目的:观察ADP对培养的脊髓背角小胶质细胞内Ca2+浓度([Ca2+]i)的影响及作用机制。方法:培养纯化新生SD大鼠脊髓背角小胶质细胞,免疫组化观察P2Y13受体表达,激光共聚焦显微镜检测ADP作用下,小胶质细胞[Ca2+]i的变化。结果:大鼠脊髓背角小胶质细胞表达P2Y13受体,ADP可导致培养的脊髓背角小胶质细胞[Ca2+]i快速增高,且呈现剂量依赖性;P2Y13受体拮抗剂MRS2211(100μmol/L)能基本阻断ADP的作用,而P2Y1受体拮抗剂MRS2179(100μmol/L)、P2Y12受体拮抗剂MRS2395(100μmol/L)均不影响ADP致小胶质细胞[Ca2+]i升高的效应。结论:ADP可能通过P2Y13受体途径,导致培养的脊髓背角小胶质细胞[Ca2+]快速升高。
丝裂酶原活化蛋白激酶(mitogen-activated

protein kinases,MAPKs)是真核生物细胞内的一类丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,主要包括细胞外信号调节激酶(ERKs)、c-Jun氨基末端激酶(JNKs)及P38 MAPKs三个家族,在将细胞外刺激信号转导至细胞及其核内,并引起细胞生物学反应的过程中具有至关重要的作用。P38 MAPK信号转导通路是多条并行的MAPK信号转导通路之一,参与了疼痛的形成与维持,P38 MAPK与疼痛敏感化密切相关。进一步了解P38 MAPK在疼痛敏感化机制中的作用,能够为疼痛敏感化疾病提供新的治疗靶点。
目的观察活化蛋白1(AP-1)在高糖诱导MC3T3-E1成骨细胞凋亡中的作用。方法将体外培养的MC3T3-E1细胞分为正常对照组和实验组,实验组包括22.0 mmol/L D-葡萄糖组(高糖组)、P38MAPK-shRNA慢病毒转染组、P38MAPK信号转导阻断剂组、无关shRNA转染组、AP-1抑制剂SP600125组。采用TUNEL和流式细胞术检测细胞凋亡,用EMSA检测MC3T3-E1细胞AP-1的活性。结果与正常对照组相比,高糖组MC3T3-E1成骨细胞P38MAPK表达、AP-1活性、细胞凋亡显著增加。P38MAPK-shRNA慢病毒转染组和P38MAPK信号转导阻断剂组MC3T3-E1细胞AP-1活性较高糖组分别下降57.9%(P<0.01)和45.6%(P<0.05)。AP-1抑制剂组MC3T3-E1细胞凋亡率较高糖组下降39.7%(P<0.01)。结论高糖通过激活P38MAPK增加AP-1活性,诱导MC3T3-E1成骨细胞凋亡,抑制AP-1活性后高糖诱导的MC3T3-E1细胞凋亡显著下降。
目的探讨大鼠星形胶质细胞气压损伤后,钠-钾-氯共转运体(NKCC)、促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)对水通道蛋白-4(AQP4)表达变化的影响和相关机制。方法原代培养SD大鼠大脑皮质星形胶质细胞。实验分为正常对照组、气压损伤组、布美他尼处理组和p38-MAPK抑制剂(SB203580)处理组。布美他尼和p38-MAPK抑制剂均预处理星形胶质细胞30 Selleck BGB324 min后再进行气压损伤。损伤后3 h观察细胞水肿情况,并对AQP4的表达情况进行Western blot检测。结果光学显微镜下观察到气压损伤后的星形胶质细胞较正常对照组细胞明显肿胀,布美他尼和p38-MAPK抑制剂处理组星形胶质细胞水肿较气压损伤组减轻。Western

blot检测发现布美他尼处理组和p38-MAPK抑制剂处理组的AQP4表达均较气压损伤组低(P<0.05)。结论星形胶质细胞气压损伤后,AQP4表达上调受NKCC的影响,以及p38-MAPK信号途径的调节。通过抑制NKCC的活性和p38-MAPK信号途径的激活,可降低气压损伤引起的星形胶质细胞AQP4表达的上调,减轻细胞水肿。
目的研究Wnt5a在A549细胞球增殖和EMT中的作用及相关机制。方法利用无血清培养出A549细胞球后应用流式细胞术对其进行CD133+CD44+表达检测。实验分为对照组、Wn5a组、p38组和Wnt5a+p38组。应用Western Alectinib blot观察各组Wnt5a、p-p38、β-catenin、Vimentin和E-cadherin蛋白的表达变化,并利用MTT和裸鼠成瘤实验观察Wnt5a shRNA慢病毒感染前后A549细胞球的生长抑制率和成瘤能力。结果流式细胞术检测A549细胞球中CD133+CD44+阳性率为60.5%;Wnt5a蛋白在Wnt5a组和Wnt5a+p38组中的表达较对照组明显下调(P<0.05),p-p38蛋白、β-catenin蛋白、Vimentin蛋白在Wnt5a组、p38组和Wnt5a+p38组的表达明显低于对照组(P<0.05),而E-cadherin蛋白在上述3组中的表达显著高于对照组(P<0.05),并且该细胞的成瘤能力较对照组显著下调。结论下调Wnt5a表达可抑制A549细胞球的增殖及EMT能力,可望成为治疗非小细胞肺癌的靶点。
背景:研究表明牙髓细胞在一定条件下经诱导可以向成牙本质细胞方向分化,该过程由信号网络调控。目的:综述牙髓细胞向成牙本质细胞方向分化的诱导因子及作用机制的研究进展。方法:应用计算机检索1998年1月至2014年7月中国知网(CNKI)和万方数据库相关文献,检索词”牙髓细胞,成牙本质细胞分化”限定文献语言种类为中文。同时计算机检索同期PubMed数据库相关文献,检索词”dental

点击此处 pulp cells,odontoblastic differentiation”,限定文献种类为英文。初检所得文献467篇。包括中文214篇,英文253篇。对于初检文献,阅读标题和摘要进行初筛,排除因研究目的与本研究无关者或内容重复性的研究,最终纳入63篇文章进行综述。结果与结论:不同的诱导因子可以作为调控器,文章系统归纳了牙髓细胞在不同的诱导因子作用下,例如:骨形态发生蛋白、β-甘油磷酸钠、抗坏血酸及多种生长因子等,通过相关信号通路信号转导在一定程度上参与牙髓细胞向成牙本质细胞分化定向诱导。但成牙本质细胞分化是一个复杂的过程,进一步从细胞及分子水平研究成牙本质分化诱导因子及相关机制对于牙齿再生治疗临床应用具有重要意义。
目的探讨增强肝纤维化(ELF)试验在慢性丙肝患者肝纤维化诊断中的准确性。方法选取2011年1月~2013年4月在本院进行肝活组织检查的慢性丙型肝炎患者156例,对其临床资料进行前瞻性研究。ELF试验包括3项血清标志物的检测:透明质酸(HA)、基质金属蛋白酶组织抑制物-1(TIMP-1)和Ⅲ型前胶原氨基端肽(PⅢNP)。采用Metavir评分系统将肝纤维化进行分期。结果在肝纤维化的诊断中,ELF=7.72时,诊断显著肝纤维化(F≥2)的ROC曲线下面积(AUROC)为0.94(95%CI:0.89~0.97),敏感性为93.0%,特异性为83.0%;ELF试验诊断显著肝纤维化的敏感性和特异性分别为93.3%和81.0%。在肝硬化的诊断中,ELF=9.

5MHz、强度100MW/cm2的超声照射2w。每组随机取8只，应用扫描电镜观察牙根表面的微观改变，并测量牙根吸收指数；每组其余8只取实验牙和其临近牙周组织，制作以实验牙为中心，矢状向的组织切片，HE染色光镜下观察牙根吸收与修复的情况；抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色，行阳性细胞计数；免疫组化检测TNF-α、OPG、RANKL的表达，用Imagepro-Plus6.0图像分析系统进行光密度测量。对实验结果应用spss软件进行单因素方差分析。

结果： 1.与自然修复组相比，超声治疗组牙根吸收指数和破牙骨质细胞的数目减少了，差异有统计学意义；超声治疗组可见有大量的新生牙骨质形成。 2.超声治疗组TNF-α的表达下调，OPG/RANKL的比值升高，与自然修复组相比差异有统计学意义。 结论：超声能够下调TNF-α的表达，上调OPG/RANKL的比值，减少了破牙骨质细胞的生成，有利于牙骨质向再生的方向发展。
本文由两章组成,第一章为桑属异戊烯基黄酮类化合物干预脂肪细胞分化作用的研究,第二章主要对天然产物脂肪细胞分化干预作用的研究进展进行了综述。 脂肪组织作为能量储存和内分泌器官,在人体能量平衡、胰岛素作用、脂质代谢中发挥重要作用,是代谢调节的中枢。促进脂肪细胞分化能够增加脂肪组织胰岛素敏感性,促进脂肪细胞葡萄糖转运。天然产物资源丰富,从中挖掘和寻找新的干预脂肪细胞分化,改善胰岛素抵抗和2型糖尿病的先导化合物,是近年来降糖药物开发的研究方向之一。 为什么 桑属植物富含异戊烯基黄酮类化合物,我们课题组在对黑桑和滇桑生物活性成分的研究中,首次发现部分化合物具有促进脂肪细胞分化的活性。因此,我们对其中活性显著的异戊烯基黄酮化合物进行了深入的促进脂肪细胞分化作用和机制的研究,并检测其对脂肪细胞葡萄糖转运的影响。 MnPE-11是从桑属(Morns)黑桑(M.nigra)中分离得到的桑根酮型二氢黄酮化合物。我们发现MnPE-11能够促进前脂肪细胞3T3L1分化和葡萄糖转运。MnPE-11剂量依赖地增加了脂滴的聚集以及脂源性基因的表达,包括CEBPβ、 CEBPα、PPARγ及其靶基因：aP2、GLUT4、adiponectin。而且,MnPE-11还能够提高PPARγ活性和分化早期P-Akt的表达。因此,MnPE-11可能通过激活Akt,增加CEBPβ, CEBPα, PPARγ表达,同时提高PPARγ活性,促进脂肪细胞分化。 My-34和my-12是从桑属滇桑(M. yunanensis)中分离得到的两个异戊烯基黄烷化合物。My-34在分化早期使p38蛋白磷酸化,而p38抑制剂能够明显降低my-34促进的脂肪细胞分化和基础糖转运。My-34依次增加脂源性基因CEBPβ、 和 CEBPα和PPARγ的表达,这些基因表达的上调同样能够被p38抑制剂抑制。在促进脂肪细胞分化的同时,my-34还能剂量依赖地抑制炎症因子TNF-α的表达。因此,my-34可能通过激活p38,增加CEBPβ、CEBPα和PPARγ表达,从而促进脂肪细胞分化。My-12能够促进前脂肪细胞3T3L1分化和葡萄糖转运。My-12剂量依赖地增加了脂滴的聚集以及脂源性基因的表达,包括CEBPβ、CEBPα、

PPARγ及其靶基因：aP2、GLUT4、adiponectin。My-12与my-34结构相似,但是与my-34不同的是没有增加分化早期p38蛋白的磷酸化。 总之,来源于桑属的三种异戊烯基黄酮类化合物可以有效促进脂肪细胞分化,增加胰岛素敏感性,促进脂肪细胞葡萄糖转运,这对改善胰岛素抵抗和治疗2型糖尿病的药物发现具有重要意义。
麝香保心丸作为一种治疗心血管疾病的代表中成药已临床应用三十余年，具有芳香温通、益气强心的功效，用于治疗由心肌缺血引起的心绞痛、心肌梗塞等。现代药理学研究证明麝香保心丸不仅能够扩张冠状动脉、保护血管内皮、抑制动脉粥样硬化，还有促进治疗性血管新生的作用，是第一个具有治疗性血管新生作用的中成药，但其促进血管新生作用的主要活性成分和作用机制尚不明确。 本论文在细胞水平上，对麝香保心丸中促进血管新生的活性成分进行了筛选。实验结果表明，在麝香保心丸的入血单体成分中，肉桂醛（Cinnamicaldehyde,CA）、人参皂苷Rg3、人参皂苷Rh2具有较明显的促进人脐静脉内皮细胞(HUVECs)增殖的作用。其中，肉桂醛促进细胞增殖活性最为显著，并且在10μM浓度下无细胞毒性。因此，本论文重点对不同浓度的肉桂醛促血管新生活性进行体内外药效研究，并对其作用机制进行了探讨。 首先，本研究分别采用CCK-8增殖实验、细胞划痕与爬片实验、Transwell迁移实验及体外成管实验检测肉桂醛体外诱导血管新生的活性。结果显示，肉桂醛于0.1、0.5、1、10μM浓度时均可显著诱导HUVECs增殖、损伤愈合、迁移以及管腔形成，并呈现量效关系；同时观察到肉桂醛于10μM浓度时呈时间依赖性的诱导HUVECs增殖。

其次，利用酶联免疫吸附法（ELISA）测定HUVECs培养上清中分泌的血管内皮生长因子（VEGF）的含量，结果发现，肉桂醛能够分别于24、36、48小时诱导VEGF的分泌量显著增加。 其三，蛋白免疫印迹法（Western-blot）检测结果显示，肉桂醛能够激活磷脂酰肌醇3激酶(phosphoinositide3-kinase, 此网站 PI3K)/AKT和丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activatedproteinkinases, MAPK)两条信号通路，可呈时间和浓度依赖性地上调其中的主要靶蛋白：AKT、内皮型一氧化氮合酶（endothelial nitric oxide synthase, eNOS）、胞外信号调节激酶(extracellularregulatedproteinkinases1/2,Erk1/2)、c-Raf、p38激酶(p38kinase, p38)；此外，PI3K和MEK特异性抑制剂LY294002和U0126能够阻断肉桂醛诱导AKT和Erk1/2的磷酸化，并且抑制内皮细胞增殖、管腔形成及VEGF的分泌。 最后，采用斑马鱼血管损伤模型和小鼠皮肤损伤模型，对肉桂醛促血管新生作用的药效进行了体内验证。在斑马鱼血管损伤模型中，肉桂醛在0.01-0.1μg/mL剂量范围内，对PTK787损伤的斑马鱼节间血管具有显著地促进作用，并在实验的剂量范围呈现一定的量效依赖性。另外，在小鼠皮肤损伤模型中，与对照组相比，每天分别腹腔注射肉桂醛25、50、100mg/kg后，小鼠皮肤伤口明显缩小（P0.

05)。IHC显示α-SMA、TGF-β1在I/R组肾脏表达较强,而在IPO组表达减弱。(?)Vesternblot的结果显示：IPO组的α-SMA、TGF-β1和Smad-2表达高于Sham组,但是都低于其在I/R组的表达。 结论：肾脏缺血再灌注损伤不仅可以导致肾脏近期损伤,还对肾脏远期功能有影响,可以导致肾小管间质纤维化。IPO可以减轻这种纤维化,其机制可能与降低α-SMA、TGF-β1和Smad-2在肾组织的表达有关。
引言 器官移植供、受体之间HLA配型与移植后排斥反应以及移植物存活率相关。而且，免疫排斥反应常常归结于HLA配型的不一致。然而，研究发现，移植失败也会出现在HLA配型一致的亲属活供体器官移植中。这一点提示我们，非HLA类因素也许也参与了移植免疫并可能导致移植失败。后续的一系列研究证实：在器官移植中，非HLA类抗原的确与移植后排斥反应乃至移植失败均存在相关性。

可能 MICA是一类非经典的MHC-Ⅰ类样分子，起码包含有77个以上的等位基因。其在主要组织相容性复合体（MHC）的位置与人类白细胞抗原B基因位点呈连锁不平衡状态。与经典的MHC-Ⅰ类分子不同，MICA大量表达于内皮细胞表面，并不与β2微球蛋白结合，这一特点使得其成为细胞免疫和体液免疫反应共同的靶分子。MICA等位基因的多样性在不同种族和人群中的分布也不尽相同。多态性的MICA基因能够诱导移植物抗宿主排斥反应（GVHR）或宿主抗移植物排斥反应（HVGR）的发生。多年来，研究证实了移植受体体内存在MICA抗体的事实，且同种异体之间移植而引发MICA抗体的出现与移植排斥反应有关。 事实表明，HLA配型一致的实体器官移植中，受体也常常会经历移植后免疫排斥反应。因此，除外经典的HLA分子，非经典的HLA样分子（如MICA分子）也很可能与同种异体器官移植物的存活及排斥反应具有相关性。研究中经常发现，出现移植物功能障碍及移植排斥反应重的受体体内HLA抗体和MICA抗体含量普遍要高于移植物功能良好、移植排斥反应较轻的受体。 目前，临床实体器官移植，包括亲属活供体器官移植都还没有术前常规进行MICA基因配型的做法。因此，我们的研究就是为了探求移植供、受体之间MICA配型情况以及MICA抗体对于临床实体器官移植的影响。 目的 通过临床样本的收集，进行一系列的体外实验，并辅以临床观察，巩固和深入研究MICA基因及其抗体在免疫排斥反应中的作用。在尽量排除HLA抗原及其抗体对移植物影响的前提下，研究移植供、受体之间MICA等位基因配型与移植后排斥反应的相关性。并通过移植受体体内MICA抗体的检测结果配合供、受体之间MICA配型结果，找到MICA等位基因及其抗体参与临床实体器官移植的直接证据。通过统计学分析，进一步说明MICA基因配型、移植排斥反应以及移植物生存时间三者之间的关系。最后，根据实验结果阐明MICA基因参与移植后免疫排斥的事实，为今后的器官移植结果提供可靠的预测性指标，并为移植前合理的进行供、受体间MICA基因配型奠定一定的理论依据，从而最大可能地避免免疫排斥的发生。

AZD4547 还有 方法 1.采集1999年至实验期间先后进行的共计20例亲属活供体器官移植全血标本。提取基因组DNA后采用序列特异性引物聚合酶链反应进行检测和凝胶电泳分析，以明确供、受体之间HLA配型关系； 2.查阅文献后，选取中国北方汉族人群频率最高的8个MICA基因型，并根据选取结果设计、合成引物。在提取基因组DNA之后亦采用序列特异性引物聚合酶链反应和凝胶电泳进行检测、分析，以明确供、受体样本中MICA基因的匹配情况； 3.针对存活的移植受体分别于移植术后2、4、6、8、10、12个月分六次采集血清样本。使用多功能液相芯片分析平台（Luminex）及LABSscreen软件检测所选取样本中的MICA抗体存在。利用分光测色仪（LABScan）检测群体反应性MICA抗体的平均免疫荧光浓度(MFI)，然后以HLA-VisualTM软件进行分析，以明确移植后不同时间段的移植受体体内MICA抗体水平；

4.移植后2周至6个月内的所选取受体的移植后病理活检标本由固定病理学专业人员反复镜检并分析。根据国际统一的Banff标准，将移植后活检样本的免疫排斥反应分为不同等级； 5.结合选取受体临床基本情况及接受免疫抑制治疗情况，记录移植受体生存状况及生存时间； 6.根据得到的移植供、受体之间HLA和MICA配型结果，结合排斥反应病理学分级情以及移植受体的生存状况和MICA抗体检测情况进行观察并行统计学分析。 结果 1.所有选取的亲属活供体移植供、受体之间的HLA配型均为半相合状态，属于器官移植中很理想的状态； 2.所有选取的移植供、受体之间的8个MICA基因型（13个等位基因）配型情况不一致。供、受体之间MICA基因匹配率高的移植受体显示出较轻的移植后排斥反应以及更佳的存活情况，反之则反； 3.移植受体内MICA抗体的检测情况与供、受体MICA基因匹配率及移植后排斥反应情况大体一致。移植后出现排斥反应的受体中MICA抗体为阳性，且病理排斥反应较重的受体中MICA抗体出现的几率及强度高于病理排斥反应较轻的移植受体，即排斥反应越重，MICA抗体的强度越高。同时，根据平均荧光浓度的检测结果，我们认为，群体反应性MICA抗体对于移植术后急、性慢性反应都具有影响； 4.

98,11.24,与HGA的结构相吻合。综合以上的分析,合成所得化合物为目标化合物HGA。利用高效液相色谱(HPLC),以甲醇-水-冰醋酸-乙二胺(87：13：0.04：0.02)为流动相,210nm为检测波长,发现,HGA出峰时间为59.09min,归一化法的计算结果显示HGA的纯度为94.08%(HPLC)。 (2)常春藤皂苷元酰胺衍生物HGA的抗抑郁生物活性及机制研究 HGA神经保护作用实验中,MTT结果显示,化合物HGA可以在0.1μmol·L-1(P=0.042)。而相同实验条件下1μmoL·L-1的HG(P=0.866)不能对神经元产生显著的保护作用。急性给药的小鼠悬尾实验的结果显示,HGA在10mg·kg-1时可以显著(P=0.010)缩短C57BL/6小鼠的不动时间。在此基础上,从BDNF和神经可塑性的角度对其机制进行研究,Western

blotting的结果显示,HGA可以显著逆转皮质酮所导致的BDNF(P=0.000)和突触素(Synaptophysin, P=0.000)蛋白的表达水平的下降。 结论：1.在抑郁的发生发展过程中BDNF的表达水平先升高,再降低,最后又升高,呈波浪形变化。并且在给予氟西汀治疗以后,BDNF的表达水平与抑郁但未接受治疗的小鼠相比,显著下降,说明BDNF与小鼠的抑郁状态密切相关,但关系复杂。在抑郁的发生阶段,BDNF应激性的升高可能对神经可塑性起到一定的保护作用。海马神经元树突棘密度则随着小鼠的抑郁状态的发生、发展而不断降低,当给与氟西汀治疗以后,小鼠海马神经元树突棘密度迅速升高而且与小鼠的行为学状态呈正相关,说明神经可塑性的变化很可能是抑郁的病理生理学基础。 Ipatasertib化学结构 2.氯胺酮在抑郁鼠身上对BDNF表达的促进作用更加显著,而这种显著的促进作用可以被糖皮质激素受体抑制剂Ru486所阻断。但短期(3d)的皮质酮处理不能显著影响氯胺酮对BDNF的促进作用。单剂量注射氯胺酮的速效抗抑郁作用可能与促进BDNF的表达相关,其长效可能与其改善了神经可塑性有关。单剂量氯胺酮可能是通过激活Racl信号通路,促进Cofilin的磷酸化,抑制Cofilin的剪切作用,最终改善神经可塑性,起到长效的抗抑郁作用。

Selleck INK1197 3.经设计和普通化学合成,成功得到了N-(3-二甲氨基丙基)-常春藤皂苷元-17-甲酰胺(HGA),HGA可以在0.1μmo1·L-1的浓度下对原代海马神经元产生显著的保护作用；HGA可以在10mg·kg-1的给药剂量下,小鼠在悬尾实验中起到显著的抗抑郁作用,HGA的抗抑郁作用可能跟HGA可以促进BDNF和突触素的表达有关。
研究目的：运动预适应（exercise preconditioning，EP）诱导机体产生强大的心肌保护效应日益成为运动医学界关注热点，其诱导心肌保护效应的机制可能涉及到触发物质-中介物质-效应物质细胞信号转导途径。本研究在EP减轻力竭运动致运动性心肌损伤保护效应基础上，探讨心肌ATP敏感钾通道（ATP-sensitive potassium channels, K_(ATP)channels）亚基kir6.2和SUR2A在运动预适应心肌保护效应中的变化，同时使用PKC抑制剂白屈菜赤碱（chelerythrine chloride，CHE），探讨在EP心肌保护效应中，PKC对心肌K_(ATP)通道表达调控的影响，为EP心肌保护效应及其机制的研究提供实验依据和思路。 研究方法：SD大鼠随机分对照组（C组）、力竭运动组（EE组）、早期运动预适应组（EEP组）、 PKC抑制剂+早期运动预适应组（CHE+EEP）、早期运动预适应+力竭运动组（EEP+EE组）、PKC抑制剂+早期运动预适应+力竭运动组（CHE+EEP+EE组）、晚期运动预适应组（LEP组）、PKC抑制剂+晚期运动预适应组（CHE+LEP）、晚期运动预适应+力竭运动组（LEP+EE组）、PKC抑制剂+晚期运动预适应+力竭运动组（CHE+LEP+EE组）。大强度跑台运动建立EP模型，力竭跑台运动致大鼠运动性心肌损伤。用苏木素-伊红（hematoxylin erosin, HE）染色观察心肌形态结构变化，用苏木素-碱性品红-苦味酸（haematoxylinbasie fuchsin picric acid, HBFP）染色方法观察心肌缺血缺氧改变，用免疫化学发光法检测心肌肌钙蛋白I（cardic troponin I, cTnI）含量，用酶联免疫吸附法检测血清氨基末端前体脑钠肽（N-terminalpro-brainnatriuretic 还有 peptide, NT-proBNP）含量，评价运动性心肌损伤后心肌形态结构和功能变化，并观察EP诱导减轻运动性心肌损伤保护效应。用原位杂交方法观察心肌K_(ATP)通道kir6.2mRNA和SUR2A mRNA的分布，用实时荧光定量PCR方法检测心肌K_(ATP)通道kir6.2mRNA和SUR2AmRNA的变化，用免疫荧光组织化学方法观察心肌K_(ATP)通道kir6.2和SUR2A蛋白表达分布，用免疫印迹方法检测心肌K_(ATP)通道kir6.2和SUR2A蛋白的变化。同时使用PKC抑制剂CHE，揭示在EP心肌保护效应中PKC对心肌K_(ATP)通道亚基kir6.2和SUR2A表达调控的影响。

研究结果：（1）与C组相比，EE组血清cTnI和NT-proBNP含量明显升高，心肌纤维弯曲变形，心肌缺血缺氧严重。与EE组相比，EEP+EE组血清cTnI和NT-proBNP含量明显降低，心肌缺血缺氧减轻。LEP+EE组血清cTnI含量明显降低，NT-proBNP含量无明显变化，心肌缺血缺氧加重。（2）和C组相比，EEP和LEP组kir6.2mRNA表达水平无明显变化，EEP组kir6.2蛋白表达水平明显降低，LEP组kir6.2蛋白表达水平无明显变化；EEP和LEP组SUR2A mRNA表达水平有升高趋势，EEP组SUR2A蛋白表达水平无明显变化，LEP组SUR2A蛋白表达水平明显降低。EE组kir6.2mRNA表达水平呈下降趋势，kir6.2蛋白表达水平明显升高；SUR2A mRNA表达水平明显升高，SUR2A蛋白表达水平明显升高。和EE组相比，EEP+EE和LEP+EE组kir6.2mRNA表达水平呈下降趋势，kir6.2蛋白表达水平明显降低；EEP+EE组SUR2A mRNA表达水平明显下降，LEP+EE组SUR2A mRNA表达水平呈下降趋势，EEP+EE和LEP+EE组SUR2A蛋白表达水平明显降低。（3）和EEP组相比，CHE+EEP组kir6.2mRNA表达水平明显下降，kir6.2蛋白表达水平明显升高，SUR2A mRNA表达水平呈下降趋势，SUR2A蛋白表达水平明显下降。和EEP+EE组相比，CHE+EEP+EE组kir6.2mRNA表达水平下降趋势，kir6.2蛋白表达水平呈降低趋势，SUR2A mRNA表达水平明显升高，SUR2A蛋白表达水平明显升高。和LEP组相比，CHE+LEP组kir6.2mRNA表达水平呈下降趋势， kir6.

7巨噬细胞上使用毒胡萝卜素(Thapsigargin ,Tg)复制内质网应激模型,在此基础上不给予或给予fucoidan处理后,通过Western blot检测LC3(microtubule associated protein light chain 3)的表达从而反映自噬发生水平的变化。同时给予稳定表达GFP-LC3(Green fluorescent protein-LC3)的RAW264.7细胞不同处理后,通过激光共聚焦显微镜直接观察自噬体形成的变化。在明确fucoidan对内质网应激所诱导的自噬是否产生影响后,探讨fucoidan通过激活何种信号途径调控自噬的发生水平。信号通路的检测主要依赖于Western

blot技术。本课题重点观察了fucoidan是否对AKT/mTOR/p70S6K信号通路产生影响,接着使用mTOR特异性阻断剂Rapamycin抑制AKT/mTOR/p70S6K信号通路,并用AnnexinV/PI双染流式细胞仪和Western blot方法测定细胞的凋亡情况。最后利用SR-A基因敲除型和野生型小鼠腹腔巨噬细胞,研究了SR-A与AKT/mTOR/p70S6K信号通路改变之间的可能联系。 结果: 用Tg和Tg+Fucoidan分别处理RAW264.7细胞8-12小时后,发现Tg+fucoidan处理组LC3-Ⅱ表达较Tg处理组明显减弱,表明fucoidan和Tg共处理后明显抑制了Tg诱导的巨噬细胞自噬的形成。这种抑制效应在处理后12小时最为明显。同时,给予稳定表达GFP-LC3的RAW264.7细胞不同处理后,用激光共聚焦显微镜观察自噬体形成的变化,结果与western 而且 blot检测的LC3-II表达水平相一致,Tg+fucoidan共处理组后抑制了内质网应激诱导的自噬体的形成。 为了阐明fucoidan通过何种通路抑制内质网诱导的自噬的形成,我们又对调控自噬的最关键信号通路mTOR信号通路进行了研究。结果显示Tg+fucoidan处理细胞4小时后,可明显激活AKT/mTOR/p70S6K信号通路,提示fucoidan可能通过激活AKT/mTOR/p70S6K信号通路,抑制内质网应激诱导的自噬形成。

我们接着应用mTOR通路特异性抑制剂Rapamycin干扰AKT/mTOR/p70S6K信号通路,来观察细胞自噬水平的变化。当用Rapamycin预处理RAW264.7细胞30min后再给予Tg+fucoidan处理,发现p-AKT、p-mTOR和p-P70S6K磷酸化活性均被明显抑制,LC3-Ⅱ的表达明显上调。这些实验结果表明,阻断mTOR通路后,fucoidan抑制内质网应激所诱导的自噬的形成得到了解除,从而进一步证明了fucoidan通过激活AKT/mTOR/p70S6K信号通路,抑制了内质网应激诱导的自噬形成。 随后,我们观察了给予Rapamycin干扰AKT/mTOR/p70S6K信号通路后对于Tg + fucoidan共处理组细胞凋亡率的影响。实验结果显示,Tg + fucoidan+Rap处理组与Tg + fucoidan处理组相比,细胞凋亡率明显降低。这就说明了fucoidan可能是通过激活AKT/mTOR/p70S6K信号通路,抑制了内质网应激诱导的自噬的形成,从而促进了巨噬细胞的大量凋亡。 由于fucoidan是SR-A的配体,因此我们想进一步知道fucoidan激活AKT/mTOR/p70S6K信号通路是否通过SR-A所介导。于是SR-A基因敲除小鼠模型被用作试验。实验结果显示,Tg 有 + fucoidan处理野生型(SR-A+/+)小鼠腹腔巨噬细胞后,与TG组相比,p-AKT、p-mTOR和p-P70S6K被明显激活。而在SR-A敲除(SRA-/-)小鼠腹腔巨噬细胞中,上述蛋白的表达差异均不明显。因此,fucoidan可能是通过与SRA结合后,激活了AKT/mTOR/p70S6K信号通路。 结论: 作为A类清道夫受体的配体,fucoidan与SR-A结合后,可能通过激活AKT-mTOR-p70S6K通路,抑制了由ER stress所诱导的巨噬细胞自噬的发生,从而促进了巨噬细胞的大量凋亡。
目的神经管畸形(neural tube defects;NTD),是最常见的出生缺陷之一。主要表现为无脑儿、脑膨出和脊柱裂等。神经管的发育和分化是一个非常复杂的生物进化过程,并且受各种致畸因素调节和影响,其中最重要的就是环境致畸中的高温因素。在人类,最大的高危因素被认为是孕妇高温。大量的动物实验和对人类的流行病调查证实,孕妇早期接受到物理性的有害因子,如过热的热水浴和高温作业等,都可使孕妇体内产热增加或散热不良而致高热。早期的胚胎极易受到高温环境的损害,高温会阻碍那些分裂中的细胞,使该组织停止发育,特别是胎儿的中枢神经系统极易受到损伤,造成神经管畸形,严重者使胚胎夭折。高温可引起胚胎发育基因的低表达、不表达或超表达,使某些与细胞分化相关的蛋白,特别是酶蛋白和信息传递蛋白异常,从而使细胞分化异常,最终引起神经管发育中信号传导机制障碍,很可能通过改变信号通路上蛋白激酶的表达和功能使胚胎正常的细胞凋亡发生紊乱,从而引起神经管畸形。近年来研究发现,高温刺激能促使丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated

可能 protein kinases,MAPK)家族中的ERK1/2和JNK1/2发生磷酸化和凋亡基因Caspase-3的活化,证实了细胞凋亡在高温致胚胎先天性神经管畸形中的作用。而JNK/SAPK及p38MAPK为MAPK家族应激激活的蛋白激酶,这2条通路的激活参与多种应激所介导的细胞凋亡,说明p38MAPK有可能也参与高温致神经管畸形的发生。本研究在高温致NTD动物模型上,采用RT-PCR和Western blotting方法检测正常发育中的神经管和高温致畸胚的神经管中p38MAPK以及Bax/Bcl-2, Caspase-3的表达情况,以观察p38MAPK以及Bax/Bcl-2, Caspase-3在神经管正常发育中的作用及其与高温致神经管之间的关系。 方法采用本实验室建立的高温致金黄地鼠畸形的动物模型,将60只孕鼠按完全随机设计分组法分为实验组和对照组。实验组30只,对照组30只,实验组于受精第8天下午3时,置42℃水浴,持续20min,然后将其分为5个时相点,每个时相点6只,分别于处理后8、16、24、48、72h剖腹取胎,在解剖镜下分离新鲜胚胎组织。对照组30只于同样时间进行水浴处理,水温为37℃,持续20min。对照组在相应时间取材。采用RT-PCR和Western blotting方法检测正常发育中的神经管和高温致畸胚的神经管中p38MAPK的表达情况,以及采用Western blotting方法检测正常发育中的神经管和高温致畸胚的神经管中Bax/Bcl-2, Caspase-3的表达情况。 结果1.

33%、56.67%、40%；癌远端正常组织中阳性率依次为6.67%、10%、3.33%,ESCC较癌旁组织中c-Met阳性率高,差异有统计学意义均有P0.05)；在哈族ESCC中,c-Met的表达与肿瘤细胞分化程度有关联(χ2=6.843,P=0.038),在汉族中无关联。c-Met的高表达与食管鳞癌的肿瘤浸润深度、淋巴结转移及临床病理分期(TNM分期)有关联(均有P<0.05)。比较哈、汉两民族ESCC中c-Met阳性率差异无统计学意义。结论：1、c-Met在食管鳞癌组织中高表达,推测c-Met可作为诊断高侵袭性食管鳞癌的分子标志物。2、c-Met在部分ESCC中高表达,与患者的年龄、性别、部位、肿瘤大小无明显关联,与患者肿瘤浸润深度、淋巴结转移及TNM分期有显著相关性,可能与肿瘤细胞的分化程度相关。3、c-Met基因在哈与汉族ESCC中表达无明显差异,推测c-Met在食管鳞癌中表达无民族差异性。
目的：肺癌（Lung

查找更多 cancer）已成为威胁人类健康的重大因素，其发病率及死亡率在恶性肿瘤中排名第一。肺癌中大多数为非小细胞肺癌，因NSCLC发病初期无明显症状，许多病人确诊时肿瘤已进展至晚期，该部分患者放弃治疗后超过90%将在一年内死亡。科研人员对分子病理学的深入认知，医学界也普遍关注针对表皮生长因子受体的特异性靶向治疗药物，EGFR属于erB/HER家族，主要在细胞膜表面上作为跨膜蛋白分布，非小细胞肺癌靶向治疗是以阻断EGFR信号传导通路为靶点，目前国内外很多试验显示预测表皮生长因子受体TKIs疗效元素是表皮生长因子受体基因突变。本试验对入组的非小细胞肺癌表皮生长因子受体基因19、21外显子突变情况进行对比，并分析基因突变与患者临床病理特征、吉非替尼治疗后疗效及患者用药后的生存时间的关系，从而为EGFR基因19、21外显子突变的非小细胞肺癌患者提供更好的个体化靶向治疗方案及判定预后的指标。

方法：本课题收集我院收治的非小细胞肺癌患者共56例，时间从2011年6月至2012年8月。病例均经过组织病理学诊断为非小细胞肺癌。按要求摘录入组病例的病案资料，包括患者性别、发病年龄、是否吸烟、病理类型、TNM分期、应用的治疗措施及用药后的疗效与生存时间等。表皮生长因子受体基因19、21外显子突变状态的检测使用直接测序法，同时对比EGFR基因19、21外显子突变与NSCLC患者临床病理特征、吉非替尼治疗后疗效及患者用药后的生存时间的关系。试验所得数据输入SPSS19.0统计分析软件进行χ2检验；使用Kaplan-Meier法对试验组及对照组间生存情况进行对比并绘制生存函数曲线，各组间差异应用log-rank检验，对比各种EGFR基因19、21外显子突变情况与非小细胞肺癌患者生存时间的关系，以P60岁者23例（23/56，41.07%）；腺癌41例（41/56，73.21%），非腺癌15例（15/56，26.79%）；吸烟患者24例（24/56，42.86%），不吸烟患者32例（32/56，57.14%）；临床分期Ⅱb期患者19例（19/56，33.93%），Ⅲ+Ⅳ期患者37例（37/56，66.07%）；标本来源：原发灶占51.79%（29/56）；锁骨上淋巴结转移灶标本占66.07%（37/56）。 时间 2.本研究对入组的56例NSCLC患者进行EGFR基因19、21外显子突变检测，EGFR基因19外显子突变34例（34/56，60.71%），21外显子突变22例（22/56，39.29%）。 3. EGFR基因19、21突变中病理类型腺癌患者的突变率（73.21%）明显高于非腺癌患者（26.79%），两者突变率的差异具有统计学意义（P
目的：检测19个常见癌基因的238个突变位点在原发及复发性软组织肉瘤中基因突变的情况，探讨基因突变在软组织肉瘤发生发展中的作用及其与临床意义。 方法：（1）以基质辅助激光解析电离时间飞行质谱技术（MALDI-TOF-MS）为平台，采用OncoCarta 可能 panel v1.0检测原发及复发性软组织肉瘤样本的基因突变情况；（2）运用Typer4.0软件对突变检测结果进行筛选及比对；（3）SPSS17.0软件分析突变与相关临床参数间的关系。 结果：（1）软组织肉瘤基因突变结果：16例原发性软组织肉瘤中3例（18.75%）存在基因突变，而9例复发性样本中4例（44.4%）存在基因突变，涉及到的基因有FGFR1、FGFR3、KIT、PIK3CA、ABL、KRAS、RET；（2）不同组织学亚型基因突变结果：1）在19例脂肪肉瘤中检测到4例存在基因突变，包括2例去分化脂肪肉瘤（FGFR3、FGFR1和KIT），2例粘液性脂肪肉瘤（KIT和PIK3CA）；2）2例复发性炎性肌纤维母细胞瘤分别存在KIT和PIK3CA的基因突变，对应的2例原发肿瘤中未检测到任何突变；3）1例复发性多形性未分化肉瘤存在ABL、KRAS、PIK3CA和RET4个基因的共突变，原发样本未检测到基因突变；（3）统计学分析结果：原发组与复发组基因突变的分布差异无显著性（P＞0.05）；年龄＞40岁组的平均突变率高于年龄＜40岁组（P＜0.05）；在原发样本中，组织学3级的肿瘤样本平均基因突变率高于组织学1-2级（P＜0.05）；生存分析显示FGFR1/3突变组术后生存期低于未突变组（P＜0.05）。

结论：（1）粘液性脂肪肉瘤存在PIK3CA基因突变；首次在去分化脂肪肉瘤中检测到FGFR1/3基因突变，该基因突变可能与去分化脂肪肉瘤不良预后有关；（2）首次在复发性炎性肌纤维母细胞瘤中检测KIT和PIK3CA的突变，这些基因突变可能参与了炎性肌纤维母细胞瘤的复发。
研究目的 探讨快速康复外科理念在支气管袖状肺叶切除治疗中央型肺癌中的应用。 方法 选择在我科接受支气管袖状肺叶切除治疗的中央型肺癌患者57例,随机分为2组,其中23例(快速康复处理组),围手术期采用快速康复外科理念进行处理；34例(对照组)围手术期按传统方法处理。 结果 快速康复处理组术后排气时间、术后拔除胸腔引流管时间、术后住院时间、住院总费用均低于对照组(P<0.05)。快速康复处理组发生切口感染／裂开2例(8.70%),心血管并发症1例(4.35%),肺不张／肺部感染3例(13.

7%，其它较多为鼻咽部（20.2%），扁桃体（10.24%），腭部（8.92%）；男女性别比例为1.53:1；②霍奇金淋巴瘤占发生于头颈颌面部恶性淋巴瘤的15.35%；非霍奇金淋巴瘤占发生于头颈颌面部恶性淋巴瘤的84.65%；其中结外非霍奇金淋巴瘤患者占发生于头颈颌面部恶性淋巴瘤的57.87%，好发部位主要有鼻咽部（46.81%），扁桃体（17.69%），腭部（15.42%），唾液腺（11.36%）；③无痛性肿块型好发部位是颈部和鼻咽部，表现为原发部位为溃疡坏死型的病变，以腭部和扁桃体较为常见；表现为弥漫性炎症浸润型在鼻咽部和腭部较多见，原发组织水肿红斑型常见于面颊部。 2．临床分期及病理分型：临床Ⅰ期和Ⅱ期较多，占58.42%，Ⅲ期和Ⅳ期占41.58%。在645例非霍奇金淋巴瘤病例中，以B细胞来源的恶性淋巴瘤多见（478例），占74.11%，常见的类型有弥漫性大B细胞淋巴瘤（DLBCL）、Burkitt淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、粘膜相关性淋巴样组织结外边缘区淋巴瘤（MALT）、套细胞淋巴瘤、小淋巴细胞样淋巴瘤、淋巴浆细胞淋巴瘤和浆细胞瘤；T细胞来源的恶性淋巴瘤在非霍奇金淋巴瘤中有167例，占25.89%，最常见的是结外NK/T细胞淋巴瘤，其次是前驱T淋巴母细胞瘤、间变大细胞淋巴瘤、外周T细胞淋巴瘤（PTCL）、血管免疫母细胞T细胞淋巴瘤和皮下脂膜炎样T细胞淋巴瘤。

那个 3．预后分析：132例淋巴瘤患者的1、3、5年预期生存率分别为：84.85%、57.36%、34.18%；生存分析显示，不同年龄、不同病理类型、不同临床分期、是否放疗、是否化疗的患者之间生存率差异具有统计学意义；COX回归分析显示，年龄、病理类型、临床分期及原发部位是影响预后的主要因素。 结论： 1．发病年龄从3岁至85岁，平均年龄47岁，从61岁至70岁阶段达高峰;男女性别比例为1.53:1;发病部位以颈部最多见。 2．临床Ⅰ期和Ⅱ期较多；非霍奇金淋巴瘤中，B细胞型比T细胞型多见，B细胞来源的恶性淋巴瘤最常见的类型是弥漫性大B细胞淋巴瘤（DLBCL），T细胞来源的恶性淋巴瘤中最常见的是结外NK/T细胞淋巴瘤。 3．NHL1年生存率较高，但5年生存率较低；年龄、疾病分期、病理分型是NHL预后的危险性因素；年龄越高的NHL患者预后较差；早期患者预后明显较晚期患者好；B细胞型较T细胞型淋巴瘤预后好；化疗是NHL预后的保护性因素，即接受规律化疗的患者预后好于未化疗患者。

由于本组研究中病例数比较少、临床病历资料不完善，并且随访时间较短暂，致使本组研究中完整的数据缺失较多，目前只能看出存在一些差异的趋势，因此，关于影响头颈颌面部恶性淋巴瘤的预后因素还需扩展病例数，同时延长随访时间获得更具体的信息来做进一步的相关研究。
1背景及目的 Selleck Birinapant 肺癌是全球死亡率最高的恶性肿瘤，估计到2030年，全球将有830万人死于吸烟相关性疾病，其中肺癌占3.1％。肺癌中超过80%为非小细胞肺癌(NSCLC)，5年存活率不超过10%。肺癌的高发病率和低存活率，研究其发病机制将有助于防止疾病发生发展。全球肿瘤研究者共识：开展积极有效的筛查、早期诊断、早期治疗、早期干预以降低肺癌的发病率、死亡率和提高治疗率。 肿瘤的发生是环境因素和遗传因素共同作用的结果，是一个受多因素影响、涉及多基因、表现多阶段的十分复杂的过程。肿瘤和凋亡关系密切，肿瘤发生的一个重要原因是基因水平上诱导凋亡基因失活，抑制凋亡基因过度表达。有研究表明，细胞凋亡相关基因改变与肿瘤预后有一定关系。诱导肿瘤细胞凋亡是肿瘤治疗的重要策略。随着分子生物学技术的不断发展和完善，对肿瘤发病机制的认识日益深化，基因治疗已成为继化疗、放疗、手术等治疗后极有发展前景的一种高效、特异、靶向的治疗方法。 国内外文献对凋亡基因c-myc已有研究，但caspase-8在恶性肿瘤细胞中的表达及其与细胞调亡关系的研究相对尚少，在NSCLC中的研究甚少。本文主要研究c-myc、caspase-8在NSCLC的表达及临床意义，研究两者在NSCLC中表达的相互关系。c-myc与caspase-8联合研究为临床诊断和治疗提供实验依据。

selleck激酶抑制剂 2对象和方法 2.1研究对象 随机收集郑州大学第一附属医院病理科2010-2012年胸外科送检的肺癌标本50例，年龄在44-77岁之间，鳞癌27例，腺癌23例，所有患者手术前未进行放化疗等其他治疗，病理诊断为NSCLC，癌组织分期按照美国联合癌症分类委员会（AJCC）和国际抗癌联盟（UICC）制定的分期标准[1]。选取NSCLC组织边缘3cm以外的经病理证实的20例正常肺组织为对照组，所有标本均被石蜡包埋，由病理科专业人员切片，NSCLC组织及正常肺组织各切3张。 2.2实验方法 检测c-myc、caspase-8在NSCLC组织及正常组织中的表达采用免疫组织化学法（S-P法），检测c-myc、caspase-8在NSCLC组织及正常组织中的细胞凋亡采用TUNEL法。 2.3结果判定 c-myc、caspase-8阳性标准：c-myc在肺鳞癌中主要表达在细胞核，肺腺癌中主要表达在细胞浆，阳性表达均表现为棕黄色颗粒。caspase-8的染色为细胞质和（或）细胞核出现棕黄色颗粒。c-myc、caspase-8在NSCLC中的表达从两方面进行定量判断：①阳性染色程度：无染色为0分，浅黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分。②染色细胞百分率：光镜（400倍）下每个视野计数100个细胞，每张切片随机挑选10个视野，计算阳性细胞数占总癌细胞数百分比，＜10%为0分，10%-25%为1分，26%-50%为2分，≥51%为3分[2]。两个定量数字相加，总分值小于4为阴性，大于等于4为阳性。 细胞凋亡：凋亡细胞经TUNEL法处理后，运用400倍光学显微镜，结合凋亡细胞染成棕黄色综合判断，计数每1000个肿瘤细胞中凋亡细胞的个数，进行统计学分析[3]。凋亡细胞指数（AI）=调亡细胞数/计数总细胞数。 2.4统计学处理 本实验所有统计均应用SPSS17.0软件进行处理，c-myc、caspase-8的表达及其与NSCLC临床病理特征的关系采用配对四格表的卡方检验。c-myc与caspase-8在NSCLC中表达的相关性应用配对资料的相关性分析，c-myc、caspase-8与凋亡的关系采用直线相关性分析。α=0.05为检验水准。 3结果 3.1c-myc在NSCLC中的表达及其与临床病理特征的关系 c-myc经免疫组化后，细胞胞质和（或）细胞胞核被染成棕黄色，肺癌组织50例，阳性率为60.0%（30/50），正常肺组织20例，阳性率为20%（4/20），两者差异有统计学意义（χ2=9.150，P=0.002），但c-myc在癌组织的染色均要深于正常组织。结果显示，c-myc在腺癌中的表达率（78.3%）高于在鳞癌中的表达率（44.4%），差异有统计学意义（χ2=5.918，P=0.015）。高分化组织的阳性表达率（88.9%）要高于中分化（65.4%）和低分化（33.3%），三者之间差异有统计学意义（χ2=7.888，P=0.

5%(v/v)10min于再灌注最初的10min。观察指标为左室的血流动力学数据、心肌梗死面积和MG53的表达。在正常和高胆固醇血症在体大鼠心脏缺血再灌注模型上,经历30min的局部缺血和2h的复灌,同时给予了七氟烷后处理、缺血后处理以及SB216763(GSK的抑制剂)。观察指标为左室的血流动力学数据、心肌梗死面积、凋亡,MG53,

购买Romidepsin PI3K-p85, p-Akt, p-ERK1/2和P-GSK3β的表达。 结果：对于离体心脏研究,七氟烷后处理相比于缺血再灌注对照组,明显改善了血流动力学参数,增加了MG53的表达(P<0.01)。对于在体心脏研究,对于正常大鼠心脏,七氟烷后处理和缺血后处理都有心肌保护作用,而对于高胆固醇血症组大鼠心肌经历缺血再灌注后相比于正常组,有更大心肌梗死面积和更多的凋亡细胞。SB216763对高胆固醇血症组大鼠心肌也有保护作用(P
目的：抑郁症是一种慢性易复发的疾病,世界上约五分之一的人口受到抑郁症的困扰。抑郁症的发病机理尚不清楚,大量文献报道抑郁症与脑源性神经营养子和神经可塑性之间存在一定的联系,然而,其具体的关系尚缺乏系统的研究。单次注射氯胺酮可以在30min内起到抗抑郁效果,并且可以持续1个星期,虽证实可能与脑源性神经营养因子(BDNF)和神经可塑性相关,但氯胺酮的速效及长效的机制尚不清楚。进一步阐明抑郁症与BDNF和神经可塑性的系统关系,研究氯胺酮在治疗抑郁时的速效和长效与BDNF和神经可塑性的具体关系和作用机制,有利于进一步深入了解抑郁症的病理生理学机制,为抗抑郁药物的研发提供理论基础。常春藤皂苷元具有一定的抗抑郁生物活性,然而,其活性不强,对其结构改造以提升其抗抑郁活性的研究较少。 本研究旨在检测在抑郁的发病和治疗过程中,BDNF和神经可塑性的作用；研究糖皮质激素皮质酮对氯胺酮在BDNF表达中的促进作用的影响,并探讨氯胺酮的速效和长效机制与神经可塑性及BDNF的关系；研究氯胺酮增强小鼠海马神经元神经可塑性可能的信号转导通路；对具有抗抑郁活性的常春藤皂苷元进行结构改造,并检测其抗抑郁效果及机制。 点击此处 方法：1.以C57BL/6小鼠作为研究对象,采用长期皮质酮暴露的方法造成焦虑/抑郁模型,经过30d的饮水给药(皮质酮,35mg·L-1)以后,通过高架迷宫实验和悬尾实验,检测小鼠的行为学变化。当确认小鼠已经达到焦虑/抑郁样状态以后,进入治疗、康复阶段,每天腹腔注射氟西汀(18mg·kg-1)。20d以后,检测小鼠的行为学变化。在整个实验过程中,分别在第10d,20d,35d,45d,60d取材,进行高尔基染色和免疫荧光染色。计数海马CA1,CA3区椎体神经元树突棘密度的变化和DG区颗粒神经元树突棘密度的变化,检测海马CA1区,CA3区和DG区(包括新生神经元和成熟神经元)神经元内BDNF的表达变化。

2.以C57BL/6小鼠为研究对象,研究单次注射氯胺酮(3.0mg·kg-1)对小鼠BDNF的表达和神经可塑性的影响。采用长期皮质酮暴露(饮水中给予皮质酮35mg·L-1)造成焦虑/抑郁模型,单次给予腹腔注射氯胺酮以后,使用Western

blotting法检测氯胺酮对BDNF的促进作用在抑郁鼠和正常鼠的不同,并运用糖皮质激素受体抑制剂RU486进行进一步确认。在此基础上,一方面研究短期给予皮质酮对氯胺酮在BDNF表达中的促进作用中的影响,并探讨氯胺酮的速效(30min)和长效(7d)的病理生理学基础：采用皮质酮暴露的方法,给皮质酮3天以后,单次腹腔注射氯胺酮(3.0mg·kg-1)后分别在第30min和第7d取材,检测BDNF的表达和突触素(Synaptophysin)的变化。一方面研究氯胺酮提高小鼠海马神经元突触可塑性的机制：以C57BL/6小鼠为研究对象,在单次给予氯胺酮后的15min,45min,4h和24h时间点取材,应用Western 为什么 blotting法检测Racl信号通路中的RaclGTPase, Tiaml, RacGAPl,和P-cofilin的变化情况,拟探讨氯胺酮提高小鼠海马神经元突触可塑性与Racl信号通路的关系。 3.设计并合成常春藤皂苷元酰胺衍生物N-(3-二甲氨基丙基)-常春藤皂苷元-17-甲酰胺(HGA)。以常春藤皂苷元为原料,经DCC/NHS将常春藤皂苷元28位的羧基活化,加入二甲氨基丙胺反应得HGA。经质谱,核磁氢谱和碳谱对其结构进行确认。然后,经高效液相色谱(HPLC)检测其纯度。在此基础上,在细胞水平,以原代海马神经元为研究对象,用皮质酮(10μmol·L-1)损伤造模,探讨HGA对原代海马神经元的保护作用；在整体动物水平,应用急性给药的方法,研究HGA急性给药对C57BL/6小鼠行为学的影响。并且,从BDNF和神经可塑性的角度研究其抗抑郁作用的机制。 结果：1.神经可塑性和BDNF在抑郁症发病及治疗中的变化 (1)慢性皮质酮暴露及长期的氟西汀治疗对小鼠行为学的影响 给予皮质酮暴露30d以后,高架迷宫实验结果显示,小鼠进入开臂的次数著减少(t=2.202,P=0.043),悬尾实验结果显示小鼠的不动时间显著延长(t=2.094,P=0.047)：经过20d的氟西汀治疗以后,小鼠在高架迷宫实验中进入开臂的次数显著增多(P=-0.007),悬尾实验中小鼠的不动时间显著(P=0.000)减少。 (2)慢性皮质酮暴露及长期氟西汀治疗对小鼠神经可塑性的影响 与相应的对照组相比,10d和20d的皮质酮处理对海马各区神经元树突棘密度没有产生显著的影响,经过35d的皮质酮的处理以后,与相应的溶剂对照组(VEH)的神经元的树突棘的密度相比,CA1区(t=2.626,P=0.030)和CA3区(t=2.

86%(3/7),特异性为99.58%(238/239)。结论:非小细胞肺癌中转移灶可以预测原发灶ROS1融合基因情况,在难以取得原发灶的情况下转移灶可以作为ROS1融合基因测的备选手段。
目的:根据WHO(2015版)肺肿瘤组织学分类标准,探讨军事医学科学院附属医院肺肿瘤的病理类型及分布特点。方法:收集2010年11月1日至2015年3月31日病理诊断2

771例肺肿瘤,复习其临床资料、HE切片及免疫组织化学切片。按WHO(2015版)分类标准进行病理诊断及分类。结果:2 771例肺肿瘤中多数为男性1 671例(60.30%),少数为女性1 100例(39.70%);左肺1 286例(46.41%)、右肺1 456例(52.54%)、双肺29例(1.05%);年龄16~91岁。腺癌1 622例(58.53%)、鳞癌424例(15.30%)、腺鳞癌32例(1.15%)、神经内分泌肿瘤465例(16.78%)、大细胞癌19例(0.69%)、梭形细胞癌1例(0.04%)、巨细胞癌1例(0.04%)、癌肉瘤17例(0.61%)、淋巴上皮样癌1例(0.04%)、唾液腺型肿瘤4例(0.14%)、腺瘤11例(0.40%)、间叶性肿瘤55例(1.98%)、淋巴瘤7例(0.25%)、异位起源性肿瘤13例(0.47%)、转移性肿瘤99例(3.57%)。非小细胞肺癌-非特指型,倾向于腺癌小活检中TTF-1抗体阳性率为92.60%(1 263/1 364)、Napsin A抗体阳性率为97.07%(1 324/1 364);非小细胞肺癌-非特指型,倾向于鳞癌小活检中CK5/6阳性率为96.99%(290/299)、P40阳性率为98.51%(66/67)、P63阳性率为93.72%(343/366)。非小细胞肺癌分子亚型首次活检中EGFR基因突变率34.77%(378/1 购买AZD6244 087),KRAS基因突变率2.92%(24/823),BRAF基因突变率0.87%(5/572),ALK融合基因阳性率11.99%(41/342),ALK-D5F3抗体阳性率22.23%(66/296),ROS1融合基因阳性率2.56%(7/273),c-Met基因扩增率4.40%(12/273),c-Met基因突变率6.67%(1/15),Her-2基因突变率0.73%(2/273),PIK3CA基因突变率13.33%(2/15),PTEN基因突变率6.67%(1/15),RET融合基因阳性率0(0/15)和NTRK1融合基因阳性率0(0/15)。二次活检率EGFR基因4.76%(18/378),ALK融合基因2.44%(1/41)。结论:肺肿瘤在男性患者中高发,病变部位最常见于右肺,腺癌已经成为最常见的病理类型。首次活检中非小细胞肺癌驱动基因中EGFR基因、ALK融合基因存在较高的突变率,其他基因突变率虽低但不容忽视。二次活检率较低,需引起重视。
目的探讨棘皮动物微管样蛋白4-间变淋巴瘤激酶(EML4-ALK)和表皮生长因子受体(EGFR)基因突变状态与未经系统酪氨酸激酶抑制剂(TKIs)治疗的Ⅳ期维吾尔族非小细胞肺癌(NSCLC)患者长期生存的关系。方法收集97例未经TKIs治疗的Ⅳ期维吾尔族NSCLC患者的组织标本,分别运用FISH及ARMS方法检测EML4-ALK基因融合及EGFR基因突变状态并进行生存分析。结果

GDC-0941溶解度 97例Ⅳ期维吾尔族NSCLC组织中,6例(6.2%)存在EML4-ALK基因融合,26例(26.8%)存在EGFR基因突变。生存分析显示,EML4-ALK基因融合患者与EML4-ALK基因未融合患者总生存期(OS)差异无统计学意义(P=0.941),EGFR基因突变患者与EGFR野生型患者OS比较差异无统计学意义(P=0.607)。EGFR/EML4-ALK综合突变对Ⅳ期维吾尔族NSCLC患者长期生存发现,EGFR突变型组、EML4-ALK阳性组、EML4-ALK阴性+EGFR野生型组患者中位OS分别为17.7、17.3、16.2个月,差异无统计学意义(P=0.915)。结论在排除TKIs治疗影响的情况下,EML4-ALK融合基因与EGFR基因突变状态尚不能作为评估Ⅳ期维吾尔族NSCLC患者预后的独立因素。
目的探究肿瘤相关巨噬细胞促进肝癌细胞转移的潜在分子机制。方法巨噬细胞经刺激后与肝癌细胞共培养,利用RT-PCR和流式细胞术检测肿瘤相关巨噬细胞对肝癌细胞c-Met分子表达的影响,利用Transwell细胞迁移实验检测HGF-c-Met通路对肝癌细胞迁移能力的影响。结果

THP-1来源的巨噬细胞与肝癌细胞共培养后,肝癌细胞c-Met分子在mRNA和蛋白水平的表达均有增强;与巨噬细胞共培养的肝癌细胞,在重组蛋白HGF诱导作用下,其迁移能力明显增强。结论肿瘤相关巨细胞可以上调肝癌细胞c-Met分子的表达,高表达的c-Met分子增强了肝癌细胞的迁移能力。
循环游离DNA以细胞外游离形式存在于血液中,可由正常细胞和癌细胞释放。非小细胞肺癌(NSCLC)患者血液中游离DNA水平高于正常人,且循环游离DNA可以反映癌组织的基因突变,甲基化状态,拷贝数改变,杂合子丢失等特征,是肺癌诊断、治疗、预后检测中具有巨大潜力的生物学指标。本综述简要介绍了循环游离DNA的生物学特性,并对近年来循环游离DNA基因改变检测在NSCLC中的临床应用进行阐述。
目的探讨Ventana全自动免疫组化法检测不同标本肺腺癌间变性淋巴瘤激酶(ALK)蛋白表达的阳性率及一致性。方法收集606例肺腺癌标本,包括手术切除标本261例、小活检标本244例和胸水细胞块标本101例,采用Ventana全自动免疫组化染色仪、抗ALK兔单克隆抗体(D5F3)和超敏检测系统进行染色,检测ALK蛋白表达情况。结果 selleck产品 606例肺腺癌标本中,49例ALK(+),557例ALK(-),阳性率为8.1%。手术切除标本261例中20例(+),阳性率为7.7%;小活检标本244例中20例(+),阳性率为8.2%;胸水细胞块标本101例中9例(+),阳性率为8.9%;比较3种标本的ALK蛋白阳性率,差异不显著(P>0.05)。606例标本中,同一患者兼具手术标本及小活检标本46例,有2对标本ALK(+),其余标本均(-),检测结果完全一致;同一患者兼具小活检标本和胸水细胞块标本14例,小活检标本1例(+),胸水细胞块标本3例(+),2对标本检测ALK蛋白结果存在差异(14.3%,2/14)。结论 Ventana全自动免疫组化检测可以作为肺腺癌ALK蛋白阳性患者克唑替尼靶向治疗的诊断方法。手术切除标本、小活检标本和胸水细胞块标本均可作为检测ALK蛋白的样本。肺腺癌原发灶与转移灶ALK蛋白检测是否存在差异性表达,有待进一步研究。
1研发c-Met抑制剂—从苗头到先导化合物1.

利用基因工程技术构建ILK siRNA,PCR鉴定阳性重组子后,测序验证。2.大鼠肾小管上皮细胞株(NRK-52E)分设正常组及CsA诱导组,后者分别采用CsA不同浓度和时间处理,观察细胞增殖抑制情况。3.将NRK52E细胞培养分为5组:空白对照组(A组):仅加入含10%胎牛血清的H-DMEM培养基;CsA处理组(B组):细胞培养液加CsA(lmg/L);干预1组(C组):加TGF-pi阻断剂(SB…
研究背景:甘露聚糖结合凝集素(mannan-binding lectin,MBL)系肝细胞分泌的血浆蛋白,是天然免疫系统中的关键分子。本实验室曾报道MBL影响树突状细胞的分化成熟,并以浓度依赖方式调节 Raji细胞增殖,提示MBL不仅发挥天然免疫作用,而且具有一定的免疫调节功能。但目前尚未见MBL影响单核细胞(monocyte,Mo)增殖的报道。本实验以人Mo为研究对象,探索MBL对其增殖的影响及其作用机制。目的:观察MBL对人Mo增殖、凋亡及细胞周期的影响,并初步探讨其分子机制。方法:分离人外周血单个核细胞(peripheral

blood mononuclear cell,PBMC),磁式…
目的:探讨脐带间充质干细胞(UC-MSCs)上调系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血调节性T细胞(Treg)的作用机制。方法:20例SLE患者及正常人外周血单个核细胞(PBMC)分别与UC-MSCs以1:1,10:1及50:1比例共培养72 不 h,流式细胞术检测PBMC中CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞比例。分别以SLE患者及正常人PBMC及血清刺激UC-MSCs,实时荧光定量聚合酶链反应(real-time PCR)检测UC-MSCs TGF-β1 mRNA表达水平,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测共培养上清TGF-β1表达水平。并构建
目的:研究生长因子TGF-β1、Activin A及TGF-β/Activin信号通路特异性受体抑制剂SB431542单独以及联合应用对牙髓细胞表达Nanog的影响,探讨TGF-β/Activin信号通路对Nanog的调控作用。方法:采用不同浓度的TGF-β1、Activin A和SB431542刺激第3~5代人牙髓细胞,检测刺激因子浓度对Nanog表达的影响;将TGF-β1、Activin A刺激细胞0、3、6、12、24、48、72h,检测不同时间Nanog表达的变化量;选取合适浓度的TGF-β1、Activin A和SB431542分别及联合处理牙髓细胞,再以SB431542处理过表达N…
【目的】通过调控骨形态发生蛋白-7(BMP-7)表达观察其对石英致矽肺纤维化的作用及机制;探讨外源性小分子通路抑制剂对石英致矽肺纤维化进程的影响。【材料和方法】使用不同浓度石英染小鼠巨噬细胞上清液刺激大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(RLE-6TN),建立剂量梯度模型,倒置相差显微镜观察细胞形态学变化及迁移能力的改变。应用慢病毒转染技术建立BMP-7过表达及沉默稳转的RLE-6TN细胞系观察其对石英致矽肺纤维化的影响。抑制剂研究分别给予TGF-β抑制剂SB-431542或BMP抑制剂LDN-193189进行预处理。通过检测羟脯氨酸(Hyp)含量反应纤维化程度,应用实时荧光定量PCR及Western

不 Blo…
【目的】研究邻苯二甲酸二丁酯(di-n-butyl phthalate,DBP)对离体大鼠睾丸支持细胞vimentin骨架系统的破坏作用并探索对PPARα(peroxisome proliferation-activated receptorα)及下游MAPK、Smad2/3信号途径在DBP导致vimentin骨架系统损伤中的作用机制。【材料和方法】体外原代培养大鼠睾丸支持细胞,用100μM DBP处理细胞。用免疫组化和激光共聚焦显微镜观察vimentin骨架系统在支持细胞中的表达和分布情况,用Western blotting检测PPARα、vimentin、磷酸化vimentin、MAPK、…
目的:研究转化生长因子-β1(transformed growth factor-β1,TGF-β1)对人成熟树突状细胞(mature dendritic cells,m DCs)细胞骨架、运动能力和免疫功能的影响及潜在分子机制,为深入了解肿瘤免疫逃逸机制和提高DCs抗肿瘤疫苗疗效提供理论依据。方法 :利用免疫磁珠从新鲜人外周血中分选出CD14~+单核细胞,在体外经肿瘤坏死因子-α、重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子、白细胞介素-4诱导培养7天后分化为m

DCs,用5 ng/ml浓度的TGF-β1分别处理m DCs 15,30,60,120,360,720,1440 min,观察F-actin,…
目的:树突状细胞(dendritic cells,DCs)是目前发现的人体内功能最强大的抗原递呈细胞,肿瘤微环境中的抑制性细胞因子能够影响DCs的免疫功能和微观流变学特性,转化生长因子-β_1(transformed growth factor-β_1,TGF-β_1)是肿瘤微环境中重要的抑制性细胞因子。研究TGF-β_1对人成熟树突状细胞(mature 确认细节 dendritic cells,mDCs)骨架蛋白的影响及潜在的分子机制,为深入研究肿瘤的免疫逃逸机制和提高基于DCs的抗肿瘤免疫治疗
目的采用海人酸致痫SD大鼠模型,通过腹腔注射ALK5抑制剂(SB431542)干扰ALK5受体,观察癫痫大鼠海马组织中ALK1及其下游分子p-Smad1的mRNA及其蛋白的表达,研究癫痫大鼠ALK5对ALK1受体的作用,探讨可能的干预癫痫发作的新靶点。方法红藻氨酸(kainic acid,KA)侧脑室注入SD大鼠
背景和目的脑卒中后神经干细胞移植治疗能够有效的促进神经功能的恢复,但是如果高效均一性神经干细胞仍不明确。随着成纤维细胞成功诱导为多潜能干细胞,白体移植得以实现并且避免了许多伦理问题。诱导型多潜能干细胞在形态、功能和诱导过程上都与胚胎干细胞非常类似,而在诱导效率和诱导可控性上要比胚胎干细胞差。既往研究发现,骨发生蛋白(BMP)加LlF能够
目的脑卒中后形成的胶质瘢痕是阻碍轴突再生的主要因素之一,本课题拟研究RGMa在大脑中动脉阻塞/再灌注模型(MCAO/再灌注)大鼠胶质瘢痕形成过程中发挥的作用及机制。材料与方法 1、成年雄性SD大鼠随机分成假手术2d、7d、14d组,MCAO/再灌注模型2d、7d、14d组、MCAO/再灌注+RGMa特异性拮抗多肽6FNⅢ7d、14d组、
Introduction:Smoke-inhalation injury causes a destruction ofthe ciliated epithelium that lines the tracheobronchial tree.