同时间相处死小鼠取小肠标本,回肠组织10%中性福尔马林液固定待病理检查,用Chiu双盲病理评分,评价肠损伤情况程度;原位末端标记(TUNEL)法对肠组织凋亡细胞进行定位检测;全细胞裂解法提取小肠总蛋白,Western blot蛋白免疫印迹法检测小肠组织JNK、ERK和p38 MAPK蛋白,磷酸化JNK、ERK和p38 MAPK蛋白,以及与凋亡相关蛋白Cleaved-caspase-3、Bcl-2和Bax表达水平,以磷酸化MAPKs蛋白代表其活化水平。 结果:(1)肠缺血30 min小鼠生存率100%,随着肠缺血时间的增加,动物生存率逐渐降低,肠缺血60 min动物生存率仅约30%。(2)肠组织大体表现及病理评分结果均显示,肠缺血40 min后再灌注早期肠损伤严重,尤以再灌注1h肠组织病理损伤最重,至12h肠组织结构基本恢复正常;TUNEL法定位凋亡细胞结果表明,凋亡细胞分布广泛,包括黏膜、黏膜固有层,黏膜下层,甚至肌层均存在凋亡细胞,涉及细胞成分多样,以肠上皮细胞凋亡为主。肠缺血再灌注损伤细胞凋亡与坏死并存。(3)肠缺血再灌注早期促凋亡的活化型caspase-3蛋白表达增加,与假手术组比较,再灌注0.5h、1h小肠组织活化型caspase-3明显增加(P＜0.01),与小肠组织病理损害时相过程基本一致,同时抗凋亡Bcl-2蛋白明显下调(P＜0.

986±1.784,Ptch mRNA 11.272±0.295,Smo mRNA 10.185±0.716),明显高于同期正常对照组(P
Hedgehog信号通道广泛地存在于人的体内,它主要参与了胚胎的发育与形成。在成年人体内,除了参与机体组织的维持以及修复外Hedgehog信号通道总是处于抑制状态。当它异常激活时会形成一系列的疾病,例如基底细胞癌以及髓母细胞瘤、乳腺癌、结肠癌、卵巢癌、前列腺癌等。除了环巴胺及其类似物外,已经发现了一些对Hedgehog信号通道具有抑制作用的小分子化合物,特别是GDC-0449于2012年1月被FDA批准用于治疗基底细胞癌,证明Hedgehog信号通道是可以用于治疗癌症的一个新靶点。本文主要综述了已经报道的对Hedgehog信号通道具有抑制作用且具有代表性的小分子抑制剂的结构以及它们相关的生物数据。
目的检测人肺癌组织中的Hedgehog信号通路主要成分SHH、Gli-1和血管内皮生长因子(VEGF)的表达,探讨其与不同临床病理特征的相关性。方法选取2013年3—10月广西医科大学第一附属医院临床病理明确诊断为肺癌,并行外科手术治疗的患者72例,取癌组织及癌旁组织(距离癌组织5

cm),另选取同时期良性肺病变组织30例。收集肺癌患者临床病理资料,免疫组织化学法检测SHH、Gli-1和VEGF的表达,实时荧光定量PCR检测其mRNA的表达。结果肺癌组织中SHH阳性表达率为73.6%(53/72),癌旁组织为16.7%(12/72),良性肺病变组织为6.7%(2/30),差异有统计学意义(χ2=64.819,P<0.05)。不同性别、年龄、吸烟史、分化程度、术前放化疗肺癌患者Gli-1阳性表达率比较,差异均有统计学意义(P<0.05);不同淋巴结转移、远处转移、TNM分期、早晚期、分化程度、病理类型、术前放化疗肺癌患者VEGF阳性表达率比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。肺癌组织中SHH、Gli-1和VEGF的表达与mRNA相对表达量均呈正相关(P
肺癌是当今世界上严重威胁人类健康与生命的一种恶性肿瘤,其发病率在逐年增加。最新流行病学数据显示,我国肺癌发病率已占据恶性肿瘤发病率的第1位。尽管在过去的数十年间对肺癌进行了较为深入的研究,但肺癌患者的早期诊断及远期存活并无显著改善。而非小细胞肺癌(NSCLC)占所有肺癌病例的80%~85%,并且大部分患者就诊时已属于中晚期,疗效不佳。近年来研究发现Sonic
Hedgehog(Hh)信号通路在正常人类胚胎发育及胚胎形成后细胞的分化过程中发挥着重要的作用。研究表明,Hh信号通路异常激活与胰腺癌的发生、发展密切相关。深入探讨Hh信号通路转导机制及其与胰腺癌的关系,有望为胰腺癌的早期诊断和分子靶向治疗提供新的思路。
目的本实验旨在研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古霉素A(TSA)联合Hedgehog(Hh)信号通路阻断剂环巴胺(CYA)干预对胰腺癌PANC-1细胞凋亡的影响并初步探讨其可能机制。方法采用CCK8方法检测曲古霉素A、环巴胺作用24

VE-821浓度 MK-2206制造商 h对PANC-1细胞50%抑制浓度(IC50)。用Hochest 33258荧光染色观察曲古霉素A、环巴胺单独及联合处理PANC-1细胞24 h后凋亡;荧光定量聚合酶链式反应(Q-PCR)检测Hedgehog信号通路关键分子及凋亡相关基因mRNA表达的变化;蛋白免疫印迹法检测凋亡相关蛋白(Bcl-2、活化胱天蛋白酶-3,活化胱天蛋白酶-8,活化胱天蛋白酶-9)及Hedgehog通路关键分子蛋白(Gli1、Smo、Ptc-1)表达的改变;细胞免疫荧光标记法检测Gli1蛋白表达的变化。结果 所以 Hochest 33258染色显示,曲古霉素A及环巴胺均可诱导胰腺癌PANC-1细胞凋亡,24 h IC50分别为(0.51±0.07)μmol·L-1和(33.6±2.3)μmol·L-1,两者联合指数为0.835,具有低度协同作用。曲古霉素A及环巴胺干预后Bcl-2 mRNA表达下降,Bax mRNA表达上调,尤以联合组明显。曲古霉素A 0.5μmol·L-1干预可抑制Gli1 mRNA的表达,联合环巴胺20μmol·L-1后对Hedgehog通路的抑制效应进一步增强,降低Gli1、Smo mRNA表达量,上调Gli3 mRNA的表达。Western印迹结果显示,曲古霉素A

0.5μmol·L-1、环巴胺20μmol·L-1单独及联合处理PANC-1后,凋亡相关蛋白胱天蛋白酶3、胱天蛋白酶8和胱天蛋白酶9活化程度进一步上升,凋亡抑制因子Bcl-2的表达明显下降,Hedgehog信号关键分子蛋白Gli1、Smo、Ptc-1表达均明显下降,以联合组最为明显。细胞免疫荧光结果也显示Gli1表达明显下降。结论曲古霉素A、环巴胺可协同抑制Hh通路,诱导胰腺癌PANC-1细胞的凋亡。
肺癌干细胞的发现及对其生物学特性的认识,为肺癌的研究及临床治疗提供了新的思路。文章就肺癌干细胞的发现、来源、表面标志、调控机制及相关治疗策略的研究进展作一综述。
信号转导是各类信号通过细胞膜或胞内信使分子引起细胞基因表达改变的过程。因此,当细胞信号转导过程发生障碍或异常,必然会导致细胞生长、分化、代谢及生物学特征异常,从而引起各种疾病甚至肿瘤的发生。目前已知与肺癌相关的细胞信号转导通路有Wnt、Notch、酪氨酸激酶和Hedgehog信号转导通路。现将近年来的研究进展作一综述。
干细胞是一类具有自我更新和多向分化潜能的细胞群体。越来越多的研究表明,干细胞异常分化可导致肿瘤。并且在肿瘤组织中存在部分细胞,它们具有干细胞的多种特性,被称为肿瘤干细胞(cancer stem cell,CSC)。肿瘤干细胞理论的提出,为肿瘤的治疗与研究提供了新的方向。本文综述了正常干细胞异常分化、肿瘤干细胞的存在和特性、肿瘤干细胞靶向治疗的前景及所面临的问题等方面的研究进展。
Hedgehog信号通路是近年来抗肿瘤靶向治疗药物研究的一个新热点.本研究以4-(嘧啶-2-氨基)苯甲酰胺为母核,基于先导化合物1的构效关系,设计并合成了14个未见文献报道的4-(嘧啶-2-氨基)苯甲酰胺类Hedgehog信号通路抑制剂,并进行了初步的抗Hedgehog信号通路活性筛选.结果表明:所合成的化合物均表现出较好的Hedgehog信号通路抑制活性,其中化合物8e的活性最好,IC50为5.

01),但无剂量依赖性。3、MTT法检测结果显示：不同浓度的各信号通路阻断剂分别干预HSC-T6细胞,各实验组HSC-T6细胞的增殖率均低于对照组,差异有统计学意义(P
研究目的：探索极低频电磁场(ELF-EMF)对人骨肉瘤细胞增殖凋亡的影响,并研究其分子机制。研究方法：通过MTT法研究50Hz,

所以 1mT的ELF-EMF对人骨肉瘤细胞MG-63、MNNG-HOS Cl的增殖作用；通过流式细胞术检测5OHz, 1mT ELF-EMF处理人骨肉瘤细胞不同时间后细胞凋亡率、活性氧(ROS)水平以及给予活性氧抑制剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)及p38MAPK抑制剂SB203580作用后细胞凋亡率的变化；通过蛋白质免疫印迹法检测50Hz, 1mT ELF-EMF处理人骨肉瘤细胞MG-63、MNNG-HOS Cl不同时间后及NAC干预后MAPK信号通路相关蛋白变化。研究结果：ELF-EMF够显著抑制人骨肉瘤细胞的增殖,处理3h后细胞存活率仅20%,且这种效应呈明显的时间依赖性；ELF-EMF可诱导人骨肉瘤细胞凋亡及促进ROS水平上升,给予2.5mM NAC干预后人骨肉瘤细胞凋亡率显著下降；ELF-EMF处理入骨肉瘤细胞后其胞内MAPKp38激活,磷酸化p38MAPK蛋白表达增多,而NAC干预后其磷酸化水平明显下降。此外,p38MAPK抑制剂SB203580干预后人骨肉瘤细胞凋亡亦显著下降。研究结论：ELF-EMF通过上调ROS激活MAPKp38信号通路,进而诱导人骨肉瘤细胞凋亡,抑制其生长。
目的:巨噬细胞微粒是介导慢阻肺、糖尿病、慢性肾病等病发病的重要病因。目前研究已得知,巨噬细胞微粒引起的过度炎症反应导致的免疫损伤是其致病的主要原因,但是巨噬细胞微粒引起过度炎症反应的具体发病机制尚不明确。本实验研究旨在探讨巨噬细胞微粒能否诱导人单核细胞(THP-1)产生炎症因子IL-8,以及丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路在巨噬细胞微粒诱导THP-1细胞产生炎症因子IL-8的过程中的作用,进一步探讨巨噬细胞微粒的致病原理。方法:参照Nakamura和Yang SR的方法,用注射器连续抽吸收集2支完全燃烧的香烟的烟雾,随后将烟雾慢慢注射到不含血清的20ml培养基中,得到浓度为10%的香烟烟雾提取物(cigarette smoke extract,CSE)溶液。THP-1细胞用含佛波酯(PMA)的培养基处理24h后再用含2.5%的CSE的培养基刺激20h,随后收集微粒并作流式细胞术检测。分别用103、104、105、106/ml的巨噬细胞微粒处理已被用含佛波酯(PMA)的培养基刺激24h的THP-1细胞,分别在0h、3h、6h、12h、24h停止刺激。收集细胞后ELISA方法检测IL-8。105/ml的巨噬细胞微粒处理已被用含PMA的培养基刺激24h的THP-1细胞,分别在0min,15min,30min,60min停止刺激。Western

BI 2536浓度 blotting方法分别检测ERK1/2、JNK、p38的磷酸化程度。分别用1μM、10μM、30μM的p38特异性抑制剂SB203580、JNK特异性抑制剂SP600125、ERK1/2特异性抑制剂PD98059预处理已被PMA刺激的THP-1细胞,30min后再用105/ml巨噬细胞微粒刺激THP-1细胞12h,并用ELISA方法分析不同抑制剂对IL-8产生的影响。结果:(1)用含2.5%的CSE的培养基培养经PMA处理的THP-1细胞20h后,能明显诱导THP-1细胞产生巨噬细胞微粒。(2)ELISA结果表明,不同浓度组的巨噬细胞微粒都能明显刺激THP-1细胞产生IL-8。细胞上清中IL-8含量随微粒处理浓度的增加表现为逐渐升高的趋势,当微粒浓度为105/ml时达到最高。在同一浓度组间,随着处理时间的递增,IL-8的含量逐渐升高,在12h时IL-8产生最多,随后下降。(3)WB图片表明,巨噬细胞微粒处理THP-1细胞后p38/MAPK、JNK和ERK1/2/MAPK的磷酸化水平都较对照组升高,并且随着巨噬细胞微粒处理时间的递增p38/MAPK、JNK和ERK1/2/MAPK的磷酸化水平逐渐升高,三条通路的磷酸化程度基本都在处理THP-1细胞30min后升为最高。(4)ELISA检测结果表明:分别用1μM、10μM、30μM的p38特异性抑制剂SB203580、JNK特异性抑制剂SP600125、ERK1/2特异性抑制剂PD98059预处理THP-1细胞后,巨噬细胞微粒刺激THP-1细胞产生的IL-8含量都较未使用时降低,并且与抑制剂的浓度呈剂量依赖性。当三种特异性抑制剂浓度为30μM时,IL-8含量分别降到31.3%、46.1%和51.4%。结论:(1)香烟烟雾可诱导THP-1细胞产生巨噬细胞微粒;(2)巨噬细胞微粒可诱导THP-1细胞产生前炎症因子IL-8;(3)巨噬细胞微粒可激活ERK1/2/MAPK、JNK/MAPK和p38/MAPK通路,活化的ERK1/2/MAPK、JNK/MAPK和p38/MAPK通路可能与巨噬细胞微粒诱导前炎症细胞因子IL-8的产生有关。
目的:乳腺癌作为威胁女性身心健康首位的恶性肿瘤,发病率呈逐年上升趋势。由于发病原因尚未完全阐明,因此预防、早期筛查和诊断便成为治愈的关键,这就使得分子生物技术倍受关注。CCL5趋化细胞因子是一种炎症细胞因子,趋化T细胞和单核细胞,在肿瘤生长和转移中具有多重效应,包括抑制肿瘤细胞的免疫效应、促进肿瘤的生长、新血管的生成和转移等,也是乳腺肿瘤细胞表达的主要趋化因子,与乳腺癌的进展息息相关,p38是细胞内重要的信号通路,可以调节很多细胞因子的表达。本实验拟对LPS诱导小鼠乳腺癌4T1细胞系引起CCL5的表达升高的机制展开进一步研究。方法:1用RT-PCR和Western

许多 Blot的方法检测小鼠乳腺癌细胞系4T1表面TLR4的表达及诱导表达。2 LPS诱导4T1细胞,提取总RNA,用RT-PCR检测MCP-1、VEGF和CCL5在基因水平的表达情况。同时用实时定量PCR的方法进行检测MCP-1、VEGF和CCL5在基因水平的表达情况。3用Western Blot的方法检测LPS诱导4T1细胞后MAPK中T-p38和P-p38、T-Erk和P-pErk、T-JNK和P-JNK及NF-κB中T-p65和P-p65的蛋白表达变化。4采用实时定量PCR的方法来检测使用通路抑制剂后LPS诱导的4T1细胞的CCL5的表达。5构建携带目的基因重组质粒并在小鼠巨噬细胞RAW264.

TYR的蛋白及基因表达与未处理组相比均明显下调,差异有统计学意义,而与正常豚鼠相比差异无统计学意义。 五、研究结论 CaM在人自体移植皮片中的表达显著增高,刺激皮片黑素细胞合成黑色素增多,促进自体移植皮片过度色素沉着；维拉帕米作用于人黑素细胞后,能抑制黑素细胞增殖,抑制TYR的活性,减少黑素合成。维拉帕米与α-MSH共同作用黑素细胞后,细胞增殖下降,TYR活性下降,黑素细胞合成黑色素减少,说明维拉帕米在体外能拮抗α-MSH对黑素合成的促进作用。维拉帕米作用于自体移植皮片后能使皮片黑素细胞中酪氨酸酶的活性下降、皮片中黑色素含量降低,说明维拉帕米在体内亦能抑制黑素合成的作用,进一步说明了钙信号转导途径在自体移植皮片过度色素沉着中有重要调控作用。
糖尿病肾病(diabetic

很少 nephropathy, DN)是糖尿病患者最常见的微血管并发症之一也是导致糖尿病患者心血管事件增加率及其死亡率上升的主要原因。国外终末期肾衰竭患者中原发病为糖尿病的约占总数的30%-40%。随着我国糖尿病患者人数的日益增多,目前DN已跻身为我国导致慢性肾病能不全的重要原因之一。DN起病隐匿,且病程进展迅速,一旦患者确诊为DN时往往已经处于不可逆的肾脏损害并进入快速发展的阶段。DN临床治疗效果不理想、预后差成为当前临床医生面临的一个重大难题。众所周知,DN早期特征性的病理改变为肾小球肥大及细胞外基质增多,随着病情逐渐进展,进而出现肾小球硬化及间质纤维化,临床表现为慢性肾功能不全。早期DN是可以逆转的,因此,如何尽早明确糖尿病患者发展为DN的可能性,并采取有效的干预措施,延缓病变的发展是当前医学界研究热点。 时间 12-脂氧化酶(12-lipoxygensae,12-LO)是一种不饱和脂肪酸的氧化酶,在体内活化后以花生四烯酸(Arachidonic acid, AA)为基质生产12-氢氧化二十碳四烯酸(12-Hydroxyeicosatertraenioc acid,12(S)-HETE)的代谢产物。研究表明,12-LO及其代谢产物12(S)-HETE主要通过氧化应激及引起炎症反应参加多种疾病的发生、发展,如高血压、冠心病、糖尿病、动脉粥样硬化等。因此,12-LO及其代谢途径受到越来越多研究者的关注。早在1999年,Bleich D等人就发现：12-LO基因敲除的C57BL／6小鼠连续腹腔注射链脲佐菌素(streptozotocin, STZ) 5天,12-LO基因敲除的C57BL／6小鼠的血糖无明显升高。近年,Kim

YS和Kang等研究发现高糖刺激后的肾小球系膜细胞12-HETE的释放水平是明显增加,而Reddy MA等人研究发现12-LO能够通过P38MAPK信号传导途径增加DN时细胞外基质(extracellular

matrix, ECM)蛋白的表达,如：纤维连接蛋白(fibronectin, FN)、胶原蛋白(Collagen),因此,12-LO在糖尿病肾病的发生、发展中具有重要的作用。肾小球肥大和细胞外基质增多是早期DN特征性的病理改变,而肾小球肥大与细胞周期调节有关的细胞周期素激酶抑制剂(cyclin-dependent kinase inhibitor, CKI)的表达密切相关。因此,本研究主要是多角度探讨DN时12-LO及其代谢途径与CKI表达调节及与肾小球细胞肥大的关系；观察积聚的细胞外基质(Extracellular matrix, ECM)对12-LO和CKI表达的调节作用,并阐明其分子机制,明确12-LO对DN肾小球细胞肥大的发生和ECM积聚的关系,进一步明确12-LO在DN进展中的作用,为临床治疗DN提供新的治疗靶点。我们以体外培养的原代肾小球系膜细胞、微型泵注射12(S)-HETE大鼠模型及高脂饮食结合小剂量的链脲佐菌素(Streptozotocin,STZ)诱发的2型糖尿病模型大鼠作为研究对象,进行如下实验：①微型泵注射12(S)-HETE对正常大鼠肾小球内CKI及ECM的表达影响；②皮下注射12-LO抑制剂((cinnamyl-3,4-dihydroxy-cyanocinnamate,CDC)对2型糖尿病大鼠肾小球肥大及肾小球内CKI.ECM的表达影响；③12(S)-HETE刺激肾小球系膜细胞对CKI的表达影响及其信号传导；④高糖刺激肾小球系膜细胞对CKI的影响及给予CDC后CKI的表达变化；⑤模拟ECM微环境对肾小球系膜细胞CKI的表达影响和CDC对其表达的变化及其信号传导。 所以 主要研究结果如下： 1.泵注射12(S)-HETE增加正常大鼠肾小球内P21、P16及CollagenⅣ的表达p<0.01),CDC在不影响糖尿病大鼠的血糖的情况下,改善肾脏肥大及降低肾小球体积p<0.01),P21、P16及CollagenⅣ的表达也明显增加(p<0.01)；给予CDC治疗后P21、P16及CollagenⅣ的表达和12(S)-HETE水平均显著下降p<0.01),给予P38MAPK抑制剂后,P21、P16的表达明显降低(p<0.01),CDC降低高糖刺激后系膜细胞12(S)-HETE释放水平(p<0.01),CDC降低高糖刺激引起的P21、P16的表达(p<0.01),CDC降低模拟的ECM微环境中的系膜细胞12(S)-HETE释放水平(p<0.