28 mmol/L EI的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10倍分别分成EI1～EI10组、H/R+10mmol·L~(-1)格列苯脲组(G组)、和H/R+1.68 时间 mmol·L~(-1) EI +10mmol·L~(-1)格列本脲组(EIG组)、H/R+100 nmol·L~(-1) wortmannin组(W组)、H/R+1.68 mmol·L~(-1) EI +100 nmol·L~(-1) wortmannin组(EIW组)和H/R+1.68 mmol·L~(-1) EI +10 umol·L~(-1)

Bay K8644组(EIB组)各组取细胞培养上清液测定乳酸脱氢酶(LDH)活性和心肌肌钙蛋白I(cTnI)含量,细胞匀浆后测定心肌细胞超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量;倒置显微镜观察心肌细胞生长的特性及形态的变化;流式细胞术检测N组、H/R组、F组、EI6组、EIB组细胞内钙离子浓度;Western blot检测N组、H/R组、F组、EI6组和EIW组心肌细胞AKT的磷酸化水平。 结果: 1心肌细胞形态学观察:心肌细胞培养24h出现自发性搏动,72h后聚集成簇,形成功能合胞体后呈现频率为80-100次/min的同步节律性搏动。细胞形态呈梭形或不规则三角形,伪足明显,可发生相互融合,且其超微结构完整、清楚。H/R后心肌细胞皱缩变圆,伪足减少,细胞搏幅减弱、频率减慢甚至出现停搏,EI和脂肪乳组对H/R心肌细胞的形态结构有明显改善。 2各组心肌细胞SOD、LDH、cTnI活性与MDA含量的比较:与对照组比较,H/R组细胞SOD下降,MDA、cTnI和LDH升高(P<0.05),但EI组与脂肪乳组比较降低更明显(P<0.05);EI可显著上调SOD活性(P<0.05)、降低MDA、cTnI和LDH含量(P0.05)。 4心肌细胞AKT磷酸化水平是P-AKTN组< P-AKTH/R组< P-AKTW组< P-AKTF组< P-AKTEI6组。 5心肌细胞钙离子浓度水平是N组< EI6组< EIB组< F组
目的：通过对P-p38MAPK在退变的腰椎间盘组织中表达水平的观察,探讨P-p38MAPK与椎间盘退变发生发展关系,了解腰椎间盘退变的病理生理状态,为腰椎间盘突出症的保守治疗提供实验依据。 方法：实验组收集54例腰椎间盘突出症患者的间盘组织,其中男性30例,女性24例,年龄34-53岁,取自2008年7月-2010年1月在山西医科大学第一医院骨科手术治疗的腰椎间盘突出症患者；对照组取自16例特发性脊柱侧弯患者的椎间盘组织,男性7例,女性9例,年龄11-21岁。HE染色,光镜下观察髓核组织是否退变；应用免疫组化染色技术,进行P-p38MAPK表达水平的检测,P-p38MAPK蛋白阳性表达的细胞内有呈黄色或棕黄色的颗粒。每张切片在光镜下随机选取10个视野,计数阳性细胞百分比。着色强度分为：无色为0分、浅黄色和黄色为1分、棕黄色为2分。阳性细胞数分为：50%为2分。两项合计乘积0分为阴性,1-2分为弱阳性,4分为强阳性。所得数据应用χ2检验进行统计学分析。

可能 结果： 1.HE染色组织学显示：实验组椎间盘组织,纤维环原有的板层结构紊乱,细胞数量减少,失去原有软骨细胞形态,突出椎间盘组织周围炎细胞浸润。 2.免疫组织化学(Evision法)染色显示：54例实验组间盘组织中,48例表达阳性,阳性率为88.89%(48／54)；16例对照组中仅有2例为弱阳性表达,阳性率为12.50%(2／16),实验组和对照组之间差异具有显著性(P0.05)。 结论： 1.P-p38MAPK参与了腰椎间盘的退变过程,在腰椎间盘突出症的发病机制中发挥了重要的作用。 2. P-p38MAPK的表达水平和腰椎间盘突出的类型没有相关性。
低氧是一种常见的非基因毒应激,已证实机体对缺氧损伤的习服与适应受糖皮质激素(glucocorticoid,

GC)的影响。在低氧条件下分泌增多的GC能通过糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor, GR)的介导,调节基因表达,但是至今对于参与了低氧适应的糖皮质激素／受体(GC/GR)的靶基因还知之不多。小G蛋白RhoB是近年来我们发现的一个新的GC/GR上调蛋白。国内外近年来的研究表明,RhoB是一个早期反应基因,能够被多种基因毒应激原(致DNA损伤),如放射线、紫外线、抗癌药(如5-氟脲嘧啶、顺铂)等上调或使其激活,并有报道RhoB上调能够促进细胞存活。考虑到RhoB是GC/GR调节蛋白,因此推测该蛋白有可能也在低氧中起作用,本课题从在体和离体两个水平观察了低氧对RhoB表达的影响,并进一步研究了低氧影响RhoB表达的机制,以进一步阐明GC对低氧适应的机制。 我们首先将Sprague Dawley (SD)大鼠放入含8%02、92%N2的混合气体的低氧舱内不同时间复制急性缺氧大鼠模型,采用Real-time PCR及Western blot方法检测了大鼠肺组织中RhoB mRNA及蛋白的表达情况。结果发现,大鼠肺组织中RhoB INK1197 mRNA在低氧后8h时开始上调,12h时达到最大值；而大鼠肺组织中RhoB蛋白在低氧后16h表达量最高。 已有实验表明低氧暴露的动物血液中糖皮质激素明显增高,为了确定GC在机体上调RhoB表达的过程中发挥了多大的作用,我们摘取了大鼠的肾上腺以去除内源性肾上腺激素对RhoB表达的影响。我们将大鼠随机分为假手术常氧组、假手术低氧组、其余去腺后分为常氧组、低氧组、Dex组和低氧加Dex共处理组。对肺组织RhoB mRNA的检测结果显示,去腺常氧组大鼠RhoB mRNA的表达与假手术常氧组相比略有降低；去腺Dex组和去腺低氧组大鼠RhoB mRNA分别与去腺常氧组相比均有明显增高；而去腺大鼠用Dex和低氧联合处理,RhoB mRNA的表达增加更为明显。RhoB蛋白也有类似的变化。研究结果表明在体内低氧和Dex均能上调RhoB的表达,而且二者联合具有叠加或协同作用。 为了排除整体低氧时体内增多的神经内分泌激素及相关的一些因子对RhoB表达的影响,考虑到肺上皮细胞和巨噬细胞是肺组织中两种最重要的细胞,我们进一步观察了低氧对体外培养的人肺腺癌细胞系A549细胞、小鼠巨噬细胞系RAW264.

83:1，中位年龄为49.3岁，30~60岁发病病例占到45.8%，发病年龄呈单高峰分布；淋巴结肿大起病分类的前4位分别为：颈部淋巴结（86例，29.0%），纵膈淋巴结（63例，21.2%），锁骨上淋巴结（41例，13.8%），腹股沟淋巴结（9.1%）；而结外淋巴组织起病分类的前4位分别为：鼻腔（16.5%），除鼻以外的口咽淋巴结环（10.8%），骨髓（6.4%），胃粘膜（5.4%）；局部症状分布为：颈部肿块（95例，32.0%），胸痛和胸闷（19例，6.4%），腹痛（14例，4.7%），皮肤瘙痒（12例，4.0%）；B细胞来源的NHL总的有效率为73.7%，而CR和PR分别为38.4%和35.4%；对于T/NK细胞来源NHL总的有效率为40.5%，而CR和PR分别为14.3%和26.2%；B细胞来源组的NHL的总的有效率和CR明显高于T/NK细胞来源组（χ2=7.977，14.131；P=0.005，0.001）；DLBCL组中高危和高危组为27例（27/64例，42.2%），ENK/T-NT为21例（21/32，65.6%），DLBCL低中危以下组构成比为57.9%；141例完成3周期以上化疗的NHL患者，中位生存期为45.0月，平均生存期为58.5月，3年生存率为52.9%，5年生存率为44.3%；NHL病例通过引入PET/CT影像学检查结果排除CRu病例，与未引入PET/CT评价比较，CR比例从25.0%，提高到37.5%，而PR比例也从12.5%提高到37.5%；IPI预后指标低危组DLBCL病例3年生存率为77.8%，高危组DLBCL病例3年生存率为59.4%，且两者总的生存期比较具有显著差异（χ2＝3.559，P=0.037）；Ann

哪里 Abor临床分期分组的早期组DLBCL病例3年生存率为83.6%，中晚期组DLBCL病例3年生存率为64.2%，两者总的生存期比较无显著差异（χ2＝2.869，P=0.09）；老年人DLBCL采用CD20（+）病例组3年生存率为78.4%，CD2（0-）病例组3年生存率为89.2%，两者总的生存期比较无显著差异（χ2＝1.907，P=0.167）；老年人DLBCL采用R-CHOP方案组3年生存率为67.7%，CHOP方案组3年生存率为62.7%，两者总的生存期比较无显著差异（χ2＝1.002，P=0.317）。 结论：1.南华大学附属第一医院收治的NHL病例病理亚型分类的前3位分别是：DLBCL-NOS，ENK/T-NT，MALT；2.本院规范化疗3周期以上B细胞来源的NHL总的有效率为51.5%，T/NK细胞来源NHL总的有效率为33.3%，5年生存率为44.3%；3. PET/CT影像学检查可能有助于提高DLBCL疗效评价的准确性。
背景与目的： 肺癌是目前全球发病率和死亡率最高的恶性肿瘤之一，发病呈逐年上升趋势。作为威胁全世界人类健康的重大疾病，肺癌发病隐匿，早期症状不明显易被忽视，大部分患者在初次诊断时已是晚期，这是目前肺癌疗效不佳的主要原因。作为肿瘤的两大生物学特性，侵袭和转移是导致肿瘤复发以及患者死亡的主要原因之一。而通过对肺癌细胞发生侵袭和迁移的机制的研究，对于控制肺癌的复发和转移有着重要的意义，这也是当今肺癌研究的热点。肿瘤细胞发生侵袭和迁移的过程有多条信号通路参与。其中MAPK信号通路中的一条经典途径——P38MAPK信号通路在肿瘤细胞侵袭和迁移发挥着重要的作用，活化的P38MAPK可以通过调节特定的转录因子的表达和生物活性，实现对肿瘤细胞生物学特性的影响。肿瘤细胞的上皮-间叶转变是指上皮源性肿瘤中的某些细胞在与周围间质相互作用时，丧失其上皮源性，表现为间质细胞特征，也是肿瘤发生侵袭和转移的重要环节，其相关蛋白的表达水平变化与EMT的发生密切相关；EMT发生时，上皮源性肿瘤中的某些细胞在与周围间质相互作用时，丧失其上皮源性，表现为间质细胞特征，是肿瘤发生侵袭和转移的重要原因之一。此外基质金属蛋白酶9因参与基底膜与ECM主要成分IV型胶原的降解，而在肿瘤的侵袭和转移过程中也发挥着重要的作用。研究表明P38MAPK信号通路对肿瘤的复发和转移的影响可分别通过影响EMT相关蛋白的表达或者影响MMP9的活性而实现，但在肺癌中，三者之间的关系尚不明确。为此，本实验将通过抑制P38的活性，观察人肺癌细胞系（H1299、95C）的侵袭和迁移能力的改变，并重点研究其与EMT相关蛋白的表达水平的变化以及MMP9的活性水平和蛋白表达水平的差异，来探讨肺癌中P38参与调节肺癌的侵袭和转移能力的可能的机制。

selleck化学药品液面控制 KRX-0401分子量 方法： 通过两种P38抑制剂：SB203580和SB239063抑制P38的活性水平。通过划痕实验和Transwell实验的方法，观察抑制P38的活性水平对两种人肺癌细胞H1299和95C的侵袭和迁移能力的影响；通过明胶酶谱实验来检测抑制P38活性水平对MMP9的活性的影响；并通过Western-blot的方法来观察抑制P38的活性水平对EMT相关蛋白和MMP9蛋白的表达水平的影响。 结果： 实验结果表明，在H1299细胞和95C细胞两种细胞系中使用浓度为10μM的P38抑制剂SB203580和SB239063，可以明显抑制两种细胞的P38的磷酸化水平；划痕实验和无胶的Transwell实验结果表明，抑制P38的活性使得H1299细胞和95C细胞的迁移能力明显下降；铺胶的Transwell实验结果显示，抑制P38的活性对H1299细胞和95C细胞的侵袭能力没有明显的影响；明胶酶谱实验和Western-blot实验的结果表明抑制P38的活性对MMP9的活性以及蛋白的表达水平也没有显著的影响；Western-blot实验的结果表明，抑制P38的活性对使得H1299细胞中EMT相关蛋白β-catenin，和Vimentin的表达水平明显降低，snail蛋白的表达水平无明显变化；95C细胞中EMT相关蛋白β-catenin的表达水平明显降低，而Vimentin和snail蛋白的表达水平没有发生明显变化。 结论： 1.两种P38抑制剂SB203580和SB239063通过抑制P38的磷酸化水平抑制了P38的蛋白的活性；2.抑制P38的活性可以使得人肺癌细胞H1299和95C的迁移能力下降，而对侵袭能力无明显影响；3.

05);NS1619高剂量组和混合低、高剂量组比较无差异(P＞0.05);尽管TMP高剂量组的细胞存活率低于TMP低剂量组,但是两者间的差异无意义(P＞0.05)。NS1619高剂量组和混合低、高剂量组VSMCs的细胞存活率分别为37.34±6.34%、48.93±7.03%、31.13±5.05%,显著低于其他实验组(P＜0.01),已经表现为较强的细胞的毒性作用。 5 BK_(Ca)通道介导DM大鼠VSMCs凋亡的信号转导机制实验 凋亡率统计结果显示,用低糖(对照组)和高糖培养液(模型组)培养的VSMCs的凋亡率是分别是10.22±0.81%、12.89±2.46%,无差异(P＞0.05)。各实验组与模型组比较:其中NS1619低、高剂量组、TMP组、GSNO和GSNO+paxilline细胞凋亡率显著高于模型组(P＜0.01);GSNO组凋亡率显著高于NS1619组、TMP组(P＜0.01),诱导VSMCs凋亡的作用最强;加入BK_(Ca)通道阻断剂paxilline后,GSNO组的凋亡率下降明显(P＜0.01),但仍高于NS1619低、高剂量组、TMP组(P＜0.01),表明BK_(Ca)通道可能作为一个主要的信号转导通路介导了GSNO诱导VSMCs的凋亡;因凋亡率没有完全降至与模型组相同的水平(P＜0.01),推测GSNO还能通过其他的途径促进VSMCs的凋亡。TMP组的细胞凋亡率与NS1619低剂量组无差异(P＞0.05);NS1619低剂量组的细胞凋亡率低于高剂量组(P＜0.01),表明NS1619可剂量依赖性的增加VSMCs的凋亡。有p38阻断剂SB202190和PKC

inhibitor peptide参与的实验组(SB202190、SB202190+paxilline、PKC inhibitor peptide、PKC inhibitor peptide+paxilline)VSMCs的凋亡率与模型组比较无差异(P＞0.05),表明在本实验中对VSMCs的凋亡无影响,paxilline对p38、PKC的信号转导通路也无影响。 Selleckchem ABT263 结论:本实验通过体内体外用药,从整体水平观察到TMP能降低早期DM大鼠胸主动脉上抑制VSMCs凋亡的c-myc、Bcl-2基因表达、增加促进细胞凋亡的Bax基因表达,其作用呈剂量依赖性;DM早期糖尿病大鼠胸主动脉VSMCs上的BK_(Ca)通道可以代偿性的增加开放,在此基础上TMP还能通过缩短通道的平均关闭时间,增加VSMCs上BK_(Ca)通道开放的概率,TMP的作用呈剂量依赖性。TMP对PDGF-BB诱导的体外培养VSMCs的增殖有一定的抑制作用,并可以通过BK_(Ca)通道介导其凋亡。在DM的早期,TMP通过促进BK_(Ca)通道活动及其他途径介导了VSMCs的凋亡,可以延缓糖尿病血管重构和DA的病情进展,改善血管的功能,达到防治DA的目的;与NS1619相比TMP防治DA的作用靶点多,安全性好,细胞毒性小,可以长期应用;治疗费用低,适用于我国的国情。 TMP通过BK_(Ca)通道介导VSMCs凋亡的可能信号转导路径为: 1 TMP通过BK_(Ca)通道介导VSMCs凋亡信号转导通路 http://www.selleckchem.cn/products/PLX-4032.html 1.1 TMP直接激活VSMCs上的BK_(Ca)通道开放,钙激活钾电流外流(I_(K(Ca))增加,细胞内K~+流失,K~+浓度([K~+]_i)下降,一方面导致细胞内容量下降,启动VSMCs凋亡;另一方面升高了Caspase

nuclease,启动凋亡,使细胞皱缩,细胞内容量下降。 1.2 TMP可以促进eNOS合成,增加NO,通过直接和/或间接的途径开放BK_(Ca)通道,达到促进VSMCs凋亡的作用。 2 TMP通过非BK_(Ca)通道介导VSMCs凋亡的信号转导通路 2.1 TMP促进eNOS合成,增加NO,NO作用于线粒体,使线粒体细胞膜去极化,诱导释放细胞色素C(cyt-c),cyt-c与凋亡蛋白酶激活因子(Apaf-1)结合,激活caspase诱导细胞凋亡。在这条通路上,如果Bcl-2与Apaf-1结合,则Apaf-1不能与cyt-c结合,不能激活caspase,不能诱导细胞凋亡。Bax与Bcl-2结合后,Bcl-2就不能与Apaf-1结合,不会影响Apaf-1激活caspas诱导细胞凋亡。 2.2 TMP促进eNOS合成,NO增加,NO诱导死亡受体(Fas),Fas的激活导致神经鞘脂酶的激活,分解神经鞘脂成为酰基神经鞘氨醇;后者激活caspase从而导致胞内蛋白褪变,细胞凋亡。
心肌纤维化(myocardial PF-02341066体外 fibrosis,MF)是指在正常心肌组织中胶原纤维过量积聚,胶原浓度显著升高或胶原成分发生改变。主要表现为心肌细胞肥大、心肌成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFb)增殖并分泌大量胶原蛋白。研究表明,心肌纤维化是多种心脏疾病发展到一定阶段的共同病理改变,是心室重构的主要表现之一,是心血管系统疾病的独立危险因素。可导致心肌僵硬度增加、心室舒张功能减退、心肌电生理紊乱、心律失常、冠状动脉储备下降甚至引起猝死。所以研究逆转或防治心肌纤维化的药物具有重要的理论价值。

作为第三代血管紧张素转化酶抑制剂(angiotensin converting enzyme inhibitor,ACEI),依那普利(enalapril,Ena)在抗高血压、逆转心室肥厚、心室重构等心血管疾病中发挥重要作用。近年来发现其抗心肌纤维化作用明显,但作用机制尤其是分子生物学及信号转导方面机制尚为完全清楚。因此本课题以心肌成纤维细胞为靶点细胞,从体内外两方面观察Ena抗心肌纤维化作用及作用的分子生物学和信号转导机制,旨在阐明心肌纤维化发生机制和药物干预主要靶点。研究内容如下:1.异丙肾上腺素(Iso)诱导心肌纤维化模型,观察Ena对心肌纤维化影响;检测心肌组织中羟脯氨酸含量和超氧化物岐化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平;通过HE染色、Masson特染、透射电镜、免疫组织化学染色、Western blot等方法观察Ena对心肌形态学和磷酸化丝裂酶原活化蛋白激酶p38(p38MAPK)、转化生长因子-β_1(TGF-β_1)表达的影响。结果表明:Ena能明显抑制Iso诱导的心肌肥厚;减少胶原纤维含量;降低羟脯氨酸含量;提高SOD含量,降低MDA水平;减少心肌组织中p38MAPK和TGF-β1的表达。2.体外培养CFb细胞,血管紧张素II(AngII)诱导增殖。采用MTT、流式细胞仪观察Ena对细胞增殖和细胞周期的影响;免疫细胞化学染色、流式细胞仪、Western blot分析Ena对细胞周期蛋白cyclinD1和细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子(CDKI)p27~(kip1)蛋白表达的影响。结果表明:Ena能够明显抑制CFb增殖,使细胞周期阻滞于G_0/G_1期;降低与细胞增殖密切相关的cyclinD1的表达,增加p27~(kip1)蛋白的表达,呈剂量依赖性。3.

05）（Fig.11、Fig.14-22；Table8）。 不同浓度的17-AAG和YM155单独作用于TE-1细胞48h后，结果显示两种药物各浓度组之间的Survivin/GADPH灰度比值差异有统计学意(P
目的：探讨HSP90小分子抑制剂——SNX-2112的体内外抗肿瘤活性；以人黑色素瘤A-375细胞系为模型,研究SNX-2112诱导细胞凋亡的作用机制,为HSP90靶向抑制剂的开发进一步提供理论基础。 方法：应用细胞体外培养技术,采用MTT法检测SNX-2112对八种实体瘤细胞增殖的影响,确定抗瘤谱。应用流式细胞术,采用PI单染法分析药物作用后细胞周期的改变,采用Annexin-V/PI双染法确定细胞凋亡率。建立小鼠原位移植瘤模型,设置三个剂量组,观察SNX-2112的体内抗肿瘤活性,进行初步的药效学研究。通过DAPI染色及TUNEL细胞凋亡原位末端标记法,从形态学上观察SNX-2112诱导细胞凋亡的情况。通过Western Blot及免疫荧光检测SNX-2112对Caspase家族蛋白表达的影响,对不同凋亡途径中相关蛋白表达的影响,对HSP90蛋白家族的影响,以及通过免疫共沉淀法分析SNX-2112对HSP90客户蛋白表达的影响。

时间 结果：SNX-2112具有广谱的抗实体瘤细胞增殖的活性,抑制作用呈现明显的浓度和时间依赖性,IC50值范围为0.7到22μM。进一步研究发现,SNX-2112能诱导细胞发生明显的凋亡现象,将细胞阻滞在G2／M期,使细胞正常分裂受阻,从而抑制细胞生长。利用激光共聚焦显微镜,观察到典型的细胞凋亡形态学变化,包括细胞染色质固缩,边缘化分布,出现凋亡小体等。 在昆明小鼠原位移植瘤实验中,SNX-2112能显著抑制小鼠肝癌细胞H-22生长,抑瘤率分别为：低剂量组15.1%,中剂量组31.4%,高剂量组68.6%。高、中剂量组和空白对照组相比,差异非常显著(P＜0.01)。另外,通过病理学观察,SNX-2112在体内可以抑制新生血管的产生。 在机制研究中发现,SNX-2112可诱导A-375细胞发生Caspase蛋白家族介导的细胞凋亡,并且SNX-2112可以同时作用于多条凋亡途径来诱导细胞凋亡,作用途径包括Akt, B-Raf/Erk(1/2), IKKα/NF-κB等信号凋亡途径。此外SNX-2112对凋亡相关蛋白Bcl-2、Gsk3β以及p53均有明显的降解作用。SNX-2112作用细胞后不影响HSP90a/β和Grp94蛋白的表达,但是引起HSP90家族Trap-1的降解。

结论：SNX-2112小分子靶向抑制剂具有显著的体内外抗肿瘤活性,能通过多途径多靶点来诱导肿瘤细胞凋亡。
目的 探讨MALT淋巴瘤的临床特征、治疗及预后。 方法 收集2005年1月-2009年6月的27例MALT淋巴瘤的临床资料。 结果 27例中,男12例,女15例,中位年龄54岁(34—78岁),原发部位依次为胃肠道、肺、甲状腺、乳腺、腮腺、眼附属器、纵隔,全组病例没有B症状。ECOG评分0～1分23例,≥2分仅4例,伴LDH升高2例。淋巴瘤国际预后指数IPI评分≥2者4例,Arbor分期Ⅲ、Ⅳ期共7例。8例胃MALT淋巴瘤中,只有1例70岁I2期患者有Hp检测资料,结果为阴性,予抗Hp治疗2周,复查胃镜提示胃部病灶无明显变化,后予手术治疗。单纯手术或局部放疗5例,局部治疗联合化疗18例,单纯化疗4例。27例MALT淋巴瘤患者中位随访24月(随访时间5～51个月),有1例失访,其余26例中有18例CR(73％),3例PR(11.5％)。有5例复发,复发率达18.5％。伴有大细胞转化2例,死亡4例。 结论 MALT淋巴瘤是一种可侵犯结外多种器官的惰性淋巴瘤,发生于不同部位的MALT型淋巴瘤治疗有所不同。多数MALT淋巴瘤临床发展缓慢,可通过局部治疗获得痊愈。总体来说,MALT淋巴瘤预后较好,生存率高。对于胃MALT淋巴瘤应重视幽门螺杆菌的检测,加强分子遗传学的检查,有助于选择治疗方式和判断预后。
目前,恶性肿瘤严重威胁着人类的身体健康,其治疗也成为人们关注的焦点,传统的化疗和放疗由于缺乏特异性,取得疗效的同时也往往给患者带来较大的毒副作用,故寻找新型、安全、有效的特异性抗肿瘤药物是医药学工作者急需解决的问题。SNX-2112是近几年筛选出的一种新型抗肿瘤药物,它可以特异性抑制Hsp90活性,诱导Hsp90受体蛋白降解,最终导致肿瘤细胞的凋亡,是一种具有开发前景的抗肿瘤药物。 ABT-263 目的：本研究从急性毒性、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、人外周血淋巴细胞微核试验、哺乳动物细胞染色体畸变试验几个方面对SNX-2112的安全性进行初步的评价,为我们具有自主开发知识产权的SNX-2112的合理安全应用提供科学依据。 方法：在急性毒性试验中,将受试物分别通过静脉、腹腔和灌胃给予动物,在给药后观察试验组和对照组动物的一般状态、毒性表现和死亡动物数,以及试验期间动物体重变化情况；在小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验中,将受试物静脉给予受试动物,取其双侧股骨内骨髓,制备骨髓细胞液进行涂片,油镜观察,计算各组嗜多染红细胞(PCE)微核率及PCE占红细胞总数的比值,用作遗传毒性及骨髓毒性的指示；在人外周血淋巴细胞微核试验中,我们采用常规微核法和CB微核法进行毒性评价,受试物作用于细胞24h后,采用微量常规培养法制备外周血淋巴细胞微核标本,油镜下阅片,计算微核和CB微核(CBMN)的发生率,并进行统计学比较；在哺乳动物细胞染色体畸变试验中,在有和无大鼠肝微粒体酶S9活化系统两种条件下,染毒受试物后,制作染色体标本,在油镜下观察染色体畸变情况,并计算各组染色体畸变率。

Ivacaftor订单 结果：在动物急性毒性试验中,结果表明尾静脉给药为最理想给药途径。计算小鼠和大鼠尾静脉给药途径LD50分别为67.79mg/kg和28.52mg／kg；小鼠腹腔注射给药途径LDso为102.35mg/kg；小鼠灌胃给药途径LD50为132.23mg／kg。在小鼠骨髓微核试验中,各组PCE占红细胞总数的比值的差异均无统计学意义(P>0.05),计算各组MPCE在PCE中所占的比值,溶剂对照组及低剂量组与阴性对照相比差异均无显著性(P>0.05),中剂量组及高剂量组与阴性对照相比差异有统计学意义(P20%,表明该试验系统是可靠的。 结论：1.比较了三种给药途径,因为毒性和副作用小,故我们选择静脉为最终给药途径,为后续试验提供科学依据。 2.小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验结果表明,SNX-2112在一定剂量范围内对小鼠染色体无明显的损伤作用。 3.人外周血淋巴细胞微核试验结果表明,SNX-2112表现出一定的遗传毒性,但其诱变力明显低于MMC。 4.染色体畸变试验结果表明,可能是由于SNX-2112与秋水仙素具有很强烈的拮抗作用,导致试验组无法分析染色体畸变情况。
SNX-2112是近几年筛选出的一种新型Hsp90抑制剂,经体内、外实验证明SNX-2112具有良好的抗肿瘤作用,能显著延长荷瘤动物的生存期,是一种具有开发前景的抗肿瘤药物。 本研究主要进行了以下几方面的工作：1.

05),抑制PI3K可显著降低胰岛素促进的葡萄糖摄取和GLUT8基因表达(P<0.05),提示胰岛素可能主要通过P13K通路参与调控葡萄糖摄取;进一步研究PI3K的下游信号分子PKC发现,激活PKC可显著提高GLUT1、GLUT8基因表达和乳腺细胞葡萄糖摄取(P<0.05),抑制PKC可显著降低PKC激活所促进的GLUT1、GLUT8基因表达和葡萄糖摄取(P<0.05)；糖浓度相同时,果糖组的细胞活力显著高于葡萄糖组(P<0.05);随着葡萄糖或果糖浓度的增加,乳腺细胞活力均呈现先升高后降低的趋势,而糖摄取量显著升高(P0.05),而20

mmol/L葡萄糖可显著降低GLUT1基因表达(P0.05);处理24时,GLUT1、GLUT8和HK2基因表达均随着葡萄糖浓度的增加而降低(P005)；处理24和48 h时,ACC、FAS、DGAT和GPAT的基因表达量随葡萄糖浓度的增加而降低(P005)；10和20 mmol/L葡萄糖可显著提高乳糖合成酶蛋白含量(P
背景和目的: 气道高反应性是指气道对收缩性激动剂反应性的增加,是哮喘的典型特征。气道平滑肌的G-蛋白偶联受体如缓激肽受体,血栓素受体和内皮素受体等是介导气道平滑肌收缩的重要受体,其表达的变化可以影响气道平滑肌的反应性,细胞内信号通路能影响这些受体表达的变化。香烟烟雾与气道高反应性紧密相关,是引起哮喘和其它慢性气道炎症的危险因子。本论文用离体和整体动物实验,从气道平滑肌收缩功能、mRNA表达和蛋白质水平考察G-蛋白偶联受体在气道高反应性中的变化及调节G-蛋白偶联受体反应的相关信号通路。 实验方法: 离体实验用培养的大鼠肺叶支气管,观察不同培养时间缓激肽(bradykinin)B_1受体激动剂去9位精氨酸缓激肽(des-Arg~9-bradykinin)和B2受体激动剂缓激肽,及血栓素受体激动剂U46619在支气管平滑肌上引起的浓度-收缩曲线的变化。使用转录抑制剂放线菌素D 已经 (Actinomycin D,AcD)、翻译抑制剂放线菌酮(Cycloheximide,CHX)、IκB激酶(IKK)抑制剂TPCA-1和BMS-345541、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路抑制剂(JNK抑制剂SP600125、p38抑制剂SB203580和MEK抑制剂PD98059)、无钙溶液和钙离子拮抗剂尼非地平等考察介导受体变化的通路。通过实时定量PCR的方法检查受体和炎性基因在转录水平的变化,通过免疫组织化学和Western-blot蛋白定量检查受体和相关通路蛋白表达的变化。 为什么 整体动物实验用小鼠吸烟模型考察香烟烟雾对小鼠气管反应性的影响,以及激素类抗炎药物地塞米松与Raf-1抑制剂GW5074的对抗作用。小鼠连续暴露烟雾四周,自第二周起连续三周腹腔注射0.3

mg/kg和1 mg/kg的地塞米松或0.5 mg/kg和2 mg/kg的GW5074。第四周烟雾暴露结束后,分离出小鼠气管组织,通过离体肌张力记录系统记录氯化钾、卡巴胆碱、sarafotoxin 6c、内皮素-1在小鼠气管环上引起的浓度-收缩曲线以及异丙肾上腺素引起的浓度-舒张曲线,并对小鼠的气管进行组织病理学观察。 实验结果: 1.大鼠支气管经24至96 h的体外器官培养,可时间依赖性地增强支气管缓激肽B1和B2受体介导的收缩反应。IκB激酶(IKK)抑制剂TPCA-1 (0.3μmol/L～10μmol/L)和BMS-345541 (1μmol/L～10μmol/L )可浓度依赖性地抑制器官培养增强的收缩反应。同时,TPCA-1(10μmol/L)和BMS-345541(10μmol/L)可降低器官培养增高的缓激肽受体基因转录(mRNA)水平和蛋白质表达水平以及炎性基因IL-6、MMP-9、COX-2和iNOS转录(mRNA)水平。 2.大鼠支气管经过12至48 h体外器官培养后,血栓素受体激动剂U46619收缩的支气管反应可时间依赖性增强;支气管培养24

h增强了U46619引起的JNK磷酸化。这种收缩反应的增强可被血栓素受体拮抗剂GR32191(0.1μmol/L)抑制,但血栓素受体蛋白的表达未见明显变化。转录抑制剂AcD (5 mg/L)和翻译抑制剂CHX (10μmol/L)不影响这种收缩反应的增加,JNK通路抑制剂SP600125 时间 (10μmol/L)、无钙溶液、电压依赖性钙离子通道抑制剂尼非地平(10μmol/L)可抑制这种收缩反应的增强。 3.四周的烟雾暴露增高小鼠气道对氯化钾、卡巴胆碱、内皮素-1的收缩反应,对异丙肾上腺素引起的气道舒张无明显影响;腹腔注射0.3 mg/kg和1 mg/kg地塞米松及0.5 mg/kg和2 mg/kg的GW5074可显著性抑制烟雾引起的气道收缩反应性增高;同时地塞米松及GW5074也可显著抑制烟雾引起的气道炎细胞浸润和粘液腺增生。 结论: 1.支气管的器官培养可上调平滑肌细胞的缓激肽受体,增强血栓素受体介导的气道收缩。IκB激酶可能与支气管缓激肽受体上调有关,JNK通路和细胞外钙内流可能与血栓素受体介导的气道高反应性有关。 2.香烟烟雾暴露可引起气道高反应性,其机制与Raf-1通路有关,抑制炎症可降低这种反应。
研究背景和目的 骨肉瘤是由能产生骨样组织的间充质细胞所构成的恶性骨肿瘤,其好发于青少年,男女发病率之比为1.5：1-2：1,多发生于长管状骨得干骺端,其中最常见于膝关节周边的股骨远端和胫骨上端。80%-90%的病人就诊时已存在亚临床转移灶,故骨肉瘤是一种具有微小转移灶的全身性疾病。目前治疗是主要以手术治疗为主的综合治疗。化疗明显改善骨肉瘤之前较差的预后,5年无病生存率为15%至20%。化疗使得术后生存率升高至75%至80%,局部复发率为5%至7%,术后生存率和局部复发率与手术切缘和对化疗的敏感性有关。 骨肉瘤的治疗研究主要集中在筛选敏感治疗方案及治疗药物,对化疗药组织反应欠佳或耐药患者(通常肿瘤复发或转移的可能性更大),则考虑其他治疗方案或药物。骨肉瘤的另一个研究热点则是寻找治疗的新靶点,以提高肿瘤对化疗药物的组织反应性,增强化疗作用,降低化疗药物毒性,减轻化疗副反应,对常规抗肿瘤药物组织反应欠佳的肿瘤尤其重要。三是寻找新的抗肿瘤药物,或老药新用进行抗肿瘤治疗,此亦属于新药开发范畴。 小檗碱又称黄连素。一种常见的异喹啉生物碱,分子式C20H18NO4.

黑素细胞与角质形成细胞共培养体系中，黑素细胞与角质形成细胞间有丝状伪足相连接，黑素细胞上靠近角质形成细胞方向的丝状伪足数量多于反方向。 3.100μM MK801作用于共培养体系24h后，黑素细胞和角质形成细胞之间的丝状伪足连接数量及黑素细胞伸向角质形成细胞的丝状伪足数量减少；100μMNMDA作用于共培养体系24h，黑素细胞和角质形成细胞之间的丝状伪足连接数量及黑素细胞伸向角质形成细胞的丝状伪足数量增多。 4．共培养体系下，激光共聚焦显微镜观察NKI/BETEB抗体标记的黑素小体、细胞角蛋白14抗体标记的角质形成细胞，发现在角质形成细胞中存在黑素小体。经100μM MK801作用24h后角质形成细胞中的黑素小体数量减少，100μM NMDA作用24h后角质形成细胞中的黑素小体数量增多。且与黑素细胞不相邻的角质形成细胞中也发现黑素小体的存在。 结论： 1抑制谷氨酸受体NMDAR可使黑素细胞树突末端变窄、树突变长，黑素细胞表面的伪足数量减少、伪足长度变短；激动谷氨酸受体NMDAR可使黑素细胞树突末端变宽、树突变短，黑素细胞表面伪足数量增多、伪足长度增加。激动或抑制谷氨酸受体NMDAR对角质形成细胞影响不大。

2黑素细胞和角质形成细胞共培养体中，抑制谷氨酸受体NMDAR可以使黑素细胞和角质形成细胞之间的丝状伪足连接数量减少；激动谷氨酸受体NMDAR可以使黑素细胞和角质形成细胞之间的丝状伪足连接数量增多。

3抑制谷氨酸受体NMDAR可以使共培养体系中黑素小体的转运减少，激动谷氨酸受体NMDAR可以使共培养体系中黑素小体的转运增多。 CP-673451 花费 4谷氨酸信号通路调节黑素细胞伪足形成进一步调节黑素小体转运。
目的 探讨阿魏酸钠(SF)对柔红霉素(DNR)损伤心肌的保护效应，并探讨其机制。 方法 【体内】雄性SD大鼠，222日龄，体重60～80g，70只随机分7组（n=10）。 正常对照组(Control)、模型组(DNR)、不同剂量（12.5、25、50、100、200mg/Kg）SF干预组。Control组,大鼠腹腔注射生理盐水（NS，5ml/Kg），每周1次，共5次；DNR组、不同剂量SF干预组，5次腹腔注射均为DNR （2.5mg/Kg）。其中Control组、DNR组自第1次注射DNR开始腹腔注射NS(5ml/kg.d),不同剂量SF干预组分别腹腔注射不同剂量（12.5、25、50、100、200mg/kg.d）SF，均连续30d。各组大鼠在末次给药后第5d，取血浆测LDH和CK含量、描记分析大鼠体表心电图、左心室插管测大鼠左心室血流动力学指标（HR、LVSP、LVDP、+dp/dtmax和–dp/dtmax），取心肌组织测SOD和MDA含量、HE染色观察心肌组织学结构、电镜检测心肌细胞超微结构；TUNEL法检测心肌细胞凋亡；Real-time 可能 PCR检测心肌cTnI、CaM、LTCc(1aC)、SERCA2、RyR2、、Caspase9和Caspase3基因表达；免疫印迹检测心肌β-Tubulin、CaM、cTnI蛋白表达和线粒体Cyt-c释放。

【体外】采用H9C2大鼠心肌细胞株柔红霉素（DNR）1μ M处理24h，建立心肌细 胞DNR损伤体外实验模型。MTT法检测细胞存活率，检测心肌细胞培养上清LDH和CK含量，流式细胞术检测心肌细胞凋亡率，DCF-DA荧光试剂法检测心肌细胞内活性氧（ROS）的含量，Flou-3荧光试剂法检测心肌细胞[Ca2+]i含量，Real-time PCR检测心肌细胞cTnI、CaM、LTCc(1aC)、SERCA2、RyR2、Caspase9和Caspase3基因表达，免疫印迹检测心肌细胞β-Tubulin、CaM、cTnI、p38MAPK、细胞核NF-κ 获悉更多 B蛋白表达和线粒体Cyt-c释放。 结果 【体内】幼大鼠腹腔注射DNR5次累积剂量12.5mg/kg造成幼大鼠心肌DNR损伤， 表现为大鼠一般状态差、体重不增、甚至死亡，心肌酶外漏，体表心电图非特异性改变，左心室收缩舒张功能下降，心肌组织和心肌细胞超微结构损伤，心肌细胞凋亡，心肌组织MDA升高、SOD降低，心肌cTnI、CaM、LTCc(1aC)、SERCA2、RyR2、Caspase9和Caspase3基因表达、心肌β-Tubulin、CaM、cTnI蛋白表达改变，线粒体Cyt-c释放增加。SF干预呈剂量相关性地保护幼大鼠心肌减轻DNR损伤。 【体外】H9C2大鼠心肌细胞DNR1μ M作用24h造成心肌细胞DNR损伤，表现为心肌细胞存活率降低，细胞培养上清LDH和CK含量增高，细胞凋亡率升高，细胞内ROS、[Ca2+]i升高，cTnI、CaM、LTCc(1aC)、SERCA2、RyR2、Caspase9和Caspase3基因表达、β-Tubulin、CaM、cTnI、p38MAPK、细胞核NF-κ B蛋白表达改变，线粒体Cyt-c释放增加。SF(15.625～62.5Μm)与1μ M DNR共孵育H9C2大鼠心肌细胞24h，SF呈剂量相关性地保护心肌细胞减轻DNR损伤。 结论 1、幼大鼠腹腔注射DNR累积剂量12.

从细胞水平验证p-PRAS40-Thr246是否是PI3K-AKT通路导致trastuzumab耐药的关键因子；3.通过建立乳腺癌trastuzumab耐药的裸鼠动物模型,验证拮抗p-PRAS40-Thr246能否逆转乳腺癌的trastuzumab耐药。期望通过以上研究进一步阐明HER2阳性乳腺癌trastuzumab耐药的新机制,为trastuzumab和MK-2206联合治疗HER-2阳性乳腺癌方案的临床应用提供研究依据。第一部分PRAS40-Thr246磷酸化与HER2阳性乳腺癌组织trastuzumab耐药的相关性的临床研究目的通过对临床乳腺癌组织标本的检测及病例资料的分析,探讨乳腺癌组织p-PRAS40-Thr246的表达水平与其临床病理资料、PI3K-AKT信号通路激活状态之间的相关性。并分析P-PRAS40-THR24是否能成为预测乳腺癌trastuzumab治疗效果的分子标记物。材料和方法：收集了55例HER2阳性的原发性乳腺癌的癌组织标本,这些患者术后均应用trastuzumab治疗。所有标本都是术中取材,并且通过福尔马林固定、石蜡包埋的保存。所有的肿瘤临床病理资料、治疗情况和后续的疾病进展情况都是从患者的病历及随访资料中获得的。本实验应用免疫组织化学的方法检测。p-PRAS40-Thr246和PTEN在乳腺癌组织中的表达情况；应用等位基因特异PCR检测PIK3CA基因的突变情况。P-PRAS40-Thr246表达与其他临床病理资料的相关性分析是用卡方检验来分析,用Kaplan-Meier方法分析TTP数据,实验组之间的差异是用log-rank检验来分析,p-PRAS40-Thr246的表达对乳腺癌trastuzumab治疗效果的影响用COX比例风险模型来分析。结果1.乳腺癌组织p-PRAS40-Thr246的表达水平与其临床病理资料之间没有显著相关性。在本研究中,IHC被用于检测p-PRAS40-Thr246在HER2阳性乳腺癌组织中的表达,用于IHC的p-PRAS40-Thr246抗体的特异性及适用性已经被以往的研究所证实。结果如图1所示,p-PRAS40-Thr246在乳腺癌细胞的胞浆中不同强度地广泛表达,并且偶尔在核内表达。根据以往的研究,p-PRAS40-Thr246阳性表达的标准是H评分≥100。运用此标准,共有22例(40%)HER2阳性的乳腺癌被定义为p-PRAS40-Thr246阳性。这些患者p-PRAS40-Thr246的表达水平与其年龄、组织学分级、雌孕激素受体情况等临床病理资料之间没有显著相关性(见表1)。2.乳腺癌组织p-PRAS40-Thr246的表达水平与PI3K-AKT信号通路激活状态之间有显著相关性。本实验对入组的HER2阳性乳腺癌的PI3K-AKT通路的激活状态进行了检测。结果显示,PTEN的缺失在HER2阳性乳腺癌组织中占34.5%(19/55),PIK3CA基因的突变占18.2%(10/55)。另外,在本实验发现的PIK3CA基因突变中,包括7例外显子20的突变(H1047R)及3例外显子9的突变(E542K

并且 and E545K),这些都与文献记载的突变情况相一致。根据文献建立的标准,患者被分为P13K-AKT激活状态(PIK3CA突变或PTEN低表达；n=27)和P13K-AKT未激活状态(PIK3CA基因突变类型和PTEN高表达；n=28)。本实验结果显示,p-PRAS40-Thr246的表达与PI3K-AKT信号通路激活状态、单独的PTEN缺失之间有显著相关性,但与单独的PIK3CA突变之间无显著相关性。这些提示了p-PRAS40-Thr246的表达与PI3K-AKT信号通路激活状态之间,有显著的相关性(见表2)。3. MLN2238溶解度 P-PRAS40-Thr246可能是一种新型的预测乳腺癌trastuzumab治疗效果的分子标记物。应用Kaplan-Meier方法绘制HER2阳性乳腺癌患者的生存曲线(见图2),在经过trastuzumab治疗后,p-PRAS40-Thr246阳性的患者比那些p-PRAS40-Thr246阴性的患者有着更短的TTP。单变量回归分析被用于确定疾病进展与HER2阳性乳腺癌trastuzumab治疗前PI3K-AKT通路激活状态的关系,PIK3CA基因突变和／或PTEN缺失的患者与其他患者相比,在疾病进展方面有更高的风险。单变量回归分析还显示,患者组织学分级情况也对患者的总体生存时间有影响。以上各影响因素均同时进入多因素回归分析,结果显示,p-PRAS40-Thr246阳性是HER2阳性乳腺癌疾病进展的一个有意义的独立预后因子(表2,HR 2.081；95%的可信区间,1.113-3.890；P=0.022),它能够预测乳腺癌trastuzumab治疗的效果。结论通过临床标本检测及相关病理临床数据的分析,提示P-PRAS40-Thr246在乳腺癌组织中表达,其表达水平与PI3K-AKT信号通路激活状态之间有显著相关性。乳腺癌trastuzumab耐药的发生与p-PRAS40-Thr246有关,P-PRAS40-Thr246是PI3K-AKT通路中导致trastuzumab耐药的关键因子。临床检测p-PRAS40-Thr246可以预测乳腺癌trastuzumab治疗的效果。第二部分PRAS40-Thr246磷酸化在HER2阳性乳腺癌细胞trastuzumab耐药中的作用机制的细胞学研究目的本实验以乳腺癌SKBR3和SKBR3/TDR细胞为研究对象,在细胞水平探讨MK-2206对其杀伤及逆转trastuzumab耐药的作用,验证拮抗p-PRAS40-Thr246的表达能否部分逆转HER2阳性乳腺癌细胞的trastuzumab耐药,为乳腺癌的临床用药提供依据。材料和方法通过诱导的方法建立对trastuzumab耐药的HER2阳性乳腺癌细胞株SKBR3/TDR,以不同浓度的MK-2206处理人乳腺癌SKBR3细胞和SKBR3/TDR细胞,观察MK-2206对SKBR3和SKBR3/TDR细胞的抑制增殖作用。采用CCK-8法检测细胞的耐药倍数和耐药逆转率,观察MK-2206与trastuzumab合用对于SKBR3/TDR细胞的耐药逆转情况,采用FCM法检测细胞凋亡以及trastuzumab的蓄积情况。采用Western

Erlotinib研究购买 blot法检测]p-PRAS40-Thr246和p-AKT-Thr308蛋白的表达。观察MK-2206处理SKBR3和SKBR3/TDR细胞后,对p-PRAS40-Thr246和p-AKT-Thr308蛋白的表达的影响。结果1.CCK-8检测结果提示,不同浓度的trastuzumab和MK-2206均对SKBR3和SKBR3/TDR细胞有抑制增殖的作用,且呈剂量依赖性(图4、图5)。其中trastuzumab对SKBR3和SKBR3/TDR的IC5o分别为(57.32±1.64) ug/ml及(248.24±1.92) ug/ml,耐药倍数为4.33倍。MK-2206对SKBR3和SKBR3/TDR的IC50分别为(40.74±1.66) nmol/L及(43.66±1.

4%的诱导效率,当不添加TMP时,实验无法获得GFP+细胞,诱导效率为0；当添加的TMP浓度达到1μM时,诱导效率达到最高(约0.4%)。 在iPSCs的诱导过程中,利用TMP系统分别调控三个外源基因人源OCT4、KLF4和SOX2的表达,我们发现无论dd融合蛋白位于2A肽连接的多顺反子载体链的任何位置,都可以成功获得iPS细胞,而且可以获得相近的诱导效率(约0.4%)。进一步对三因子进行表达时间上的调控,发现在重编程过程中,早期和中期的外源OCT4和KLF4的添加不是必需的；但SOX2在这两个阶段的添加至关重要,否则将无法获得iPS细胞。 实验将dd连至人源OKSM四因子piggyBac载体的OCT4上,利用该载体可将猪的胚胎成纤维细胞系诱导成为iPS细胞。对获得的猪iPS细胞系分别进行添加和撤离TMP处理,通过TMP调控外源OCT4的表达。结果显示,TMP添加时,可维持细胞系的ES样形态并显示AP阳性,OCT4免疫荧光染色阳性；TMP撤离后,获得的细胞系呈分化状态,并显示AP阴性,OCT4免疫荧光染色阴性。表明目前获得的猪iPS细胞的多能性的维持完全依赖外源OCT4的持续表达。 对重编程过程中外源OCT4的RNA水平及蛋白水平的检测发现,两者随着诱导时间的推延,在表达趋势上并不一致,提示我们需要关注重编程过程中核心转录因子的蛋白水平情况。本课题首次将蛋白调控系统引入至诱导多能性干细胞的研究中。利用TMP系统调控核心转录因子的蛋白表达时间及剂量,有助于揭示重编程过程中各核心因子的作用机制,该系统为各物种的诱导多能性干细胞的获得及机制研究提供了更精确的蛋白水平的研究平台。
目的：在特发性肺纤维化(IPF)过程中,起主要作用的TGF-β在炎症部位活性增强,使成纤维细胞大量增殖,导致严重肺纤维化,TGF-β通过Smads蛋白的信号转导及调控发挥作用。而Smad-3是介导TGF-β诱导肺纤维化的关键分子,其通过调节靶基因而影响IL-6家族特别是IL-31的表达,进一步影响JAKs/STATs通路,从而引起肺纤维化。这是肺纤维化可能的机制。因此,本项目旨在利用体外培养细胞及BLM诱导小鼠肺纤维化模型,得到TGF-β1-Smad-3-IL-31-JAKs/STATs这条通路,研究这条通路是肺纤维化的可能作用机制,以对肺纤维化的靶向治疗提供一定的线索。

JQ1供应商 方法：将75只小鼠按随机数字表法分为3组。其中二组为博来霉素诱导肺纤维化模型组(气管内注射BLM5mg/kg0.1mL),分别为单纯造模组(BLM组,25只)、地塞米松治疗组(DXM组,25只)、每组25只；造模后1天,地塞米松组小鼠腹腔注射DXM5mg/kg1(0.1mL),每天1次,连续28天。另1组为正常对照组(NC组,25只)。给药第3、7、14、21、28天每组分别各处死5只小鼠。取肺组织行常规组织病理学观察；免疫组化检测肺组织中TGF-β1、Smad-3含量;RT-PCR法检测IL-31、STAT-1mRNA的表达量；Western 获悉更多 blot测STAT-1蛋白含量；染色质免疫共沉淀(CHIP)实验检测Smad-2/3与IL-31启动子之间的结合联系。同时制得原代肺成纤维细胞,待培养3代后,抑制TGF-β表达,而对TGF-β表达的抑制,会下调Smad-3、IL-31的表达水平。对IL-31表达的降低,则会下调STAT-1的表达水平。同时查看肺成纤维细胞的形态,肺成纤维细胞的增殖特征,肺成纤维细胞的胶原合成；检测肺组织中羟基脯氨酸(HYP)含量。 结果： (1)对小鼠肺初步肉眼观察和对肺组织病理学的观察,可发现由于BLM的诱导作用,BLM组小鼠的肺组织根据时间先后顺序出现由3天时的轻度肺泡炎到14天时纤维化的动态改变。DXM组也呈现类似的病理改变过程,但其程度较BLM组轻,但是,对比NC组,其程度却明显加重。NC组病理变化基本未见,没有明显的肺泡炎和纤维化改变。

Selleckchem BIBF-1120 (2) TGF-β1在NC组肺组织有弱表达,在BLM组7天-14天表达达高峰,有统计学意义(p<0.05)。DXM组也呈现类似的趋势,但比BLM组的表达明显减轻,有显著的统计学意义(P<0.01)；DXM治疗组HYP含量于14-28天有明显下降(p
运动系统的疾病,例如肌腱撕裂,肌腱炎,骨缺损等尚无理想的治疗方法,影响着人们正常工作和生活。肌腱治疗方法相对滞后,主要原因是肌腱发育分化知识的缺乏。骨发育分化知识较为明了,但再生骨组织缺乏合适的物理支架及相关理论支持。间充质干细胞属于多能性干细胞,经化学或物理因素的诱导,可向骨系、肌腱系、脂肪系和软骨系等分化,是研究细胞分化的良好平台,是组织和器官修复的理想种子细胞。因此,本课题以间充质干细胞作为主要研究对象,分别对转录因子Mkx促进间充质干细胞向肌腱系分化的作用和机制以及仿生电纺羟基磷灰石-壳聚糖纳米纤维支架的物理结构促进间充质干细胞向骨系分化的作用和机制进行了相关研究。 1.

采用ELISA试剂盒测定血清中CK、CK-MB、LDH、MDA及SOD含量变化。 4.采用Westenblot蛋白印迹法检测反复力竭大鼠左室心肌ERK、JNK及P38磷酸化水平。结果： 1.反复力竭游泳后大鼠血清中CK含量（ng/ml）比较：Sal-REE组（35.88±3.66）、RES组（40.61±1.80）与Control组（27.99±2.27）相比较显著升高（P＜0.05）；Sal-RES组与RES组相比升高更加显著（P＜0.05）；Sal组（27.91±1.91）与Control组相比较无明显统计学差异（P＞0.05）。 2.反复力竭游泳后大鼠血清中CK-MB含量（ng/ml）比较：Sal-REE组（13.03±0.42）、RES组（14.14±0.78）与Control组（12.10±0.47）相比较显著升高（P＜0.05）；Sal-RES组与RES组相比升高更加显著（P＜0.05）；Sal组（12.23±0.63）与Control组相比较无明显统计学差异（P＞0.05）。

3.反复力竭游泳后大鼠血清中LDH含量（U/L）比较：Sal-REE组（4.21±0.64）、RES组（3.31±0.66）与Control组相比较显著升高（P＜0.05）；Sal-RES组与RES组相比升高更加显著（P＜0.05）；Sal组（3.45±0.72）与Control组相比较无明显统计学差异（P＞0.05）。 4.基础状态下，Control和Sal组LVDP、+LVdp/dtmax、－LVdp/dtmax无明显统计学差异（P＞0.05）；Sal-RES组和RES组分别与Control组相比，LVDP、+LVdp/dtmax、－LVdp/dtmax明显降低（P＜0.05），且RES组与Sal-RES相比明显降低（P＜0.05）。 还有 I/R以后，复灌后60min时，LVDP、+LVdp/dtmax、－LVdp/dtmax恢复率Control组分别为79.15%、65.56%、66.86%；Sal组分别为78.97%、65.61%、71.84%；Sal-RES组分别为76.52%、44.35%、47.33%；RES组分别为53.22%、42.01%、31.91%。Control组和Sal组相比恢复率无明显差异（P＞0.05），Sal-RES组和RES组较Control组明显下降（P＜0.05），且RES组与Sal-RES组明显下降（P＜0.05）。 5.反复力竭游泳后大鼠血清中MDA含量（mmol/ml）比较：Sal-REE组（3.18±0.35）、RES组（3.65±0.25）与Control组（2.77±0.13）相比较显著升高（P＜0.05）；Sal-RES组与RES组相比升高更加显著（P＜0.05）；Sal组（2.84±0.31）与Control组相比较无明显统计学差异（P＞0.05）。 可能 6.反复力竭游泳后大鼠血清中SOD含量(ng/ml)比较：Sal-REE组（7.56±1.00）、RES组（6.26±1.39）与Control组（9.17±0.57）相比较显著降低（P＜0.05）；RES组与Sal-RES组相比降低更加显著（P＜0.05）；Sal组（9.28±0.42）与Control组相比较无明显统计学差异（P＞0.05）。

7.反复力竭游泳后，p-ERK/ERK灰度值比值Sal-REE组（1.968±0.078）、RES组（0.633±0.087）与Control组（0.202±0.037）相比较有显著升高（P＜0.05）；Sal-RES组与RES组相比升高更加显著（P＜0.05）；Sal组（0.230±0.047）与Control组（0.202±0.037）相比较无明显统计学差异（P＞0.05）。 p-JNK/JNK灰度值比值RES组（1.087±0.068）与Control组（0.102±0.037）、Sal组（0.130±0.036）、Sal-REE组（0.133±0.077）相比较均有显著升高（P＜0.05）；其余三组相比较无明显统计学差异（P＞0.05）。 p-P38/P38灰度值比值RES组（2.823±0.091）与Control组（0.087±0.041）、Sal组（0.179±0.074）、Sal-REE组（0.174±0.070）相比较均有显著升高（P＜0.05）；其余三组相比较无明显统计学差异（P＞0.05）结论：

1．红景天苷能够显著抑制反复力竭后大鼠血清中CK、CK-MB、LDH含量的升高，这表明红景天苷能够抑制反复力竭对大鼠心肌细胞的损伤。 2．红景天苷对反复力竭游泳大鼠具有较好的心脏保护作用，可以有效抑制缺血/再灌注所致的血流动力学改变和心功能损伤，提高离体心脏的抗缺血/再灌注能力。 3．反复力竭运动可以显著升高大鼠血清MDA含量，降低SOD含量，说明力竭性运功可能通过抗氧化应激机制造成大鼠心肌损伤及功能的下降，红景天苷的保护作用可能通过抗氧化机制发挥作用 并且 4．反复力竭运动作为应激刺激，可以显著升高ERK、JNK、P38三种激酶的磷酸化水平，表明力竭性运动可能通过MAPKS信号通路机制对大鼠心脏结构及功能造成损伤，红景天苷干预可通过升高ERK、降低JNK、P38磷酸化水平对力竭性心脏损伤起到保护作用。
薤白为百合科植物小根蒜Allium chinense GDon或Allium macrostemon Bge.干燥鳞茎,广泛分布于我国东北和华北等地,临床用于治疗心绞痛、心率不齐及腹泻等。薤白乙醇提取物中主要为皂苷类成分,具有抑制血小板聚集,降脂及抗癌等活性。 为了进一步明确薤白中皂苷类化学成分的物质基础,寻找薤白皂苷类化合物中的活性成分,本文在以下方面开展了一系列探索,主要研究成果如下： 1.对薤白皂苷类成分进行了分离和鉴定,运用UV、IR、ESI-MS、1H-NMR、13C-NMR、1H-1H COSY、HSQC、HMBC和NOESY等分析手段鉴定了其中25个成分的结构,包括1个黄酮类化合物、1个木脂素类化合物、17个已知皂苷类化合物和6个新的皂苷类化合物。 2.采用HPLC-ELSD技术建立了薤白药材甾体皂苷类成分的指纹图谱,发现其图谱中有18个共有特征峰,对12个共有峰进行了指认。采用该方法分析了来源于多个产地的11批薤白药材,并进行了相似度评价和主成分分析,为薤白皂苷类提取物质量控制提供了新方法。 3.

OxLDL对外周血EPC迁移功能的影响:OxLDL各浓度组明显减少EPC的迁移能力,而LDL对EPC的迁移无影响。50μg/ml,100μg/ml,200μg/ml的oxLDL组导致EPC迁移数分别为16.5±1.73,10.8±1.13,6.2±0.65都较对照组EPC的25.5±2.67低,差异有显著性,P＜0.05。而oxLDL

25μg/ml及LDL导致EPC迁移数为22.3±2.34,23.8±2.50,差异无显著性,P＞0.05。 5.OxLDL对外周血EPC增殖功能的影响:EPC的增殖能力在OxLDL各浓度组抑制了EPC的增殖,并且随着其浓度的增加而加剧。LDL对EPC的增殖无影响。50μg/ml,100μg/ml,200μg/ml的oxLDL组导致EPC增值率分别为0.73±0.762,0.45±0.048,0.31±0.033都较对照组EPC的1.29±0.135低,差异有显著性,P＜0.05。而oxLDL25μg/ml及LDL导致EPC增值率为1.12±0.118,1.198±0.126,差异无显著性,P＞0.05。 什么 6.OxLDL对外周血EPC体外血管生成能力的影响:体外血管生成实验模拟体内血管生成,检测EPC参与血管新生的能力.结果显示,OxLDL各浓度组显著减弱EPC的体外血管生成能力,在浓度为200μg/ml时最为显著。而LDL对EPC的成血管能力无影响。50μg/ml,100μg/ml,200μg/ml的oxLDL组导致EPC成血管数数分别为19.2±2.01,13.2±1.38,9.5±1.00都较对照组EPC的26.2±2.75低,差异有显著性,P＜0.05。而oxLDL 25μg/ml及LDL导致EPC迁移数为23.0±2.41,25.8±2.70,差异无显著性,P＞0.05。

结论: 1.OxLDL在体外能减少EPC数量,作用呈浓度依赖性; 2.OxLDL在体外能抑制EPC的增殖、迁移、粘附能力,作用呈浓度和依赖性; 3.OxLDL能降低EPC的体外血管生成能力: 提示OxLDL是导致EPC数量及功能减弱的因素之一。 第二章P38信号通路参与oxLDL对内皮祖细胞数量和功能的影响 目的: 研究oxLDL是否导致EPC细胞内P38及P-P38的表达异常,以及oxLDL对EPC的作用是否与细胞内P38的信号有关。 方法: 1.EPC分离,培养,及分组:EPC的分离及培养见第一章,收集贴壁细胞。贴壁细胞随机三组:①对照组:②oxLDL组:在培养液中加入100μg/ml的oxLDL③SB203580组:在培养液中加入100μg/ml的oxLDL前,预先半小时加入0.5μM的SB203580。 2.Western检测p38及p-p38的表达:oxLDL(100μg/ml)处理EPC后0,5,15,25,35分钟及SB203580预处理后细胞内p38,及p-p38蛋白的表达;以及oxLDL 25,50,100,200μg/ml以及LDL100μg/ml处理30分钟后细胞内p38,及p-p38蛋白的表达。 selleck化学药品 3.EPC凋亡分析: 按BD Biosciences公司的说明进行操作:各组EPC处理结束后,用0.1%胰酶消化,4°C PBS洗两次后,重悬于结合缓冲液中,调整细胞浓度为1 X 106/ml。取100μl细胞悬液至5 ml试管中,加5μlAnnexin V-FITC标记液和5μl PI,轻轻混匀。并设立无Annexin V及PI的空白对照、仅Annexin V的对照、仅PI的对照。室温避光孵育15min后,加400μl结合缓冲液,1小时内上流式细胞仪检测EPC双染色鉴定EPC数量,EPC粘附能力检测,迁移能力检测,EPC增殖能力检测,体外血管生成能力检测实验方法见第一章

结果: 1.western检测结果:100μg/ml的oxLDL处理EPC后,细胞内p-p38成时间依赖性表达增强,大约25min时达顶峰,5,15,25,25,35分钟细胞内p-p38的表达是对照组的1.4±0.15倍,2.1±0.22倍,3.2±0.34倍,1.5±0.13倍,且p38拮抗剂sb203580可抑制其表达,是对照组的1.2±0.13倍,与各时间点比较有显著性差异,P＜0.05。不同浓度的OxLDL处理25min后观察,细胞内p-p38成剂量依赖性表达增强,25μg/ml,50μg/ml,100μg/ml,200μg/ml处理EPC后,其细胞内p-p38的表达是分别对照组的1.2±0.13,1.7±0.18,3.2±0.35,3.4±0.35。而LDL对其没影响。细胞内p38表达不受时间和浓度的影响。 Sorafenib化学结构 2.100μg/ml的oxLDL处理EPC后,导致EPC数量减少,增殖减低,凋亡增加,粘附及迁移能力减低,体外成血管能力减弱。而sb203580能减弱100μg/ml的oxLDL对EPC的作用。其中对照组,oxLDL组和SB+oxLDL组的EPC数量分别为71.8±7.52,32.5±3.40,52.8±5.85;粘附细胞数分别为31.7±3.32,16.3±1.71,24.5±2.57;迁移细胞数分别为24.2±2.53,10.5±1.10,18.2±1.91;体外成血管细胞数分别为25.2±2.64,12.3±1.29,17.8±1.87。各组增殖率分别为1.32±0.139,0.45±0.048,1.133±0.119。各组的凋亡率分别10.2±1.07%,21.3±2.23%,13.2±1.4%。SB+oxLDL与oxLDL组比较,在细胞数量,增殖,凋亡及黏附,迁移,体外成血管能力方面有差异显著性,P＜0.