21和194.67±8.08。II组8 min缺血打击后,从4d开始海马CA1区出现明显的DND,7d时HG为Ⅱ~Ⅲ级、ND为17.33±11.37。与sham组相比,HG明显升高(P<0.01),ND显著降低(P<0.01)。CIP+II组各时间点海马CA1区无明显DND,7d时HG为0～Ⅰ级,ND为190.67±4.16。与II组相比,HG明显降低(P<0.01),ND显著升高(P<0.05),而平均光密度没有明显变化。30min时免疫阳性细胞表达开始增多基本和即刻取材时间点持平,胞核着色也开始加深至3h、1d、2d时神经元着色明显加深(p<0.05)。II组的总面积与sham组比较无明显差异。CIP+II组的阳性标记物总面积比II组明显增高(p<0.05),胞核深染,平均光密度也明显升高(p<0.05),但阳性标记物的总面积和即刻取材时间点比较明显降低(p<0.05)。4d、7d时免疫阳性细胞表达明显减少,细胞轮廓不清,胞核着色明显变浅,与即刻取材时间点比较,免疫阳性细胞的总染色面积和平均光密度均明显降低(p
目的:

1.了解在H_2O_2氧化应激的HaCaT细胞模型中,p38于细胞凋亡中的作用以及褪黑素抗氧化和抑制凋亡的效果。 2.探讨大面积深Ⅱ度烫伤大鼠早期应用褪黑素对烫伤皮肤残留毛囊细胞的保护作用。 3.研究大面积深Ⅱ度烫伤大鼠早期应用褪黑素对机体的抗氧化和抗炎作用。 方法: 1.HaCaT细胞分成4组,对照组、氧化组、抑制剂组、褪黑素组。除对照组外,其余3组均给予终浓度为730μmol的H_2O_2刺激12 17-AAG Doxorubicin 花费 h。抑制剂组在刺激前用p38抑制剂SB203580与细胞共培养1h;褪黑素组在刺激前用褪黑素与细胞共培养12 h。 2.(1)在刺激后12 h,检测细胞悬液MDA,GSH含量;(2)MTT法检测细胞活力;AO/EB(吖啶橙/溴化乙啶)和Hoechst33258荧光染色,caspase-3活性检测,流式细胞分析仪检测细胞凋亡情况。(3)首先用Western blot检测730μmol/L的H_2O_2刺激HaCaT细胞0(加入H_2O_2后即刻)、5、20、30、60、90min时p38蛋白含量,筛选出p38蛋白表达最强的时间点;然后在此时间点检测各组细胞p38蛋白含量。

3.雄性SD大鼠48只,分为假烫组、烫伤组、褪黑素组,每组16只大鼠。烫伤组和褪黑素组大鼠在背部造成30%TBSA深Ⅱ度烫伤创面,烫伤组和褪黑素组于伤后1 h补充平衡液抗休克治疗。并且褪黑素组于伤后1 min、8 h、16 h,以10 mg/kg的剂量给予腹腔注射褪黑素溶液。 4.每组其中6只于6、12、24 h采集烫伤区域皮肤检测丙二醛(MDA)和还原型谷胱甘肽(GSH);利用原位缺口末端标记法(TUNEL)和半胱氨酸天门冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)免疫组织化学方法检测烫伤皮肤组织残留毛囊细胞凋亡情况。 5.每组其余10只大鼠于12 h采集血清标本检测MDA、GSH等反应自由基水平的指标;用ELISA方法检测TNF-和IL-1β等炎症因子指标。于伤后12 h采集烫伤皮肤组织,用TUNEL和caspase-3免疫组织化学检测残留毛囊细胞的凋亡情况。 结果: 1.(1)在刺激12 h后,氧化组的氧化损伤明显强于对照组;而褪黑素组氧化损伤轻于氧化组,但高于对照组。(2)在刺激12 h后,MTT法显示对照组、氧化组、抑制剂组和褪黑素组细胞生存率分别为(99.12±2.34)%、(80.56±4.65)%、(90.02±5.15)%、(89.10±4.22)%;AO/EB和Hoechst33258荧光染色方法均显示氧化组的细胞凋亡率明显高于抑制剂组和褪黑素组。流式细胞仪检测结果显示对照组、氧化组、抑制剂组和褪黑素组细胞凋亡比例分别为(4.20±1.25)%、(30.01±8.94)%、(15. Stem Cell Compound Library细胞系 56±3. 80)%、(12.66±4.22)%。(3)730μmol/L的H_2O_2刺激细胞5

min,p-p38表达开始增加,在30 min后达高峰,90 min时仍明显高于对照组。选择30 min作为刺激时间点,利用Western blot方法发现抑制剂组和褪黑素组的p-p38水平明显低于氧化组。 2.与假烫组比较,烫伤组各时间点的皮肤组织MDA显著升高,伤后12 h达2.83±0.43 nmol/mgprot高峰;GSH水平明显下降,伤后12 h水平最低为0.95±0.21 mg/gprot(P < 0.01)。在所有时间点,烫伤组细胞凋亡率都高于假烫组(P < 0.01)。TUNEL显示烫伤组伤后6 h残留毛囊凋亡细胞率增加到(20.2±3.4)%,在12 h细胞凋亡率最高达到(31.2±3.6)%。与烫伤组比较,褪黑素组MDA水平低于烫伤组,GSH水平高于烫伤组(P < 0.05);褪黑素组的残留毛囊细胞凋亡率低于烫伤组,褪黑素组在伤后6 h、12 h的细胞凋亡率分别(10.9±3.2)%、(19.1±3.7)%(P < 0.05)。caspase-3免疫组织化学显示了相似的凋亡趋势。 3.与假烫组比较,烫伤组伤后12 h血清MDA显著升高,GSH明显下降;TNF- ,IL-1β含量显著增加(P < 0.01)。与烫伤组比较,褪黑素组12 h血清MDA含量降低了34%;GSH增加了37%;TNF-下降了29%;IL-1β降低了35%(P < 0.05)。TUNEL显示烫伤组伤后12 h残留毛囊凋亡细胞率为(30.9±2.5)%,高于假烫组的(3.8±1.9)% (P < 0.01)。而褪黑素组毛囊凋亡细胞率降低为(20.2±2.4)%,低于烫伤组(P < 0.05)。caspase-3免疫组织化学显示了相似的凋亡趋势。 结论: 1.在H_2O_2氧化应激HaCaT细胞模型中p38参与细胞凋亡发生,阻断p38通路可以显著减轻细胞凋亡程度;褪黑素可以减轻细胞氧化损伤和凋亡。2.大面积深Ⅱ度烫伤大鼠,氧化应激水平与毛囊细胞凋亡率关系密切;早期应用褪黑素,可以改善机体的氧化应激程度进而对皮肤残留的毛囊细胞具有抗凋亡作用。 3.

TYR的蛋白及基因表达与未处理组相比均明显下调,差异有统计学意义,而与正常豚鼠相比差异无统计学意义。 五、研究结论 CaM在人自体移植皮片中的表达显著增高,刺激皮片黑素细胞合成黑色素增多,促进自体移植皮片过度色素沉着；维拉帕米作用于人黑素细胞后,能抑制黑素细胞增殖,抑制TYR的活性,减少黑素合成。维拉帕米与α-MSH共同作用黑素细胞后,细胞增殖下降,TYR活性下降,黑素细胞合成黑色素减少,说明维拉帕米在体外能拮抗α-MSH对黑素合成的促进作用。维拉帕米作用于自体移植皮片后能使皮片黑素细胞中酪氨酸酶的活性下降、皮片中黑色素含量降低,说明维拉帕米在体内亦能抑制黑素合成的作用,进一步说明了钙信号转导途径在自体移植皮片过度色素沉着中有重要调控作用。
糖尿病肾病(diabetic

BMS-387032浓度 nephropathy, DN)是糖尿病患者最常见的微血管并发症之一也是导致糖尿病患者心血管事件增加率及其死亡率上升的主要原因。国外终末期肾衰竭患者中原发病为糖尿病的约占总数的30%-40%。随着我国糖尿病患者人数的日益增多,目前DN已跻身为我国导致慢性肾病能不全的重要原因之一。DN起病隐匿,且病程进展迅速,一旦患者确诊为DN时往往已经处于不可逆的肾脏损害并进入快速发展的阶段。DN临床治疗效果不理想、预后差成为当前临床医生面临的一个重大难题。众所周知,DN早期特征性的病理改变为肾小球肥大及细胞外基质增多,随着病情逐渐进展,进而出现肾小球硬化及间质纤维化,临床表现为慢性肾功能不全。早期DN是可以逆转的,因此,如何尽早明确糖尿病患者发展为DN的可能性,并采取有效的干预措施,延缓病变的发展是当前医学界研究热点。 Angiogenesis抑制剂 12-脂氧化酶(12-lipoxygensae,12-LO)是一种不饱和脂肪酸的氧化酶,在体内活化后以花生四烯酸(Arachidonic acid, AA)为基质生产12-氢氧化二十碳四烯酸(12-Hydroxyeicosatertraenioc acid,12(S)-HETE)的代谢产物。研究表明,12-LO及其代谢产物12(S)-HETE主要通过氧化应激及引起炎症反应参加多种疾病的发生、发展,如高血压、冠心病、糖尿病、动脉粥样硬化等。因此,12-LO及其代谢途径受到越来越多研究者的关注。早在1999年,Bleich D等人就发现：12-LO基因敲除的C57BL／6小鼠连续腹腔注射链脲佐菌素(streptozotocin, STZ) 5天,12-LO基因敲除的C57BL／6小鼠的血糖无明显升高。近年,Kim

YS和Kang等研究发现高糖刺激后的肾小球系膜细胞12-HETE的释放水平是明显增加,而Reddy MA等人研究发现12-LO能够通过P38MAPK信号传导途径增加DN时细胞外基质(extracellular

matrix, ECM)蛋白的表达,如：纤维连接蛋白(fibronectin, FN)、胶原蛋白(Collagen),因此,12-LO在糖尿病肾病的发生、发展中具有重要的作用。肾小球肥大和细胞外基质增多是早期DN特征性的病理改变,而肾小球肥大与细胞周期调节有关的细胞周期素激酶抑制剂(cyclin-dependent kinase inhibitor, CKI)的表达密切相关。因此,本研究主要是多角度探讨DN时12-LO及其代谢途径与CKI表达调节及与肾小球细胞肥大的关系；观察积聚的细胞外基质(Extracellular matrix, ECM)对12-LO和CKI表达的调节作用,并阐明其分子机制,明确12-LO对DN肾小球细胞肥大的发生和ECM积聚的关系,进一步明确12-LO在DN进展中的作用,为临床治疗DN提供新的治疗靶点。我们以体外培养的原代肾小球系膜细胞、微型泵注射12(S)-HETE大鼠模型及高脂饮食结合小剂量的链脲佐菌素(Streptozotocin,STZ)诱发的2型糖尿病模型大鼠作为研究对象,进行如下实验：①微型泵注射12(S)-HETE对正常大鼠肾小球内CKI及ECM的表达影响；②皮下注射12-LO抑制剂((cinnamyl-3,4-dihydroxy-cyanocinnamate,CDC)对2型糖尿病大鼠肾小球肥大及肾小球内CKI.ECM的表达影响；③12(S)-HETE刺激肾小球系膜细胞对CKI的表达影响及其信号传导；④高糖刺激肾小球系膜细胞对CKI的影响及给予CDC后CKI的表达变化；⑤模拟ECM微环境对肾小球系膜细胞CKI的表达影响和CDC对其表达的变化及其信号传导。 已经 主要研究结果如下： 1.泵注射12(S)-HETE增加正常大鼠肾小球内P21、P16及CollagenⅣ的表达p<0.01),CDC在不影响糖尿病大鼠的血糖的情况下,改善肾脏肥大及降低肾小球体积p<0.01),P21、P16及CollagenⅣ的表达也明显增加(p<0.01)；给予CDC治疗后P21、P16及CollagenⅣ的表达和12(S)-HETE水平均显著下降p<0.01),给予P38MAPK抑制剂后,P21、P16的表达明显降低(p<0.01),CDC降低高糖刺激后系膜细胞12(S)-HETE释放水平(p<0.01),CDC降低高糖刺激引起的P21、P16的表达(p<0.01),CDC降低模拟的ECM微环境中的系膜细胞12(S)-HETE释放水平(p<0.

00 vs 2.07、0.91 vs 0.84和2.30 vs 0.65;另外,MDC染色结果显示,8Gy IR使三组细胞中MDC阳性细胞率分别增加了136%,27%和-55%。表明沉默ATM抑制H1299细胞中IR诱导的自噬水平,虽然沉默MAPK14增加H1299的基础自噬水平,但是8Gy

IR诱导后其自噬水平下降。提示沉默ATM和沉默MAPK14均可抑制H1299细胞中IR诱导的自噬水平。7.抑制ATM和MAPK14减弱IR对m TOR信号通路的抑制作用与假照组相比,8Gy IR处理Hela细胞后,AKT,P-m TOR和P-P70S6K表达水平分别下降46%,59%和58%,经100n M selleck激酶抑制剂 KU55933预处理后,各基因表达水平分别下降36%,28%和21%。Hela沉默细胞模型中,与假照组相比,8Gy IR使Psuper空载体细胞中P-P70S6K/T-P70S6K下降(1.00 vs 0.43),却对ATMRi细胞(0.43 vs 0.34)和MAPK14Ri细胞(0.32 vs 0.33)的m TOR信号通路活性没有影响。提示KU55933抑制ATM磷酸化,沉默ATM基因和沉默MAPK14基因可以部分解除Hela细胞中IR对m TOR信号通路活性的抑制。与假照组相比,8Gy IR处理H1299细胞后,AKT,P-m TOR和P-P70S6K表达水平分别下降50%,84%和70%,经700n M KU55933预处理后,各基因分别下降了10%,40%和38%。H1299沉默细胞模型中,与假照组相比,8Gy IR使Psuper空载体细胞m TOR表达水平下降62%,却没有改变ATMRi细胞的m TOR水平。重要的是,MAPK14Ri细胞中m TOR基础水平较低,为空载体对照组的0.3倍,而8Gy IR使其显著增加至0.7倍,该变化与H1299细胞中MAPLC3的变化趋势一致。表明KU5593抑制ATM磷酸化,沉默ATM基因和沉默MAPK14基因可以部分减弱H1299细胞中IR对m TOR信号通路的抑制作用。两种细胞中结果共同提示ATM和MAPK14可能通过m TOR信号通路直接调控IR诱导的自噬。8.抑制ATM和MAPK14影响Beclin 1/PI3KIII复合物Hela细胞中,8Gy IR使空载体对照组细胞Beclin 1/PI3KIII结合增加1.63倍,而在ATMRi细胞(2.93 vs 1.36)和MAPK14Ri细胞(1.99 vs 1.09)中IR使该结合水平下降。同时,在空载体细胞中检测到Beclin 1/ATM的结合,沉默ATM和MAPK14后该结合消失。另外,8Gy IR使空载体细胞中MAPK14/BCL2结合水平和MAPK14/Beclin1结合水平增加,而沉默ATM和MAPK14基因后两种结合作用分别下降和不变。提示ATM和MAPK14可能通过影响Beclin 1/PI3KIII复合物参与调控IR诱导的自噬。H1299细胞中,8Gy IR使Beclin 1/PI3KIII结合增加29.05倍,而700n M KU55933预处理后,8Gy IR不再增加Beclin

1/PI3KIII结合。另外,在空载体细胞中发现Beclin1/P-MAPKAPK2的结合,但IR不能改变二者结合水平。而沉默ATM后IR使该结合水平显著下降,沉默MAPK14后二者结合消失。Beclin1/T-MAPKAPK2结合水平也发生类似变化。进一步提示ATM和MAPK14可能通过调控Beclin 1/PI3KIII复合物增加IR诱导的自噬。结论:1.IR诱导Hela细胞和H1299细胞发生自噬及活化ATM。2.MAPK14是ATM下游底物之一。3.沉默ATM-MAPK14通路抑制IR诱导的自噬。4.沉默ATM-MAPK14通路减弱IR对m 哪里 CB-839 TOR通路的抑制作用从而降低IR诱导的自噬。5.沉默ATM-MAPK14通路影响Beclin1/PI3KIII复合物活性从而降低IR诱导的自噬。6.ATM-MAPK14通路通过m TOR信号通路和Beclin1/PI3KIII复合物调控IR诱导的自噬最终影响肿瘤细胞放疗敏感性。
重金属镉存在广泛、半衰期长、危害严重,可在人体长期蓄积,损伤神经系统、侵害心血管系统、抑制免疫功能、影响内分泌系统、具有生殖毒性、对骨骼系统更深具影响,其骨骼毒性作用机理亟待进一步深入研究和解析。体内外研究证实,镉可引起多种细胞损伤和凋亡,且凋亡与氧化应激、胞内钙稳态、线粒体损伤、促分裂原激活蛋白激酶(MAPK)、半胱氨酸蛋白酶(Caspase)及非Caspase依赖性通路的激活密切相关。本研究以体外培养的孕18d

SD大鼠胎鼠成骨细胞为模型,通过体外试验探讨了镉对大鼠成骨细胞的毒性损伤效应及其凋亡可能的作用机理,为进一步认识镉的骨骼毒性作用提供依据。 1.镉对大鼠成骨细胞的毒性损伤及NAC的保护效应 采用二次酶消化法获得孕18d SD大鼠胎鼠成骨细胞,经鉴定后,用0、0.125、0.25、0.5、1、2、5、10、20μmol/L的醋酸镉染毒,通过cck-8还原法和细胞实时监控测定0-48h内染镉细胞存活率、细胞指数及LDH酶活性；染毒时加入0、100、500μmol/L、1、2mmol/LNAC,研究镉对大鼠成骨细胞的毒性损伤及NAC的保护作用,同时筛选作用浓度。 结果表明,随着染镉浓度的增大,成骨细胞的存活率逐渐减少,呈剂量效应关系,且具有差异显著性(P<0.05、P<0.05、P<0.01);NAC可以显著提高细胞存活率、降低LDH释放率(P<0.05、P<0.05),随后急剧降低(P<0.01)、极显著缓解了GR降低趋势(P<0.01)、极显著提高GSH含量(P<0.01)、极显著缓解了ROS降低趋势(P<0.05、p0.05),且对细胞凋亡形态和数量也无显著影响,说明在镉致成骨细胞凋亡的过程中,Caspase途径被激活,同时很可能启动了非Caspase途径。 5.钙离子途径在镉致大鼠成骨细胞凋亡中的作用 钙稳态失衡是细胞凋亡中的普遍现象。本研究在进行成骨细胞染镉的同时添加钙离子抑制剂Bapta-AM,通过观察细胞与细胞核形态变化、测定细胞内钙离子浓度、细胞存活率、细胞活性氧水平和线粒体膜电位,流式细胞仪测定凋亡率,探讨钙稳态失衡对镉引起成骨细胞凋亡的影响。 结果显示,镉可致成骨细胞内钙离子浓度极显著升高(P<0.

在解剖显微镜下，从SD大鼠下颌骨牙胚上剥离牙囊，组织块法和酶消化获取牙囊细胞原代培养、有限稀释法克隆纯化、细胞表型鉴定，成骨、成脂肪多向诱导分化，结果表明：DFCs具有成骨、成脂肪等多向分化潜能的干细胞特征，在定向成骨诱导分化过程中，没有出现成脂肪向分化。 2.腺病毒介导的BMP-9转染第三代DFCs，设立空白对照组，绿色荧光病毒组（GFP组）、BMP组，成骨诱导组、联合组。通过观察细胞形态和MTT生长曲线变化、荧光显微镜及RT-PCR检测转染后BMP-9基因mRNA的表达；碱性磷酸酶ALP活性、ALP染色及钙茜素红染色测定转染后DFCs的早晚期成骨活性。结果表明：转染的DFCs稳定表达BMP-9，说明转染后的BMP-9基因能成功被转录并表达于DFCs；与未转染对照组相比较，转染组ALP染色及茜素红钙结节染色为阳性；转染组显著高于未转染组，说明DFCs有良好的骨向分化能力，也提示了BMP-9对DFCs有成骨诱导作用。

3.应用抑制剂p38蛋白激酶抑制剂SB203580和ERK1/2激酶抑制剂PD98059干扰BMP-9转染的DFCs，用来阻断p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）和细胞外信号调节激酶（ERK1/2)胞内信号传递，通过ALP活性及染色检测；Western 和 Talazoparib体外 blot分析；钙茜素红染色实验分析MAPKs信号通路对BMP-9诱导的DFCs成骨向分化过程中的调控和影响。结果表明：抑制MAPKp38的表达后降低了Ad-BMP-9诱导的DFCs的ALP的活性和ALP染色，且减少了钙盐沉积与骨桥蛋白(osteopontin,OPN)和骨钙素（osteocalin,OCN）的表达；抑制ERK1/2的活性后则相反。同时，Western

blot分析显示Smad和MAPK通路激活，表明BMP诱导DFCs成骨向分化涉及到两条或可能更多的信号通路激活。研究结论： 1.成功获得了大鼠DFCs克隆，合适诱导条件下能够多向诱导分化。 2.在腺病毒BMP-9转染DFCs实验中，通过RT-PCR可检测到转染后BMP-9基因mRNA的表达，碱性磷酸酶和钙茜素红染色测定转染后DFCs的早期和晚期成骨活性，说明BMP-9可以成功地转染大鼠DFCs，转染后DFCs高表达BMP-9，且具有明显的成骨作用。 3.应用MAPKp38蛋白激酶抑制剂和ERK1/2激酶抑制剂干涉BMP-9转染的DFCs，通过ALP活性及染色检测、Western blot分析、钙盐沉积实验观察BMP-9转染的DFCs成骨向分化可通过ERK1/2和p38信号通路进行调控，为后续试验奠定了基础。
目的初步研究PM2.5所致气道黏液高分泌的主要信号转导机制，阐明MAPA通路（ERK1/2、JNK1/2、P38）在其中的作用。 方法本实验分三部分，第一部分实验对象是细胞和大鼠，第二部分和第三部分主要采取以大鼠为实验对象，依据对实验细胞和大鼠施加的条件而具体分为对照组、实验组及干预组。采用形态学观察和MTT、ELISA、RT-PCR、Western Blotting、等方法,观察各组粘蛋白（MUC）5AC在蛋白和转录水平的表达，测定TNF-α、IL-1β含量的变化，检测JNK、ERK1/2、P38蛋白的磷酸化水平，EMSA检查AP-1、NF-кB结合活性。 结果第一部分：大鼠实验所测得MUC5AC蛋白和mRNA转录水平上调明显（与对照组相比，P<0.05），TNF-α和IL-1β蛋白含量均有升高（实验组与对照组相比，P<0.05），P38相应拮抗剂引起的MUC5AC变化不明显。第三部分：大鼠肺组织MUC5AC水平以及NF-кB、AP-1的结合活力于PM2.5刺激前后均有显著差异（P
研究背景：糖尿病的心血管并发症已成为糖尿病患者致残和致死的最主要原因。其中低密度脂蛋白（Low

也许 density lipoprotein，LDL）经晚期糖基化终产物（Advancedglycation end products，AGEs）修饰后形成的糖基化低密度脂蛋白（Advanced glycationend product modified low density lipoprotein，AGE-LDL）在体内沉积后对促进动脉粥样硬化（（Atherosclerosis，AS）的发生与发展起着尤其重要的作用。目前研究表明，肥大细胞（Mast cells，MCs）作为一重要细胞组成成分参与了AS的形成和免疫介导的斑块失稳定进程。然而，AGE-LDL对肥大细胞活性的影响及其相关机制尚未见报道。 研究目的：研究AGE-LDL对小鼠骨髓来源肥大细胞（murine bone marrow derivedmast cells，mBMMCs）脱颗粒活性和toll样受体4（Toll-like receptor4，TLR4）的表达及其相关信号通路的影响，为糖尿病致AS和急性心血管事件提供新理论。 研究方法：1.

FGFR2功能获得性突变使小鼠呈现出类似人类Apert综合征的典型骨骼表型，包括颅骨早闭，圆头畸形，身材矮小，有望成为研究Apert综合征的良好动物模型之一。

Selleck GDC0199 2. Fgfr2+/S252W小鼠软骨内成骨发育迟缓，骨量减少导致长骨纵向生长障碍。 3.组织学观察发现FGFR2持续增强导致干骺端生长板增殖、肥大软骨层缩短，抑制生长板细胞增殖，并且表达成软骨、成骨标志蛋白下降。 4. Fgfr2+/S252W突变小鼠骨髓基质细胞体外培养诱导实验提示，FGFR2功能持续增强抑制细胞增殖以及软骨细胞早、中期分化，但增强软骨细胞终末期成骨分化能力，最终抑制细胞矿化能力。 5.利用RT-PCR发现FGFR2持续增强导致体外培养BMSCs成软骨基因表达下降，成骨表达基因上调。 6.FGFR2功能持续增强使BMSCs信号通路p38，Erk1/2磷酸化增强，对其使用相应阻断剂后发现相应基因表达上调。FGFR2通过p38信号通路可能调控软骨内成骨多个环节，而Erk1/2主要调控软骨细胞终末分化成骨过程。 7.利用体外培养技术再次验证p38，Erk1/2通路阻断剂对FGFR2功能增强所致骨发育迟缓有挽救作用，且使用p38通路阻滞剂后骨增长明显。 结论： 综上所述，本研究结果表明新建立的Fgfr2+/S252W突变小鼠是研究Apert综合征的良好动物模型之一。模型动物提示FGFR2功能持续增强对软骨内成骨也有重要作用，阻碍软骨内成骨过程，致模型动物肢体长度缩短、骨密度减弱。进一步观察发现FGFR2功能增强引起长骨骺端生长板组织形态异常是导致骨发育异常的关键。体外模拟BMSCs软骨内成骨过程发现，FGFR2功能持续增强抑制BMSCs增殖及成软骨分化能力，但增强成骨细胞相关基因表达，但抑制成骨细胞进一步矿化成骨。对软骨内成骨相关信号通路的研究发现FGFR2下游p38及Erk1/2通路对软骨内成骨影响巨大，且p38对成软骨、成骨过程均有影响，其信号通路阻滞剂对软骨内成骨发育障碍有救治作用。
顺铂(Cisplatin, DDP)是一种疗效显著的抗肿瘤药物,对多种实体瘤均具有较好的临床疗效,因此被广泛应用于癌症的化疗。然而,肿瘤细胞极易对顺铂产生耐药,常导致化疗失败,限制了顺铂的应用。本实验旨在研究新城疫病毒(Newcastle disease virus, NDV)对人耐顺铂肺癌细胞(A549/DDP)的体内外溶瘤作用及其信号转导机制。研究发现,NDV能特异而高效地在A549/DDP和A549细胞中增殖,且在A549/DDP细胞中的增殖能力更强,但不能在正常细胞中复制。NDV通过激活caspase依赖的细胞凋亡通路、MAPK通路和Akt通路诱导体外培养的A549/DDP细胞凋亡,且对A549/DDP荷瘤裸鼠具有显著的溶瘤效果。本实验首次研究了NDV对耐药肺癌细胞的溶瘤机制,结果表明溶瘤新城疫病毒在临床治疗顺铂耐药肺癌中具有重要的应用前景。取得的研究结果如下：

ATM激酶抑制剂浓度 1.采用TCID50法测定病毒滴度,结果表明NDV(FMW株)能特异而高效地在人耐顺铂肺癌细胞(A549/DDP)中增殖,且较在其亲本肺癌细胞(A549)中的增殖能力更强,但不能在MRC-5人胚肺成纤维细胞中增殖。 2. FACS (Annexin V/PI双染法)检测细胞凋亡,结果表明FMW感染能够诱导A549/DDP细胞凋亡,该凋亡过程对于FMW感染具有时间依赖性。 3. Hoechst33258染色观察细胞核形态,发现对照组细胞核均呈弥散均匀的椭圆状。FMW感染组部分细胞核切割成大小不等的致密浓染碎块,呈现典型的细胞凋亡形态学特征,进一步显示FMW感染引起A549/DDP细胞凋亡。

4. Western Blot检测凋亡相关通路的活化,结果表明FMW感染激活caspase通路,其中caspase-8介导的外源性凋亡通路起主要作用,此外,MAPK通路和Akt通路也被激活。 5.采用pan-caspase抑制剂Z-VAD-FMK(50μM)预处理A549/DDP细胞后再感染FMW, FACS (Annexin V/PI双染法)检测细胞凋亡,发现细胞凋亡被明显抑制,表明FMW诱导的A549/DDP细胞凋亡依赖于caspase的激活。 6.分别用Erk1/2、Jnk、p38和Akt通路特异性抑制剂PD98059(20μM)、SP600125(10μM)、SB203580(10或LY294002(10μM)预处理细胞后再感染FMW, 不 MTT法分析细胞杀伤率。结果显示,抑制MAPK和Akt通路均能抑制FMW诱导的A549/DDP细胞凋亡,表明MAPK和Akt通路参与该凋亡过程。 7.H&E染色、TUNEL法分析荷瘤裸鼠肿瘤石蜡切片,发现未感染组细胞基本未见凋亡而FMW感染组细胞呈现典型的凋亡特征,表明FMW能诱导A549/DDP或A549荷瘤裸鼠肿瘤细胞凋亡 8.采用QRT-PCR分析FMW M基因表达并以TCID50法测定病毒滴度,研究FMW在荷瘤裸鼠瘤内复制能力。结果表明FMW能在A549/DDP或A549荷瘤裸鼠瘤内特异地高效复制,且在A549/DDP移植瘤中复制能力更强。 9.测量并计算荷瘤裸鼠肿瘤体积,采用SPSS软件进行数据分析,结果显示,FMW显著抑制荷瘤裸鼠肿瘤生长,对A549/DDP及A549移植瘤的抑瘤效果相近,且能够延长荷瘤裸鼠生存期。 本实验首次研究了NDV对耐药肺癌细胞的溶瘤作用,证明NDV通过激活caspase通路、MAPK通路和Akt通路而有效诱导耐顺铂肺癌细胞凋亡,较好地克服了顺铂耐药导致的凋亡下调,对体外培养的A549/DDP细胞和A549/DDP荷瘤裸鼠均具有显著的溶瘤效果。本实验从全新的角度研究了NDV的溶瘤机制,表明NDV有望成为一种治疗顺铂耐药肺癌的理想制剂。
目的观察在高糖环境下不同浓度的全长脂联素(f-APN)对结肠癌细胞株SW480增殖和凋亡的影响；探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号通路以及半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)活化在f-APN诱导结肠癌细胞凋亡过程中的作用。 方法应用不同浓度（0μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、30μg/ml）的全长脂联素（f-APN）干预在高糖培养基（葡萄糖含量为4.5g/L的DEME培养基）中培养的结肠癌细胞株SW48024h、48h，分为高糖不加f-APN（APN0组）、高糖+10μg/ml f-APN组（APN10组）、高糖+20μg/ml f-APN组（APN20组）、高糖+30μg/ml f-APN组（APN30组）以及高糖+30μg/ml f-APN+p38MAPK阻滞剂SB203580(10μmol/L)组（APN30+SB组)，同时采用低糖培养基（葡萄糖含量为1.

25 Hz的张应变更能促进VSMCs有序排列,经过足够时间的周期性牵张后,较低频率可使VSMCs更有序排列;②张应变可以频率依赖地激活VSMCs的integrin-β1、Rac及p38活性以及细胞骨架微丝系统的聚合程度;③阻断信号分子Integrin-β1、p38以及破坏细胞骨架微丝系统可以显著影响不同频率张应变诱导的VSMCs朝向改变过程;④破坏细胞骨架微丝系统可使不同频率张应变作用下的integrin-β1活化受到抑制,阻断integrin-β1也可抑制p38活性以及细胞骨架微丝系统的聚合程度。 上述结果表明,周期性张应变频率是VSMCs排列的重要调控因素,在一定范围内VSMCs排列应有其最敏感适频率。Outside-in及inside-out信号途径都参与了不同频率张应变调控VSMCs排列的信号转导过程,完整的细胞骨架微丝系统可能是感受应变频率信号的关键结构。周期性张应变频率调控体外培养的VSMCs排列的规律,有助于解释一些临床现象并对血管组织工程的细胞种植调控有重要参考价值。
前言

严重感染是儿科危重症中胃肠功能障碍的常见病因之一,其发病机制与内毒素血症和肠屏障功能破坏密切相关。内毒素系革兰氏阴性杆菌细胞壁成份,其主要生物活性成份为脂多糖(lipopolysacchcride,LPS)。胃肠功能障碍在危重症中的重要性越来越受到重视,被认为是多脏器功能障碍的始发因素之一。小儿胃肠功能障碍和衰竭,常提示病情加重和预后不良。机体在受到革兰氏阴性细菌的感染时,LPS作用于细胞膜受体,通过细胞内信号传递级联使基因表达发生变化,导致宿主细胞因子失控性表达,细胞发生代谢、形态等的变化,介导细胞损伤的发生发展。因此LPS介导的信号转导机制已成为一个广泛注意的研究领域,近年来已取得了不少进展。

可能 丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinase,MAPK)信号转导通路是信号从细胞表面转导到细胞核内部的重要传递者,目前已确定出四条MAPK信号转导通路,即细胞外信号调节激酶(extra cellular signal regulated proteinkinase,ERK)通路、C-Jun氨基未端激酶(C-Jun amino terminal kinase,JNK)通路、P38通路和ERK5通路。JNK信号转导通路是LPS信号转导通路中的一条重要通路,c-jun是JNK下游的直接作用底物。除了被生长因子激活外,JNK通路还能被LPS、TNF-α、L-1、紫外线、射线、热休克、细胞外高渗及DNA变性剂等激活。JNK通路的激活与多种系统的促凋亡作用有关。有研究报道,枯否细胞中JNK是LPS信号转导途径中的重要信号分子;JNK的激活可能参与了脑缺血所致神经元的损伤及脑低氧预适应的发生和发展;在IL-10基因缺失鼠小肠缺血再灌注损伤模型中,也发现了JNK/C-Jun信号转导通路的异常激活。但有关严重感染致胃肠粘膜损伤时JNK/c-Jun通路的变化国内外研究报道还很少。 selleck抑制剂 磷脂酰肌醇-3激酶(phosphoinositide-Kinase,PI3K)是生长因子超家族信号转导过程中的重要分子,Akt是原癌基因c-akt的表达编码的丝/苏氨基酸激酶,是PI3K直接的靶蛋白。PI3K主要通过生长因子与受体结合而激活,具有抗凋亡及促进细胞增殖分化的作用,与多种生物学事件有关,如囊泡运输、细胞骨架重建、细胞存活、肿瘤发生、细胞凋亡等。PI3K信号转导通路作为细胞的主要存活通路,对肠上皮细胞的存活、增殖和重建十分重要。有研究表明,PI3K是激活NF-κB的上游途径,而NF-κB信号转导通路是LPS所介导的信号转导通路中最重要的下游通路,活化的NF-κB可诱导众多炎症相关的特异基因如TNF,L-6,L-8等的表达。但有关LPS与PI3K/AKT信号转导通路的研究很少,国内尚未见报道。 谷氨酰胺(Glutamine,Gln)是血液循环和组织内游离氨基酸池中含量最丰富的一种氨基酸。肠粘膜和其它迅速增生的细胞的主要能量来源是Gln而非葡萄糖。许多动物实验及临床研究表明,Gln可以从维持肠粘膜屏障、对肠免疫功能的调节以及对肠道氧化损伤的保护作用等三个方面起到对肠屏障功能的保护作用。适当剂量Gln的肠外营养和肠内营养,可以增加肠绒毛高度及粘膜表面积和隐窝深度,增加隐窝细胞的有丝分裂,加快肠上皮细胞的更新速度,增强修复能力,并能促进肠道粘液素的合成,增强肠粘膜细胞间的紧密连接,减少上皮细胞的凋亡,阻止肠粘膜萎缩及炎症所致的通透性增加。目前,对Gln能改善各种病理状态的肠粘膜生长修复作用已给予充分的肯定,尤其在烧(创)伤、感染、手术后、放化疗肿瘤病人已取得一定效果。但其作用机制尚不完全清楚。

不 总之,LPS通过作用于细胞膜受体,激活多条细胞内信号转导系统,形成一个错综复杂的信号转导网络,最终导致内毒素性休克,全身炎症反应综合征和多器官功能衰竭等疾病的发生。尤其在小儿,因其自身的免疫功能以及肠道的屏障功能不全,严重感染所致的胃肠功能障碍,常是诱发其它器官功能障碍的原因,治疗有一定的难度,一旦到晚期病死率极高,而小儿胃肠功能障碍的发病机理还不完全清楚,本研究对内毒素血症及谷氨酰胺治疗后小肠粘膜JNK/c-Jun及PI3K/Akt信号转导通路进行研究,旨在探讨LPS引起小肠粘膜损伤及谷氨酰胺对其保护作用的有关细胞信号转导机制,以探索有效的预防和治疗途径。 实验材料与方法 1、材料 用腹腔注射内毒素(4mg/kg大肠杆菌脂多糖O55:B5)方法制备18日龄大白鼠内毒素血症模型。不加任何处理因素为正常对照组,该组8只鼠。腹腔注射生理盐水为假注射对照组,腹腔注射内毒素为内毒素组,腹腔注射内毒素同时腹腔注射谷氨酰胺(2g/kg)为谷氨酰胺治疗组,每组40只鼠,分别于实验开始后2、4、6、24及72h各取8只鼠末段回肠4cm,分别放入10%中性甲醛固定,常规石蜡包埋切片;2.

整体试验：构建小鼠哮喘模型。Balb/c小鼠在第0天与第14天用10μg/只小鼠的卵白蛋白(OVA)与2mg氢氧化铝混溶后皮下注射于小鼠的脚掌、颈部、背部与腹股沟致敏。在第22-28天,将小鼠放置于有机塑料盒内,用雾化吸入器气道雾化吸入30分钟的OVA抗原(10mg/mL).第29天治疗组气道滴入给药3h后,用整体体积描记系统测定气道反应性,分别用3.125、6.25、12.5、25、50mg/mL的乙酰甲胆碱雾化吸入激发,测定相应浓度下气道呼气间歇(Penh)值。之后取肺泡灌洗液进行细胞计数,取左上肺提取mRNA。 而且 2.离体试验：MTT法检测环索奈德代谢物与福莫特罗对RBL-2H3细胞活性的影响。用抗原抗体复合物诱导RBL-2H3细胞构建肥大细胞炎症模型。用实时RT-PCR和ELISA检测IL-4,

IL-13mRNA和蛋白的表达。用Western Blot检测JNK信号通路。 结果： 1.整体实验结果： 1)在OVA诱导的小鼠哮喘模型中,环索奈德和福莫特罗可分别呈剂量依赖性的抑制乙酰甲胆碱(3.125-50mg/mL)诱导的Penh值的增加。2)环索奈德(0.3mg/kg)分别与福莫特罗(7,14,28μg/kg)联用对乙酰甲胆碱(6.25-50mg/mL)引起的Penh值升高,与单剂量相比具有协同抑制作用；环索奈德(1mg/kg)分别与福莫特罗(7,14,28ug/kg)联用对乙酰胆碱(3.125-50mg/mL)引起的Penh值升高,与单剂量相比无明显的协同抑制作用。3)环索奈德和福莫特罗可分别呈剂量依赖性的抑制哮喘小鼠肺部炎症细胞的增多。4)环索奈德(0.3,1mg/kg)分别与福莫特罗(7,14,28μg/kg)联用,与单剂量相比对哮喘小鼠肺部炎症的增多有明显的协同抑制作用。5)福莫特罗对哮喘小鼠肺组织中IL-4mRNA表达的升高呈计量依赖性抑制；环索奈德在浓度0.3mg/kg时对IL-4mRNA表达的升高有显著抑制作用；环索奈德(1mg/kg)分别与福莫特罗(14,28ug/kg)联用对IL-4mRNA表达的升高有协同抑制作用。

KPT-330制造商 2.离体实验结果：1)高浓度环索奈德代谢物(10-8-10-4M)可引起细胞毒性反应降低RBL-2H3细胞活性,而福莫特罗(10-12-10-4M)对细胞活性无明显影响。2)DNP-BSA (100ng/mL)刺激表面结合IgE (200ng/mL)的RBL-2H3细胞可显著诱导炎症因子IL-4和IL-13表达的增多。3)环索奈德代谢物(0.1-10nM)与福莫特罗(0.1-10μM)均可呈剂量依赖性的抑制DNP-BSA诱导的IL-4和IL-13表达的增多。4)环索奈德代谢物(0.2nM)与福莫特罗(1州)联用与单剂量相比,对DNP-BSA诱导的IL-4的产生有显著协同抑制作用；对IL-13和组胺的产生无显著协同抑制作用。5) Dolutegravir 价格 MAPK通路中JNK通路抑制剂SP600125(10μm)可显著抑制DNP-BSA诱导的IL-4表达和分泌,而P38和ERK通路抑制剂对IL-4产生无明显抑制作用。6) IgE-BSA复合物可诱导JNK磷酸化,在刺激20min时磷酸化最多。7)环索奈德代谢物(0.1-10nM)与福莫特罗(0.1-10μM)均可呈剂量依赖性的抑制DNP-BSA诱导的JNK磷酸化。8)环索奈德代谢物(0.2nM)与福莫特罗(1μM)联用与单剂量相比,对DNP-BSA诱导的JNK磷酸化有显著协同抑制作用。

结论： 1)在小鼠的哮喘模型中,环索奈德与福莫特罗的联用对于乙酰甲胆碱诱导的气道高反应性和炎症的产生,具有协同抑制作用。 2)在抗原抗体复合物介导的RBL-2H3炎症细胞模型中,环索奈德代谢物与福莫特罗联用对炎症因子IL-4的产生有协同抑制作用；抑制MAPK的JNK通路可能是其机制之一。
目的： 支气管哮喘(bronchial asthma,简称哮喘)是由多种细胞和细胞组分参与的以可逆性气流受限为特征的气道慢性炎症性疾病。主要表现为气道炎症、气道重塑以及气道高反应性(AHR)。AHR是哮喘的重要特征之一,主要是由气道平滑肌(ASM)的异常过度收缩引起,是引发咳嗽、胸闷、呼吸困难和喘息等症状的主要原因。一般认为,存在于哮喘患者气道的炎症介质可使气道高反应性增高,导致气道平滑肌(ASM)的异常收缩,诱发哮喘急性发作或者重度哮喘发作。p2受体激动剂作为控制哮喘发作症状的首选药物,主要通过与ASM上肾上腺素能受体结合而活化一系列信号通路,引起ASM的舒张。然而,部分患者在使用β2受体激动剂后并不能取得理想的疗效,其中机制众说纷纭,有研究者认为是炎症因子促进了ASM的收缩而影响了p2受体激动剂的疗效,也有研究者认为炎症因子直接作用于ASM引起p2受体激动剂对ASM舒张作用减弱或通过下调ASM表面p2受体的表达量而削弱了其舒张作用。近年来发现,许多炎症细胞因子与AHR有关,其中包括IL-17。IL-17是Th17细胞分泌的细胞因子,与许多炎症反应和自身免疫性疾病的发生和发展有关。早期研究发现,哮喘患者血清、痰液以及支气管肺泡灌洗液(BALF) IL-17中的浓度较正常人明显升高,而且其表达水平与病情以及气道反应性相平行。最近,M.

5μmol/L)、塞来昔布+长春新碱(10μmol/L+1.5μmol/L)和塞来昔布+长春新碱+前列腺素E2(PGE2)(10μmol/L+1.5μmol/L+100μg/L)作用于KB/VCR细胞,24、48和72h后,MTT法测定各组药物处理对KB/VCR细胞的生长抑制率。用金正钧法计算g值,判断塞来昔布与抗癌药物联合应用后对KB/VCR细胞的杀伤作用,当0.85≤q≤1.15为相加作用,q>1.15为协同作用,q<0.01)；各浓度之间的细胞抑制率也有显著性差异(P均<0.01)；各浓度之间的细胞抑制率也有显著性差异(P均<0.01。不同处理浓度的塞来昔布处理KB细胞,细胞的生长抑制率随着塞来昔布浓度和作用时间的增加而增大,表现为时间剂量依赖效应(P<0.01)；各浓度之间的细胞抑制率也有显著性差异(P均<0.01)；各浓度之间的细胞抑制率也有显著性差异(P均<0.01,而长春新碱+塞来昔布+PGE2联合应用组P-gp表达水平则显著高于长春新碱+塞来昔布组。塞来昔布组、塞来昔布联合长春新碱用药组和塞来昔布+长春新碱+PGE2组细胞内Rho123的荧光强度显著高于长春新碱组和对照组,P均
目的：探讨在血管生成素-1(Ang-1)的作用下,人脐带静脉内皮细胞(HUVEC)内游离镁离子浓度([Mg2+]i)升高的调节机制。

还有 方法：使用荧光指示剂1mag-fura-2-AM,运用离子荧光法动态检测人脐带静脉内皮细胞内的游离镁离子浓度。 结果：Ang-1诱导的内皮细胞[Mg2+]i增加与细胞外镁离子浓度无关。Ang-1诱导的内皮细胞[Mg2+]i增加与细胞内钙离子浓度无关。经酪氨酸激酶阻断剂(tryrphostin Saracatinib A23和genistein),磷脂酰3激酶阻断剂(wortmannin和LY294002)预处理,均可明显阻断Ang-1诱导的内皮细胞[Mg2+]i增加。但经活化丝裂原激活激酶阻断剂(SB202190和PD98059)预处理,则不能阻断Ang-1诱导的[Mg2+]i增加。 结论：Ang-1经酪氨酸激酶／磷脂酰3激酶信号转导途径使细胞内的镁离子库释放镁离子,从而增加人脐带静脉内皮细胞的[Mg2+]i。
目的：探讨氯胺酮增加细胞内游离形式的Mg2+浓度([Mg2+]i)的机制。

方法：从活体大鼠中分离得到单一的心肌细胞；用PTi离子荧光测定仪观察心肌细胞内Mg2+浓度的变化；观察在细胞外存在或不存在Na+的条件下,氯胺酮对胞内镁离子浓度的增加作用是否受影响；观察在细胞外存在或不存在Ca2+的条件下,氯胺酮对胞内镁离子浓度的增加作用是否受影响；将受试细胞用促分裂素原活化蛋白激酶(mitogen-activated selleck化学 protein

kinases, MAPK)P38阻断剂预处理20min后,观察氯胺酮对细胞内游离镁离子浓度的影响。 结果：1.经离子荧光法测定,静息状态下心肌细胞的[Mg2+]i是0.92mmol/L±0.06mmol/L。 2.在心肌细胞外镁离子1mmol/L条件下,氯胺酮(30μmol/L)诱导的心肌细胞内镁离子浓度增加26.6%±5.8%,在心肌细胞外镁离子0mmol/L条件下,氯胺酮(30μmol/L)诱导的心肌细胞内镁离子浓度增加26.3%±7.6%。统计结果显示,两组间差异无统计学意义(P>0.05)。 3.细胞外无Mg2+时,给予氯胺酮剂量依次0、1、3、10、30、100、300、1000、3000和10000(μmol/L)时,心肌细胞内的[Mg2+]i增高浓度依次为1.18%±1.38%、1.21%±1．36%、2.29%±1.8%、26.64%±4.04%、88.59%±30.52%、184.08%±41.47%、384.75%±53.57%、416.02%±50.46%、426.02%±53.32%,有明显的剂量依赖性,氯胺酮半数有效浓度(median effective concentration, EC50)是266.61±34.89μmol/L。 4.在心肌细胞外BAPTA-AM0mmol/L条件下,氯胺酮(30μmol/L)诱导的心肌细胞内镁离子浓度增加26.71%±6.8%,在心肌细胞外BAPTA-AM0.1mmol/L条件下,氯胺酮(30μmol/L)诱导的心肌细胞内镁离子浓度增加24.35%±6.5%。统计结果显示,两组间差异无统计学意义(P>0.05)。表明细胞内Ca2+浓度对细胞内[Mg2+]无影响。 5.在心肌细胞外钠离子浓度在145mmol/L的条件下,给予氯胺酮(30μmol/L),其诱导的心肌细胞内游离镁离子浓度增加百分数为26.6%±5.8%,在心肌细胞外钠离子浓度为0mmol/L条件下,给予氯胺酮(30μmol/L),其诱导的心肌细胞内镁离子增加百分数为26.3%±7.6%。统计数据显示,P>0.05,两组间差异无统计学意义。表明细胞外钠离子对细胞内的[Mg2+]i无影响。 6.在细胞外镁离子存在的条件下,A组给予氯胺酮(30μmol/L)处理,B组经P38MAPK专一抑制剂SB202190(10μmol/L)预处理20min后再给予氯胺酮(30μmol/L),结果显示A组氯胺酮诱导的心肌细胞内游离镁离子浓度明显增加,B组经氯胺酮诱导的心肌细胞内游离镁离子浓度增加69.89%±3.

However, these bacteria differed in their ability to induce moDC cytokine gene expression. S. thermophilus induced the expression of pro-inflammatory (TNF-α, IL-12, IL-6, and CCL20) and Th1 type (IL-12 and IFN-γ) cytokines, while B. breve and L. lactis were also potent inducers of anti- inflammatory IL-10. Mitogen-activated protein kinase (MAPK) p38, phosphatidylinositol 3 (PI3) kinase, and nuclear factor-kappa B (NF-κB) signaling pathways were shown to be involved in bacteria-induced cytokine production. CONCLUSION: Our results indicate that potentially

probiotic bacteria are able to induce moDC maturation, but their ability to induce ERK pathway inhibitors cytokine gene expression varies significantly from one bacterial strain to another.
目的探讨野生云芝多糖水溶性新组分CVPS-B对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的RAW264.7巨噬细胞骨调素(OPN)基因表达的影响及p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)及其转录因子ATF-2可能的调控作用。方法用RT-PCR检测CVPS-B对AngⅡ诱导的RAW264.7巨噬细胞OPN基因表达的影响;用Western

以及 blot测定AngⅡ(1μmol.L-1)诱导RAW264.7细胞p38MAPK转录因子-激活转录因子2(ATF2)表达的时间模式;用Western blot测定CVPS-B对RAW264.7巨噬细胞p38MAPK及其转录因子ATF2磷酸化表达的影响。结果CVPS-B(10mg·L-1)在AngⅡ(1μmol·L-1)刺激前30min加入培养基抑制作用最明显,共同孵育12h,抑制率达到50.3%(P<0.01);不同浓度CVPS-B1、10、50mg·L-1在AngⅡ(1μmol·L-1)刺激前30min加入培养基,共同孵育12h,其抑制率分别为13.8%、41.2%(P<0.01)及63.7%(P<0.01)。不同浓度CVPS-B及SB202190预孵12h,SB202190在5μmol·L-1(高浓度)时能明显抑制p38MAPK的磷酸化表达,相反,CVPS-B在10、50mg·L-1(高与低浓度)时均不能明显抑制p38MAPK的磷酸化表达。CVPS-B能明显抑制ATF2的磷酸化表达并呈剂量依赖性;而且,SB202190加CVPS-B在低剂量时(SB2021901μmol·L-1加CVPS-B10mg·L-1)也能明显抑制ATF2的磷酸化表达。结论CVPS-B能明显抑制AngⅡ诱导的RAW264.7巨噬细胞OPN基因表达。CVPS-B的抑制作用可能是通过调控转录因子ATF-2的活性实现的。
目的　探讨p38MAPK在沙土鼠脑缺血再灌注损伤海马神经元中的作用。方法　采用沙土鼠双侧颈动脉阻断前脑缺血模型 ,随机分成假手术组 (sham组 )、缺血再灌注组 (IR组 )、对照组 (control组 )、SB2 0 2 190组及P7935 0组 ,后 3组分别侧脑室注射 1%DMSO、p38MAPK特异性抑制剂SB2 0 2 190和激动剂P7935 0。每组根据再灌注时间不同再分为

1天、3天和 5天 3个亚组 ,每亚组 6只动物。在预定时间点行开阔法行为学检查 ,显微镜下计数海马CA1、CA3区存活神经元数目 ,TUNEL法检测CA1区凋亡细胞。结果　SB2 0 2 190可以显著减少沙土鼠再灌注 3天、5天的探索活动 ,增加存活海马神经元数目 ,减少CA1区神经元的凋亡 (P
目的 探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)刺激巨噬细胞骨调素(OPN)基因表达的模式变化,及p38丝裂原蛋白激酶(p38MAPK)信号通路在AngⅡ上调表达骨调素中的作用。方法 用反转录聚合酶反应(RT-PCR)测定AngⅡ体外刺激RAW264.7细胞骨调素基因表达及p38MAPK特异抑制剂SB202190的影响;用Western印迹测定Ang Ⅱ(1 μmol/L)诱导RAW264.7细胞p38MAPK及其转录因子-激活转录因子2(ATF2)表达的时间模式及SB202190对AngⅡ(1 μmol/L)诱导RAW264.7细胞p38MAPK磷酸化表达的影响。结果 (1)AngⅡ(1 μmol/L)诱导RAW264.7细胞骨调素基因表达呈时间依赖性,3 h骨调素表达略有升高,6、12、24 h骨调素分别升高0.9、2.3及2.4倍(P

目的检测血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对骨桥蛋白(OPN)表达的影响及其涉及的信号传导途径,并探讨OPN在AngⅡ诱导中膜平滑肌细胞(VSMCs)迁移中的作用。方法采用贴壁法培养SD大鼠胸主动脉的VSMCs。以免疫印迹(Western 无 blot)法检测OPN表达。运用Transwell观察反义OPN在AngⅡ诱导的VSMCs迁移中的作用。结果(1)体外培养的大鼠VSMCs在基础状态下表达一定水平的OPN蛋白,经10-7mol/L AngⅡ诱导24 h后,OPN蛋白水平与对照组相比增加1.3倍(P<0.05);(2)预先给予AngⅡ1型(AT1)受体拮抗剂氯沙坦(losartan)、胞外信号调节激酶(ERK)抑制剂PD98059和P38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)抑制剂SB202190后,AngⅡ诱导的OPN的表达分别下降44.2%、23.6%及72.5%(P<0.05),而OPN正义、错配义组无此变化。结论(1)AngⅡ上调VSMCs中OPN的表达;(2)AT1受体、ERK和P38MAPK信号系统参与AngⅡ诱导的OPN表达。(3)OPN参与AngⅡ诱导的VSMCs迁移。
AIM: To investigate the mechanism of bombesin-induced circular smooth muscle cell contraction in cat esophagus.

本文提出,肿瘤是一种蛋白质组病,并根据肿瘤比较蛋白质组、表达蛋白质组、功能蛋白质组和结构蛋白质组研究进展,从肿瘤发生发展过程中蛋白质(组)表达水平及状态、蛋白质翻译后修饰、蛋白质相互作用及网络调控等三个方面进行阐述.该观点的提出,将为肿瘤发病机制的研究开辟新的领域,为肿瘤的诊断(如生物标志物筛选)和筛选(如药物新靶标)提供新的思路,具有重要的科学意义和临床应用价值.
由于心肌坏死后局部组织缺血、缺氧,引起氧化应激和炎性反应,致使移植干细胞的生存和分化能力受到一定影响。胰岛素样生长因子-1、肝细胞生长因子、骨形态发生蛋白-2等细胞因子可通过与其受体结合,激活P13-K/Akt信号转导途径,从而介导干细胞在移植微环境中的存活,有利于移植干细胞向心肌分化。
目的:拟通过调节糖原合酶激酶3(GSK-3)活性,检测蛋白磷酸酯酶2A催化亚基去甲基化水平(dmL309-PP2AC)以及相关分子的变化,进一步阐明GSK-3调节PP2A活性的分子机制。方法:将选用小鼠神经瘤细胞株,给予PI3-K抑制剂
Objective:We

previously reported that inhibition of mitochondrial permeability transition pore(mPTP) is involved in the neuroprotection induced by sevoflurane postconditioning(SPost).However, the upstream mechanisms remain unclear.In the present study,we examined the hypothesis that the neuroprot…
Glycogen synthase kinase 3b (GSK-3b) is a serine/threonine protein kinase involved in the modulation of the inflammatory response. Dysregulation selleck抑制剂 of GSK-3b has been implicated in the pathogenesis of several diseases including sepsis. Here, we investigate the effects of two chemically distinct

GSK…
Diabetes and oxidative stress:preventive role of physical exercise Mustafa Atalay, Niku Oksala, Jani Lappalainen, Osmo Hanninen, Chandan K. Sen ( University of Ruopio, Finland. Mustafa. [email protected]) Oxidative stress, an imbalance between the generation of reactive oxygen species and antioxidant…
Effect of ganoderma lucidum spores 时间 powder on TNF – α and ET -1 in the hippocampi of epilepsy rat Shuang Zhao ,Shu – qiu Wang ,Sheng – chang Zhang ,Xiao – ru Ma ,Ting Zhang ( Postgraduate of Grade 2003,Jiamusi University, Jiamusi 154007, China; Department of Pathophysiology Basic Medical College o…
目的:探讨2型糖尿病对舒芬太尼后处理及GSK-3β蛋白抑制剂SB216763减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤作用的影响方法:健康雄性清洁级SD大鼠80只,体重1 80-200g,随机分为糖尿病造模组和正常组各40只。2型糖尿病模型的制备采用高脂饲料喂养诱导胰岛素抵抗加一次性腹腔注射链脲佐菌素35mg/kg的方法。正常组大鼠予以普通大鼠饲料,各饲养8周后进入实验,各随机分为4组,共8组(n=6):非糖尿病假手术组(NDM-S组)、非糖尿病缺血再灌注组(NDM-IR组)、非糖尿病舒芬后处理组(NDM-SP组)、非糖尿病SB216763处理组(NDM-SB组)、糖尿病假手术组(DM-S组)、糖尿病缺血再灌…
Introduction Myocardial ischemia reperfusion injury can be reduced by several interventions,including

LDN 193189 ischemic preconditioning(IPC) and volatile anesthetic preconditioning,in animal hearts and human hearts. However,recent studies have indicted that several pathological conditions,such as
目的:最近的研究表明TRIM家族蛋白MG53在心肌保护中发挥重要作用,但是很少的研究探讨MG53在七氟烷后处理抗心肌缺血再灌注损伤中的作用。本文试图研究MG53在大鼠I/R模型中七氟烷后处理心肌保护作用中的作用和机制。方法:应用Langendorff系统,离体大鼠心脏经历40min全心缺血120min再灌注,后处理组在复灌开始10给予2.5%七氟烷后处理。记录左心室血流动力学参数,测量心肌梗死面积,心肌MG53,Akt,p-Akt,ERK1/2,p-ERK1/2),GSK3β,p-GSK3β表达量。结果:相比对照组,七氟烷后处理组血流动力学明显改善,梗死面积明显减少,并且这种变化可以被LY29…
Traumatic brain injury (TBI) is often caused by the accidents to damage the brain. TBI may induce glutamate excitotoxicity and lead to neuronal and glial cell death. In this study, we investigated the mechanism of cell death during secondary damage of TBI and the protective effect of resveratrol. No…