5h，与假辐照组比较p-p38、p-HSP27、p-JNK以及p-ERK表达量上调。为进一步研究EMP照射引起BRB开放的分子机制，以特异性抑制剂SB203580、SP600125及U0126分别选择性p38-MAPK、JNK及MEK1/2，阻滞p38、JNK及ERK1/2信号分子的磷酸化，并以WesternBlot法检测RF/6A紧密连接蛋白occludin及claudin-5表达量。检测结果显示：使用p38抑制剂SB203580预处理组，EMP照射所致occludin及claudin-5蛋白表达下调被阻滞；另两组抑制剂预处理组未能阻滞EMP照射所致occludin及claudin-5蛋白表达量下调。由此证明，p38-MAPK信号通路参与诱导EMP照射所致BRB通透性增加的生物学效应。 并且 本研究结果表明，EMP（200kV/m，200次）照射导致BRB通透性可逆性增加，p38-MAPK信号通路通过磷酸化的形式调控紧密连接跨膜蛋白occludin及claudin-5的表达量，从而调节BRB的通透性。
恶性肿瘤与细菌感染是严重威胁人类健康的两大疾病,而目前临床治疗药物普遍存在的毒副作用及肿瘤和细菌的耐药问题,导致这两类疾病的治疗更加困难,因此开发新型抗肿瘤和抗菌药物显得十分迫切。近年来随着肿瘤和细菌感染治疗新靶点的不断发现,基于结构和机制的新药设计已成为靶向抗肿瘤药物和抗菌药物发现的主流,许多这类药物目前正在进行临床试验并显示出比传统化疗药物更强的特异性和更低的毒性。

喹喔啉酮是许多生物活性化合物的药效团,以其为结构母核合成的衍生物具有多种药理活性,被广泛用作抗肿瘤剂、抗(真)菌剂、HIV-1逆转录酶抑制剂、抗凝血剂、降血糖剂等,具有广阔的开发应用前景。基于表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂、基质金属蛋白酶-2抑制剂和组蛋白去乙酰化酶抑制剂这三类靶向抗肿瘤化合物的结构特征及其与相应酶的结合模式,在实验室前期工作的基础上,本文设计合成了三个系列共计45个喹喔啉酮衍生物,并对这些化合物的体外抑酶活性、体外抗肿瘤细胞增殖活性和体外抑菌活性进行了初步评价。 第一类目标化合物,以邻苯二胺为主要原料,经环合、N-甲基化、傅克酰基化、缩合等反应合成。第二和第三类目标化合物,以邻苯二胺为主要原料,经环合、N-甲基化、傅克酰基化、缩合、皂化、羟胺解等反应合成。所合成目标化合物的化学结构均通过ESI-MS与1H-NMR确证。 体外抑酶活性实验,测定目标化合物对MMP-2和HDAC(HDAC1,2)催化活性的影响。结果表明：本文设计合成的化合物并未对离体纯化的MMP-2显示出较好的抑制活性,这可能与实验条件的选取不当有关；但C系列中有3个受试化合物抑制HDAC(HDAC1,2)催化活性的IC5o达到微摩尔水平,其中抑制活性最好的为C6,苴IC50=2.442±0.78μM。 更多 体外抗肿瘤细胞增殖实验,通过MTT法测定目标化合物抑制SKOV3和HCT116两株肿瘤细胞增殖的活性,结果表明：部分受试化合物对SKOV3和HCT116的增殖具有较好的抑制作用,其中化合物B1抑制两株细胞增殖的IC50均为170μM左右。

体外抑菌实验,测定目标化合物对绿脓杆菌和大肠杆菌的最低抑菌浓度,结果表明：化合物B10表现出一定的抑菌活性,虽然远未达到阳性对照药的活性水平,但仍可作为先导物进行深入研究。 综上所述,本文设计合成的新型喹喔啉酮衍生物,在体外表现出良好的抗肿瘤和抗菌活性,是一类潜在的多用途先导化合物,对于开发新一代靶向抗肿瘤药物和抗菌药物具有重要的指导意义。
实验目的：

本课题通过对中国临床顺铂适应症患者进行基因测序,探寻SLC22A2基因808G>T突变在中国癌症患者中的突变频率；分析不同基因型和不同用药方案的患者化疗前后肾功能指标的变化,考察SLC22A2基因808G>T突变和西咪替丁对顺铂肾毒性的影响；并在基因型和用药方案相同的条件下,分析不同性别患者化疗前后的肾功能指标变化,考察性别因素对顺铂肾毒性的影响。 实验方法： 采用聚合酶链反应(PCR)对123名中国癌症患者DNA中OCT2表达基因SLC22A2的部分片段进行扩增,并进行基因测序,按照第808位点的碱基不同,将患者分为野生型(GG)和突变型(GT/TT)。再依据用药方案的不同,将患者分为顺铂单药组(n=55)和西咪替丁联合用药组(n=68)。收集患者化疗前血样并测定三个肾功能指标血浆尿素氮(BUN)、血清肌酐(SCr)和胱抑素C的浓度,作为基础值,继续收集患者化疗一周期后(21天)血样,用相同的方法测定BUN、SCr和胱抑素C的浓度,以化疗前后三个肾功能指标的浓度变化值作为衡量顺铂肾毒性的标准。结合性别、基因型和用药方案等因素,对不同组患者化疗前后肾功能指标的浓度差值进行统计学分析,考察OCT2基因多态性、西咪替丁和性别因素对顺铂肾毒性的影响。 实验结果： 通过对123名中国临床癌症患者血样DNA的基因型分析,在SLC22A2基因808位点共发现三种突变基因型：G/G(n=90)、G/T(n=30)、T/T (n=3),T等位基因频率约为14.6%,与在其他种族人群中的突变率基本一致。在不同分组的患者之间,化疗前后BUN和SCr水平变化均无统计学差异。在相同基因型和用药方案的不同性别的患者中,化疗前后胱抑素C水平变化也没有显著地统计学差异(P>0.05),说明顺铂肾毒性与性别因素无关。而在不同基因型患者中,化疗前后胱抑素C水平变化受基因突变的显著影响(P=0.009),基因突变型患者(G/T、T/T)化疗前后胱抑素C水平变化明显低于野生型患者(G/G),说明顺铂肾毒性可能与SLC22A2基因808G>T突变有关,突变型患者临床顺铂肾毒性较野生型患者低。同时胱抑素C水平变化还受西咪替丁联合用药的影响(P=0.032),西咪替丁联合用药组患者化疗前后胱抑素C水平变化明显低于顺铂单独用药组患者,说明西咪替丁对顺铂肾毒性具有防护作用。但是,在基因突变型相同、用药方案不同的两组患者中,这种趋势不存在,西咪替丁联合用药组患者化疗前后胱抑素C水平变化与顺铂单独用药组患者没有显著的统计学差异,说明西咪替丁对顺铂肾毒性的防护作用与SLC22A2基因808G>T突变有关,该防护作用依赖于OCT2表达基因SLC22A2的完整性。 此网站 结论： 在中国癌症患者中存在OCT2表达基因SLC22A2808G> T突变,T等位基因频率约为14.

2倍,1 h后几乎恢复到正常水平。 2.JNK特异性抑制剂SP-600125呈剂量依赖性的方式抑制AngⅡ诱导的JNK活化和c-Jun磷酸化,当浓度为10μmol/L和20μmol/L时其抑制作用分别达75%和90%,SP-600125对ERK1/2和p38 MAPK磷酸化水平均无抑制作用。 3.AngⅡ刺激后c-Jun转录活性及AP-1 DNA结合活性显著增加,SP-600125可呈剂量依赖的抑制AngⅡ诱导的c-Jun转录活性及AP-1 DNA结合活性的增加,20μmol/L SP-600125预处理几乎完全阻断c-Jun的反式激活。4.AngⅡ显著增加MCP-1启动子活性及MCP-1 mRNA表达,SP-600125可呈剂量依赖性的抑制AngⅡ诱导的MCP-1启动子活化和MCP-1 mRNA表达以及系膜细胞MCP-1、TGF-β和FN的分泌。5.1～20μmol/L SP-600125以剂量依赖的方式抑制AngⅡ促进的系膜细胞~3H-TdR掺入量和细胞计数的增加,而MEK1/2特异性抑制剂PD-98059和p38 MAPK特异性抑制剂SB-203580对AngⅡ诱导的系膜细胞数目的增加无抑制作用。 结论:AngⅡ→JNK/SAPK→c-Jun/AP-1信号通路在系膜细胞增殖和炎症介质分泌中发挥一定的作用。JNK特异性抑制剂SP-600125能部分抑制AngⅡ诱导的系膜细胞增殖和炎症介质分泌。

二、血管紧张素Ⅱ通过ROS/EGFR/JNK/AP-1信号通路诱导肾小球系膜细胞增殖 目的:我们前期的研究发现AngⅡ可通过JNK/AP-1信号通路诱导肾小球系膜细胞增殖,但JNK/AP-1活化的上游通路尚不清楚。本研究探讨活性氧(ROS)和表皮生长因子受体(EGFR)在AngⅡ诱导的JNK/AP-1活化及系膜细胞增殖中的作用并探讨ROS释放的来源。 p53-mdm2 interaction 方法:体外培养人肾小球系膜细胞,应用~3H-TdR掺入法和细胞计数测定系膜细胞增殖;荧光探针2,7—二氯二氢荧光素乙酰乙酸(DCFDA)检测细胞内ROS产生;化学发光法检测尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶活性;实时定量RT-PCR检测NADPH亚基p47phox和p67phox mRNA表达;Western

Blot检测p47phox和p67phox膜转位以及EGFR、JNK和c-Jun磷酸化。 PI103 结果:1、AngⅡ呈时间依赖性和剂量依赖性促进肾小球系膜细胞ROS产生。AngⅡ刺激3 min,系膜细胞内ROS产生明显增加,至60 min达到高峰,系膜细胞ROS产生是对照组2.26倍;1、10、100nmol/L AngⅡ刺激60 min,ROS产生分别是对照组的1.82、2.92和4.08倍。AT1受体(AT1R)拮抗剂losartan完全阻断了AngⅡ诱导的ROS产生,而AT2受体(AT2R)拮抗剂PD123319无抑制作用。2、NADPH氧化酶抑制剂apocynin和DPI几乎完全阻断AngⅡ诱导的ROS产生,而线粒体complexⅠ抑制剂鱼藤酮(rotenone,ROT)、黄嘌呤氧化酶抑制剂别嘌呤醇(allopurinol,ALLO)、环氧化酶抑制剂吲哚美辛(indomethacin,INDO)、脂氧化酶抑制剂(nordihydroguiaretic acid,NDGA)、细胞色素P450氧化酶抑制剂酮康唑(ketoconazole,KETO)以及一氧化氮合成酶抑制剂N-硝基-L-甲酯精氨酸(N~G-nitro-L-arginine methyl ester,L-NAME)对AngⅡ诱导的ROS产生均无明显影响。AngⅡ显著刺激NADPH氧化酶活化及p47phox和p67phox膜转位。3、AngⅡ可呈时间依赖性和剂量依赖性诱导系膜细胞EGFR磷酸化,100

nmol/L AngⅡ刺激30 min,EGFR磷酸化达到高峰,是对照组的3.96倍;AT1受体阻断剂losartan、抗氧化剂乙酰半胱氨酸(NAC)以及NADPH氧化酶抑制剂apocynin和DPI显著抑制AngⅡ诱导的EGFR磷酸化,同时EGFR拮抗剂AG-1478几乎完全阻断AngⅡ诱导的系膜细胞增殖。4、Losartan、NAC、apocynin、DPI和AG-1478阻断AngⅡ诱导的JNK/AP-1活化和系膜细胞增殖。 结论:ROS/EGFR/JNK/AP-1信号通路参与AngⅡ诱导的肾小球系膜细胞增殖。NADPH氧化酶抑制剂和EGFR受体拮抗剂能显著抑制AngⅡ诱导的系膜细胞增殖,可能具有一定的治疗作用。 哪里 本研究创新之处在於: 1.首次发现:AngⅡ可通过JNK—c-Jun/AP-1信号通路诱导肾小球系膜细胞增殖和MCP-1、TGF-β以及FN表达(参见:Zhang A,Ding G,Huang S,Wu Y,Pan X,Guan X,Chen R,Yang T.c-Jun NH2-terminal kinase mediationof angiotensinⅡ-induced proliferation of human mesangial cells.Am J PhysiolRenal Physiol.2005;288:F1118-1124)。 2.首次发现:活性氧依赖的表皮细胞生长因子受体磷酸化介导AngⅡ诱导JNK—c-Jun/AP-1信号通路活化及肾小球系膜细胞增殖(参见:Ding G,Zhang A,Huang S,Pan X,Zhen G,Chen R,Yang T.ANGⅡinduces c-JunNH2-terminal kinase activation and proliferation of human mesangial cells viaredox-sensitive transactivation of the EGFR.Am J Physiol Renal Physiol.

05或p<0.01),但是肾重与体重比值略有降低(p<0.01)。与糖尿病组(diabetesgroup)相比,糖尿病治疗组(pp2group)的体重、摄食量略有升高(p<0.01),肾重、肾重与体重的比值以及24h尿量明显下降(p<0.05或p<0.01)。(2)与正常对照组(controlgroup)相比,糖尿病组(diabetesgroup)的血糖、血清肌酐、尿素氮、甘油三酯、低密度脂蛋白和24h尿白蛋白明显升高(p<0.01)。与糖尿病组(diabetesgroup)相比,糖尿病治疗组(pp2group)的血糖、血清肌酐、尿素氮和24h尿白蛋白均明显下降(p<0.05或p<0.05或p<0.05或p<0.01);p38mapk活性在高糖刺激12h开始升高,至少持续48h以上(p<0.05或p<0.05或p<0.01)。与hg组相比,sb203580(hg+sb203580组)能够明显降低pparγ、chop蛋白质表达(p<0.01)。(2)与ng组相比,高糖培养(hg组)hk-2细胞48h的egfr磷酸化水平(活性)明显升高(p<0.01)。与hg组相比,pp2(hg+pp2组)能够明显降低egfr磷酸化水平(活性)(p<0.01)。ng组和m组之间的egfr磷酸化水平(活性)无显著差异。(3)与ng组相比,高糖培养(hg组)hk-2细胞48h的egfr磷酸化水平(活性)明显升高(p<0.01)。与hg组相比,ag1478(hg+ag1478组)能够明显降低egfr磷酸化水平(活性)(p<0.01)。与HG组相比,AG1478(HG+AG1478组)能够明显降低GRP78和CHOP蛋白质表达(P<0.05或P<0.01)。与HG组相比,EGFR抑制剂AG1478明显改善高糖对细胞活性的抑制作用(P
Wip1(Wild

Selleck Fostamatinib type p53-induced protein phosphatases,野生型p53诱导的蛋白磷酸酶1)隶属于苏氨酸/丝氨酸PP2C蛋白家族,在脑胶质细胞瘤、乳腺癌、膜腺神经内分泌肿瘤等多种恶性肿瘤中均有异常表达,是一种新发现的原癌基因。研究表明Wip1基因的表达依赖于p53蛋白的活化,而其Wip1蛋白的过表达能使活化的p53蛋白去磷酸化和减少p53基因选择性突变,从而发挥其原癌基因功能。乳腺癌、脑胶质细胞瘤等恶性肿瘤中Wip1的异常表达能影响患者预后并提高肿瘤对抗癌药物的耐受性。但目前关于Wip1与宫颈癌的相关研究较少,特别在宫颈癌的辐射敏感性方面还未有报道。基于现状,本研究以Wip1为切入点,首次探讨Wip1对宫颈癌He

La细胞生物学行为和辐射敏感性的影响,并阐明相关分子机制,以期为Wip1作为宫颈癌的放疗增敏靶点提供实验基础和理论支持,也为宫颈癌患者的个性化治疗提供新的治疗靶点。目的:阐述干预Wip1基因在增强宫颈癌细胞系He La细胞的辐射抗性过程中的作用及其机制,并探讨干预Wip1在宫颈癌治疗过程中的作用方法:(1)本研究采用的照射条件为:GC3000 Elan辐射器(MDS Nordion,加拿大),单次受照剂量2~3 Gyγ-射线。(2)应用Western bolt法检测不同宫颈癌细胞株中Wip1表达水平;(2)MTT法检测不同细胞株细胞增殖活性;(3)分别构建pc DNA3.1-Wip1和si RNA-Wip1重组质粒,将其转染入人宫颈癌细胞系He 许多 La细胞,构建空载体细胞、si

Wip1细胞和si Wip1+过表达Wip1细胞;(4)实时定量PCR法检测稳定转染细胞Wip1 m RNA表达量;(5)Western blot法检测稳定转染细胞Wip1蛋白表达量;(6)平板克隆形成实验检测He 一般 La细胞的放射敏感性;(7)流式细胞仪检测He La细胞凋亡水平;(8)彗星实验检测细胞在γ线照射后不同时间He La细胞的DNA片段分布,观察He La细胞的DNA损伤、修复情况;(9)Western blot法检测He La细胞p38,p-p38,p53和p-p53表达水平;(10)采用p38MAPK抑制剂SB203580预处理He La细胞,评价p38MAPK信号通路与He La辐射敏感性的关系;(11)应用Image J软件对蛋白电泳条带做灰度分析;(12)Student’s t-test用于分析数据,p0.05)。3、沉默Wip1表达上调He La的辐射敏感性si Wip1细胞于转染后48 h起增殖速度显著降低并呈下降趋势,其72 h、96h细胞数目显著低于空载体细胞和si Wip1+过表达Wip1细胞,差距有统计学意义(P0.05);克隆形成数目和半径结果与之类似;细胞凋亡水平与之相反。联合γ-射线辐射时,si Wip1细胞克隆数目和克隆半径显著低于空载体细胞和si Wip1+过表达Wip1细胞,差距有统计学意义(P0.05);细胞凋亡水平与之相反。4、沉默Wip1表达下调辐射条件下He La细胞的DNA损伤修复与空载体细胞和si Wip1+过表达Wip1细胞相比,si Wip1细胞DNA损伤程度较重,表现在彗星头部DNA百分比明显减少,而彗星尾部的小片段破损DNA百分比明显升高,差距有统计学意义(P0.05)。5、Wip1与p38MAPK信号通路中蛋白表达相对于空载体细胞和si Wip1+过表达Wip1细胞,si Wip1细胞p-p38、p53和p-p53的表达水平显著降低(P<0.05,P<0.01,P0.05)。而三组细胞中p38表达水平没有显著差别(P>0.05)。当预处理SB203580时,si Wip1+SB20358细胞相对于si Wip1细胞p-p38、p53和p-p53的表达水平显著降低,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01,P0.05),三组细胞p38水平没有显著差别(P>0.05)。6、SB203580逆转Wip1提高了细胞的辐射敏感性当预处理SB203580时,si Wip1+SB203580细胞和空载体细胞的克隆数目、克隆半径和凋亡水平相近,差异没有统计学意义(P>0.05);当联合γ-射线辐射时,si Wip1+SB203580细胞和空载体细胞的克隆数目、克隆半径和凋亡水平同样相近(P>0.05),表明SB203580逆转沉默Wip1能提高细胞的辐射敏感性。结论:1.Wip1在宫颈癌He La细胞的放疗敏感性中发挥重要的调节作用,沉默Wip1表达可以使γ-射线辐射后He La细胞细胞增殖、克隆形成和抗凋亡能力降低;2.Wip1能增强γ-射线辐射所引起的He La细胞DNA损伤的修复,从而增强其放疗耐受性;3.

01).该结果表明,抑制GSK-3β活性可以下调NF-κB的转录活性,并通过下调抗凋亡基因存活素的表达而促进ALL细胞的凋亡.
2010年10月15-18日,南京神经损伤001大黄酚聚氰基丙烯酸丁酯纳米囊对脑缺血再灌注小鼠学习记忆障碍的保护作用李超,张丹参,薛贵平(河北北方学院药理学教研室,河北张家口075000)
Wnt/β-catenin信号转导途径在结直肠癌的发生发展中起着至关重要的作用,而糖原合酶激酶3β(glycogen FGFR 抑制剂 synthase kinase 3 beta,GSK-3β)作为一种特殊的多功能丝氨酸/苏氨酸激酶,被认为是这一信号转导途径中的重要调节分子.在针对GSK-3β与结直肠癌发生发展关系的研究中,出现了截然相反的两种研究结果,一些研究显示抑制GSK-3β会促进肿瘤发生发展,而活化GSK-3β能抑制肿瘤生长.另一些研究结果则与之相反,他们显示抑制GSK-3β能治疗肿瘤,而活化GSK-3β则会促进肿瘤的进展.本文介绍GSK-3β分子的特性及其所调控的Wnt/β-catenin信号转导途径与结直肠癌发生发展的关系,并重点讨论产生GSK-3β研究结果矛盾的可能原因.
目的:探讨补肾活血方对实验大鼠骨关节炎关节软骨保护的机制。方法:以清洁级健康雌性SD大鼠为动物模型,分为Sham组、模型组和中药组。通过切除双侧卵巢并切断右侧膝交叉韧带建立骨关节炎动物模型,术后第4周开始灌服补肾活血中药,模型组、Sham组灌服等量的生理盐水,分别于术后8、12、16周取材,采用骨关节炎软骨病理变化评价系统(OARSI)评价关节软骨的病变,采用激光共聚焦显微镜下观察软骨细胞凋亡情况,运用免疫组化方法评估关节软骨中Wnt2、β-catenin、GSK3的含量,运用Western

blot法检测GSK3β蛋白磷酸化水平。结果:术后8、12、16周,模型组较Sham组OARSI评分差异有显著意义(P<0.01),中药组较模型组OARSI评分差异有显著意义(P<0.05)。术后16周,模型组见大量软骨细胞凋亡,而中药组、Sham组见少许软骨细胞凋亡,中药组、Sham组与模型组比较,差异有统计学意义(P
目的研究缺血后适应(IPost)对大鼠心肌保护作用及磷脂酰肌醇3激酶(PI3K/Akt)信号通路机制。方法将32只雄性Wistar大鼠随机分为缺血再灌注组(A组),IPost组(B组),IPost+Wortmannin组(C组)和缺血再灌注+SB216763组(D组),每组8只。测定各组左心室收缩压(LVSP)和再灌注30

selleck化学药品 min冠状动脉流出液中乳酸脱氢酶和肌酸激酶含量。并测定心肌梗死面积,对心肌进行免疫组织化学染色,观察Akt磷酸化和GSK-3β磷酸化的表达。结果与B组比较,A组LVSP明显降低,乳酸脱氢酶和肌酸激酶含量明显升高(P
阿尔茨海默病(AD)是老年人中引起痴呆最常见的一种慢性神经退行性疾病。目前AD发病机制不明确,没有有效的治疗手段,现有的治疗仅局限在缓解症状。因此研发有效的AD治疗药物迫在眉睫。本文根据公开发表的文献,对目前全球已经完成和正在进行Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期临床试验的AD治疗药物进行了总结,众多临床试验失败的教训提示单一靶点的治疗对于AD这种复杂疾病很难奏效。而多靶点药物和鸡尾酒组方药物可能是未来AD药物研发的一个重要方向。此外通过小分子化合物促进神经再生也可能是一种新的研发策略。中国在天然产物研究方面具有得天独厚的优势,很多天然产物都具有多靶点的药理学活性,并且对神经再生有促进作用,都值得进一步深入开发。
目的:观察硫化氢对大鼠急性心肌缺血组织细胞凋亡的影响及其作用机制。方法:健康雄性SD大鼠,随机分成7组:假手术组;心肌缺血组;心肌缺血+Na HS低剂量组;心肌缺血+Na HS中剂量组;心肌缺血+Na HS高剂量组;心肌缺血+SB216763组;心肌缺血+1%DMSO组。结扎大鼠冠状动脉左前降支复制急性心肌缺血模型。记录各组大鼠MAP、LVDP、LVEDP、dp/dt_(max)和dp/dt_(min),测定LDH活性、心肌细胞凋亡率、p-GSK-3β、t-GSK-3β、β-catenin、Bax和Bcl-2蛋白表达以及心肌组织形态学变化。结果:大鼠心肌缺血后MAP、LVDP、dp/dt_(max)和dp/dt_(min)降低,LVEDP升高,血清LDH活性增强,心肌细胞凋亡率和Bax表达增强,Bcl-2表达降低,p-GSK-3β、p-GSK-3β/t-GSK-3β和β-catenin表达降低。心肌纤维横纹不齐或消失,核偏移甚至裂解消失。给予Na HS后,大鼠MAP、LVDP、dp/dt_(max)和dp/dt_(min)均升高,LVEDP降低,血清LDH活性降低,心肌细胞凋亡率和Bax表达降低,Bcl-2表达增强,心肌p-GSK-3β、p-GSK-3β/t-GSK-3β和β-catenin表达均增强,心肌细胞变性程度明显减轻。结论:硫化氢可通过GSK-3β/β-catenin信号途径介导心肌损伤后抗细胞凋亡作用。
线粒体作为细胞能量代谢的重要场所,通过氧化磷酸化过程生成ATP为细胞供能。近年的研究表明,线粒体除具有能量生成功能之外,还参与母性遗传、多种生物大分子代谢以及细胞程序性死亡等病理过程。由此可见,线粒体的自身内源性平衡直接决定细胞的命运,线粒体的生成和自噬保持动态平衡。神经元主要以氧化磷酸化提供能量,维持神经元内各种生物学功能的完整,因此神经元内线粒体总体积分数约占细胞体积的30%。脑组织缺血再灌
术后认知功能障碍(postoperative

Hesperadin半抑制浓度 cognitive dysfunction,POCD)是手术和麻醉后出现的一种中枢神经系统并发症,在老年患者中发病率较高。但是,POCD的确切机制目前仍不明确。近年来,越来越多的证据表明,全身麻醉药物作为术后认知功能障碍的影响因素之一,可对老年患者的认知功能产生广泛的影响。因此,对于麻醉药物影响认知功能机制的探讨,对麻醉医师合理使用麻醉药物有重要的指导意义。
目的探讨糖原合成酶激酶-3(GSK-3)抑制剂SB216763改善多囊卵巢综合征(PCOS)患者卵巢颗粒细胞睾酮(T)分泌异常的作用机制。方法将行体外受精-胚胎移植(IVF-ET)治疗的20例不孕妇女按发病原因分为三组,其中不孕原因为输卵管及男方因素的非PCOS患者8例为对照组,PCOS不孕患者12例平均分为PCOS组和GSK-3β抑制剂组,每组6例。对照组及PCOS组患者的卵巢颗粒细胞进行体外培养48 h,利用放射免疫法检测细胞上清液中的雌二醇(E2)、孕酮(P)、T的水平。GSK-3β抑制剂组用浓度为5、10、25、50、100μmol/L的GSK-3β抑制剂SB216763对体外培养的PCOS患者卵巢颗粒细胞进行干预,后继续培养48 h,检测细胞上清液中的E2、P、T的水平。结果 (1)PCOS组与对照组患者相比其卵巢颗粒细胞中T分泌明显升高(P0.

p38 MAPK通路蛋白参与IBS-D粪便上清液诱导的Caco-2细胞BDNF过表达为进一步研究PAR-2介导BDNF表达的下游通路,我们检测了MAPK p38和NF-κB p65两个PAR-2受体下游通路蛋白。结果显示IBS-D FSN能够快速诱导p38MAPK磷酸化增加,但对p65蛋白无明显影响。PAR-2抑制剂ENMD-1068可阻断IBS-D

FSN对p38磷酸化的诱导。p38 MAPK抑制剂SB203580可阻断IBS-DFSN对Caco-2细胞BDNF蛋白的上调,但NF-κB抑制剂PDTC则无此作用。5.结直肠灌注IBS-D粪便上清液可诱导C57小鼠结肠高敏感,其作用依赖于结肠PAR-2激活和BDNF的过表达Western blotting结果显示,与对照FSN相比,结肠灌注IBS-D FSN可显著上调小鼠结肠上皮BDNF蛋白的表达,且此作用可被FUT-175和ENMD-1068抑制。免疫组化验证了Western blotting结果,显示上调的BDNF主要分布于结肠上皮和粘膜。功能上,腹壁肌电记录显示结直肠灌注生理盐水和对照FSN对小鼠结肠敏感性没有明显影响,IBS-D Selleckchem NVP-AUY922 FSN可则显著增强小鼠对CRD的腹壁肌电反应。阻断BDNF或PAR-2,以及消除IBS-D FSN丝氨酸蛋白酶活力均显著抑制IBS-D FSN对结肠高敏感的诱导作用。第二部分1.研究对象基本情况连续纳入符合罗马III诊断标准的IBS患者30例和正常对照者30例。IBS患者腹痛程度和腹痛频率评分均显著高于对照组,IBS亚型之间无明显差异。IBS-D患者粪便上清(IBS-DFSN)丝氨酸蛋白酶活力为明显高于正常对照(median (IQR) 1521(905.3-1983) U/mg蛋白vs.465 (264.3-708.0) U/mg蛋白；P
研究背景假体周围炎性骨溶解是人工关节置换术后的严重并发症。目前,大量研究提示无菌性松动主要与假体长期磨损或腐蚀产生的微粒所诱导的生物学反应有关。早在1977年Willert等人首先提出了假体无菌性松动是巨噬细胞对磨损微粒反应的结果。磨损微粒诱导人工关节周围组织内的单核巨噬细胞、成纤维细胞和滑膜细胞释放炎性细胞因子,引起一系列体内持续性炎性反应,促使局部破骨细胞增加,发生骨质吸收破坏,并最终导致假体的无菌性松动。近年来的研究提示,这些炎性细胞因子主要通过骨保护素/核因子κB受体活化因子配体/核因子κB受体活化因子(OPG/RANKL/RANK, Osteoprotegerin /Receptor Actibator of Nuclear Factor Kb Ligand /Receptor Actibator of NuclearFactor κB)信号系统激活破骨细胞,导致了假体周围骨量的丢失,产生骨溶解。肿瘤坏死因子样弱凋亡诱导因子(tumor necrosis factor like weak inducer of apoptosis, TWEAK)是1997年新发现的肿瘤坏死因子配体超家族中的一员。TWEAK在人体多种组织中均有表达,是一种广泛表达的肿瘤坏死因子家族的配体。多种免疫细胞(单核-巨噬细胞,树状突细胞,活化的T细胞等)均可产生其可溶性的细胞因子形式。在急慢性炎症或损伤的情况下,TWEAK表达显著增加。已经越来越多研究发现,TWEAK通过与其受体相结合,发挥各种各样的生物学效应,包括释放促炎性因子、调节免疫反应、刺激细胞凋亡以及调节组织修复与再生。TWEAK能促激活经典的核转录因子κB

(Nuclear Factor κ BNF-κB)通路,除此之外,研究发现,TWEAK还可激活非经典的NF-κB通路以及丝氨酸/苏氨酸丝裂原激活蛋白(mitogen-ativated

protein kinase, MAPK)激酶通路。MAPKs信号通路具有生物进化的高度保守性,广泛存在于细胞内,其主要功能是将细胞外刺激信号传递到细胞内,并引起细胞的一系列生物学反应。目前已发现细胞内有多条MAPK通路：细胞外信号调节激酶(extracellular c-Met inhibitor审查 signal regulated kinase, ERK1/ERK2)通路、c-jun氨基末端激酶(c-jun N-terminal kinase, JNK)通路(又称为应激活化蛋白激酶stress-activated 已经 protein kinase.SAPK).p38MAPK(p38α, p38β, p38γ and p38δ)通路和ERK3/ERK4/ERK5通路。其中p38 MAPK是MAPK家族的重要成员,当他们受到环境应激或细胞因子刺激时,能使效应细胞产生增殖、分化、迁移、浸润和炎症等生命活动。p38 MAPK的抑制剂SB203580,为吡啶咪唑类衍生物,能特异性地作用于p38 ATP结合活性位点Thr106,使p38失去了与ATP结合的能力,从而使其失去激酶活性。白介素-6(Interleukin 6, IL-6)是一种多功能的细胞因子,主要由单核细胞、淋巴细胞、成纤维细胞等分泌,发挥一系列的免疫效应。单核细胞趋化蛋白-1(Monocyte chemiattractant protein 1.MCP-1)属于趋化因子超家族的一员,其主要功能是通过趋化作用,使单核细胞离开血流而分化成为分布于组织中的巨噬细胞,参与着机体的免疫和炎症反应。研究表明这些因子都参与着关节置换术后假体周围无菌性松动的病理过程随着对炎性骨溶解研究的深入,特别是在溶骨性因子,受体／配体家族成员及其细胞内信号传导通路对破骨前体细胞分化、成熟及破骨细胞活化、功能影响方面研究的进展,针对骨溶解机制中某一环节进行干预成为可能。目前已有少量文献报道,p38 MAPK信号通道参与了磨损微粒诱导的骨溶解这一病理过程,Zwerina等人通过风湿性关节炎的小鼠模型研究,不仅发现p38MAPK对于炎性骨破坏起着重要作用,同时还发现抑制p38MAPK是减轻炎性骨破坏的重要手段。此外,在临床上对狼疮肾炎、肌炎等疾病的研究中发现,p38 MAPK信号通道能被TWEAK激活,并发挥致病作用。但是p38 MAPK信号通道在人工关节置换术后假体松动的界膜组织中如何表达,尚存在争议。而TWEAK作为TNF配体超家族的成员是否也参与假体周围无菌性松动的发生和发展,尚未见文章报道。基于以上的理论支撑,本研究拟通过组织形态学观察及分子生物学实验方法,探讨人工关节假体周围骨溶解的相关问题。1.在松动假体周围界膜组织中,TWEAK和p38 MAPK表达情况,探讨其表达与假体松动的相关性。2.用钛微粒刺激体外培养巨噬细胞(RAW246.7),通过p38 MAPK抑制剂进行干预,观察TWEAK及p38 MAPK的表达,探讨TWEAK-p38 MAPK信号通过在其中可能的作用机制。3.制备小鼠颅骨骨溶解的动物模型,用p38MAPK抑制剂进行干预,观察TWEAK及p38MAPK的表达,探讨TWEAK-p38MAPK-IL-6/MCP-1信号通道在炎性骨溶解中的作用,以及p38 MAPK抑制剂对人工关节无菌性松动靶向治疗的可能性。一.

5Hz,0.8%的牵张力。对照组不做特殊处理。分别对两组细胞施加0、30min和60min的牵张力。采用Western blot检测P-p38MAPK蛋白的表达情况,Real timePCR检测成骨基因ALP、COL I、OCN mRNA的表达变化。结果:C57BL/6J小鼠BMSCs传代后细胞生长状态稳定,呈梭形,具有多向分化潜能。Real time-PCR结果显示对照组BMSCs中ALP、COL I、OCN mRNA表达在不同时间点(30min与0min,60min与30min)间差异均有统计学意义(P<0.05);对照组ALP、COLI、OCN的表达量均明显高于同一时间点(30min和60min)牵张力阻断组(P<0.05);对照组P-p38MAPK蛋白的表达量均明显高于同一时间点(30min和60min)牵张力阻断组(P<0.05)。结论:所采用的0.5Hz,0.8%的机械牵张力在持续牵张力下可通过p38MAPK通路促进小鼠BMSCs向成骨细胞分化。
目的:探讨黄芩素(baicalein)抗肺纤维化(PF)的疗效,并通过测定p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)的活化程度,探讨其可能的作用机制。方法:6周龄健康SD雄性大鼠96只,随机分为正常对照组(C组)、肺纤维化模型组(M组)、p38

Pimasertib MAPK抑制剂SB 203580组(S组)和黄芩素组(B组),每组24只。造模或治疗后利用ELISA法检测血浆中促炎细胞因子高迁移率族蛋白B1(HMGB1)及细胞因子诱导的中性粒细胞趋化因子1(CINC-1)的水平;比色法测定肺组织髓过氧化物酶(MPO)活性;Real-time

PCR法观察结肠组织p38及p-p38基因表达水平。结果:M组大鼠血浆HMGB1、CINC-1均明显升高(P<0.01),肺组织MPO活性升高(P<0.01),p38磷酸化程度显著升高(P<0.05);与M组比较,S组和B组大鼠血浆HMGB1、CINC-1均明显降低(P<0.01),肺组织MPO活性下降(P<0.01),p38磷酸化程度显著下调(P
急性胰腺炎(Acute Pancreatitis,AP)是临床常见的急腹症,15%~20%病人可以发展成为重症急性胰腺炎(SAP)。SAP是一种常见的严重全身性疾病,其起病急、病情进展快、并发症多,易出现多器官功能障碍(MODS)甚至多器官功能衰竭(MOF),死亡率高达15%[1]。研究表明,细胞因子在SAP的发病过程中发挥着举足轻重的作用。近年来对细胞因子在其发病机制中的作用做了大量的研究,但因其网络
血管内皮细胞作为连续被覆在全身血管内膜的一层细胞群,不仅是血液与血管平滑肌之间的生理屏障,而且是高度活跃的代谢库,能够合成多种血管活性物质,如从小分子的一氧化氮(NO)到大分子内皮素(ET)及缓激肽等,这些血管活性物质对血管的舒缩功能与血液流动性有不可替代的调节作用,具有重要的生理功能[1]。多种心血管系统疾病的发生和发展与血管内皮损伤密切相关,例如高血压、动脉粥样硬化、糖尿病血管病变等,而这
绝经后骨质疏松症(postmenopausal Momelotinib小白鼠 osteoporosis,PMO)是中老年女性的多发病、常见病,严重影响患者的生活质量。PMO是由于卵巢萎缩、功能下降、雌激素水平降低引起成骨与破骨细胞功能失衡,进而导致骨质丢失加速、骨脆性增加、骨强度减低的一种骨代谢性疾病。根据其发病机制,临床上通过激素替代疗法(hormone high throughput screening replacement therapy,HRT)对PMO,已
目的观察严重烧伤大鼠血清刺激下骨髓间充质干细胞(BMSCs)迁移能力变化,探讨PI3K/Akt信号通路在BMSCs细胞迁移中的作用。方法建立严重烧伤大鼠模型,制备烧伤大鼠血清。1用体积分数10%的烧伤大鼠血清刺激BMSCs细胞不同时间后,Transwell小室检测BMSCs细胞迁移能力,Western blot检测BMSCs细胞内磷酸化p38(p-p38)和磷酸化Akt(p-Akt)表达水平。2另取BMSCs细胞随机分为4组:对照组(含10%胎牛血清)、烧伤血清组(含10%烧伤大鼠血清)、烧伤血清+抑制剂组(含10%烧伤大鼠血清+10μmol/L的LY294002)、烧伤血清+激动剂组(含10%烧伤大鼠血清+200 ng/m L的IGF-1),Transwell小室检测各组细胞迁移情况。结果 1烧伤血清作用0、1、3、6、12、24 h时,BMSCs细胞较迁移数分别为0、1.0±0.7、14.6±4.6、45.0±6.4、82.8±8.3、122.2±11.4,3

h时BMSCs细胞出现迁移,6、12、24 h时BMSCs细胞数量多于3 h(P0.05);而p-Akt水平分别为0.59±0.08、0.65±0.06、0.83±0.22、1.10±0.21、1.22±0.19、1.62±0.30,6、12、24 h时较作用0 h时(加入血清后即刻)水平明显增高(P<0.01),与烧伤血清组比较,烧伤血清+激动剂组BMSCs细胞迁移数量增多(P<0.01),烧伤血清+抑制剂组细胞迁移数量明显减少(P
目的:探讨右美托咪定对下肢神经阻滞复合喉罩全麻下髋关节置换老年患者术后认知功能障碍的影响。方法:本院2012年5月至2014年5月60例择期行髋关节置换术老年患者随机分为两组,右美托咪定组(实验组)和对照组,各30例。实验组麻醉诱导前静脉输注右美托咪定1μg/kg,输注时间10min,对照组给予等容量的生理盐水。两组患者均采用下肢神经阻滞复合喉罩全麻,于给药前(T1)、手术开始后1 h(T2)、8 h(T3)、24 h(T4)、48 h(T5)检测血清S100β蛋白含量,采用简易智力状态检查(MMSE)评分法观察患者认知功能情况,记录两组患者自主呼吸恢复时间、呼唤睁眼时间、拔管时间。结果:对照组在T3、T4、T5的血清S100β蛋白较T1明显升高(P<0.05),且明显高于实验组(P<0.05)。对照组在T3、T4、T5的MMSE评分明显低于T1(P<0.05),实验组在T3、T4、T5的MMSE评分即高于对照组(P<0.

长期葡萄糖剥夺导致细胞内ATP水平明显下降。加入丙酮酸类似物甲基丙酮酸后可以恢复细胞内ATP的水平,并且抑制了长期葡萄糖剥夺诱导的特异性增加的AKT T308位点的磷酸化。 2.细胞的自噬作用对特异性AKT Pexidartinib溶解度 T308位点磷酸化的增加没有影响。 3.选择性增加的AKT激活了一组特异性底物。长期葡萄糖剥夺可以诱导多种促进细胞存活的信号上调,抑制与存活相关性较低的信号通路。 4.细胞凋亡随着葡萄糖剥夺的时间延长而增加,但是当葡萄糖剥夺延长到一定时间后反而下降。 5.联合使用葡萄糖剥夺和GRP78勺抑制剂可以明显抑制肿瘤细胞形成集落的能力。 结论：选择性增加的磷酸化的AKT激活了一组特异性,促进细胞存活的底物。而且GRP78是在长期葡萄糖缺乏时AKT的磷酸化和细胞存活所必须的。在代谢应激的同时,使用AKT抑制剂或者GRP78抑制可以起到协同杀死对单独使用其中一种处理不敏感的肿瘤细胞。AKT通路和AMPK通路的组成部分在长期葡萄糖应激时都被高度激活。这表明在面临严重的代谢应激时,细胞里的信号通路网络会重新适应和平衡来有效激活细胞的存活机制。
缺血性脑血管病是临床常见病、多发病之一，具有高发病率、高致死率、高致残率、高复发率、恢复缓慢的特点，严重影响患者的生活质量，给患者家庭和社会带来沉重的负担，且近年来逐渐有年轻化的趋势。在脑缺血发生时,未接受溶栓治疗者脑组织中的动脉栓子自发向远端推移出现血管再通有可能引发缺血部位过度再灌注；而接受溶栓治疗的患者血管再通虽可达到部分有效再灌注，但由于缺血脑组织微血管结构完整性与功能出现损伤,血脑屏障破坏、自身调节衰竭,而可能发生瀑布式神经损伤级联反应,导致缺血再灌注损伤。研究证实脑缺血再灌注损伤是导致患者病情加重的主要原因，因此，脑缺血后如何减轻神经细胞再灌注损伤及死亡是临床面临的重要课题。

近年来随着现代免疫学和分子生物学的迅速发展，对于脑缺血再灌注损伤病理生理机制研究已取得了重大进步，目前普遍认为其病理生理机制主要包括氧化应激、炎症反应、细胞凋亡、兴奋性氨基酸毒性、细胞内钙超载、自由基损伤等，这几种因素并不是孤立存在的，彼此之间相互作用、相互影响，构成了一个复杂的调控网络，造成一系列病理级联反应，直接或者间接导致神经细胞凋亡/死亡，导致神经功能缺失。在脑缺血后复杂的病理损伤机制中，炎症反应、氧化应激、细胞凋亡是目前神经科学研究的热点，是脑缺血再灌注损伤的主要原因，抗氧化应激、减轻炎症损伤、抗细胞凋亡成为治疗缺血性脑血管病的主要途径之一。 尽管已经有多种药物经过实验研究，证明具有抗炎、抗氧化、抗凋亡等作用，但多数未能在临床得到广泛应用，使理论和实践大大脱节。出现这种现象最主要的原因是动物与人类生理机制及耐受性等方面的差异以及脑缺血后级联反应的复杂性，单一使用阻断某一病理环节的药物可能难以奏效。所以在目前的临床治疗中，理想的神经保护剂应该具备针对缺血再灌注损伤多个损伤环节发挥保护作用的特性。 阿利吉仑(Aliskiren)是近年来合成的第一个口服、非肽类、直接肾素抑制剂，相对分子量为609.8。近年来，动物和临床实验发现，阿利吉仑具有广泛的生理作用，不仅能够有效降低高血压、抑制心肌纤维化和保护靶器官，还具有抑制动脉粥样硬化进展，抗炎等作用。但是阿利吉仑是否可以起到脑保护作用，其作用机制如何均有待探索。 SGC-CBP30 临床上缺血性脑血管疾病多为局灶性，部分患者由于溶栓治疗或栓子自发向远端推移出现血管再通出现再灌注现象，因此，制备局灶性脑梗死并且可实现再灌注的动物模型更为接近临床实际情况。本研究选用雄性C57/BL小鼠为研究对象，采用改良Longa线栓法建立脑缺血再灌注模型，在大脑中动脉阻塞所致的脑缺血再灌注模型上观察脑缺血后HMGB1，TLR4，NF-κB，ERK1/2，HO-1，PI3K，AKT，Bcl-2和Bax的表达，确定缺血后与炎症反应、氧化损伤及凋亡的关系，并选用阿利吉仑进行干预，评价干预前后梗死体积、脑含水量、神经功能缺损评分，以及阿利吉仑对HMGB1，TLR4，NF-κB，ERK1/2，PI3K，AKT，Bcl-2和Bax信号通路的作用，初步探讨其在缺血再灌注损伤后的脑保护作用机制，并应用ERK特异性拮抗剂PD98059和PI3K特异性拮抗剂LY294002进行干预，观察上述各因子的变化，以及评价神经功能缺失、脑水肿和梗死体积情况。本研究分三部分，现将各部分内容概述如下。

为什么 第一部分阿利吉仑对局灶性脑缺血再灌注损伤小鼠的抗炎作用及其相关机制研究 目的：观察脑缺血再灌注损伤后HMGB1/TLR4/NF-κB的变化，研究阿利吉仑对脑缺血再灌注损伤所致的炎症反应的作用，探讨阿利吉仑抗炎相关作用机制。 方法：选用成年雄性C57/BL小鼠为研究对象，应用改良线栓法制备大脑中动脉缺血再灌注模型。随机将C57/BL小鼠分为4组：假手术组（Sham），溶剂对照组（Verhicle），阿利吉仑低剂量组（L-AS），阿利吉仑高剂量组（H-AS）。Sham组：假手术前连续5天以灌胃方式给予等量生理盐水，每日一次；Vehicle组：术前连续5天以灌胃方式给予等量生理盐水，每日一次；小剂量阿利吉仑干预组(L-AS)：术前连续5天以灌胃方式给予阿利吉仑10mg/Kg，每日一次；大剂量阿利吉仑干预组(H-AS)：术前连续5天以灌胃方式给予阿利吉仑25mg/Kg，每日一次。各组取材前进行神经功能评分，干湿重法测定脑组织含水量，TTC染色评价脑梗死体积，分别用免疫组化，Western-blot和RT-qPCR的方法检测缺血脑组织中HMGB1、TLR4、NF-κB蛋白和mRNA水平的变化。 结果： 1Sham组中未见小鼠神经功能缺损，神经功能缺失评分为0分；Vehicle组在24h和72h神经功能缺损评分均较严重，L-AS组在24h和72h与Vehicle组相比可降低神经功能缺损，但差异无统计学意义（P＞0.05），H-AS组在24h和72h与Vehicle组相比可明显降低神经功能缺损，差异有统计学意义（P＜0.05）； 2与Vehicle组相比，L-AS组在24h和72h可降低脑含水量，但是差异无统计学意义（P＞0.05），H-AS组在24h和72h与Vehicle组相比可明显降低脑含水量，差异有统计学意义（P＜0.05）； 3与Vehicle组相比，L-AS组在24h和72h可减小脑梗死体积，，但是差异无统计学意义（P＞0.

05)；与IR组比较，Tan ⅡA高、低剂量治疗组磷酸化p38MAPK和MMP-9表达均降低，且高Tan ⅡA组明显低于低Tan ⅡA组（均P＜0.05）；⑵与Sham组相比，IR组凋亡细胞明显增加，病理形态学改变明显；与IR组比较，Tan Ⅱ A高、低剂量治疗组凋亡细胞均减少，病理学改变减轻，且高Tan Ⅱ A组凋亡细胞明显低于低Tan ⅡA组（均P＜0.05）。⑶与Sham组比较，IR组脑组织EB含量明显升高；与IR组比较，Tan Ⅱ A高、低剂量治疗组脑组织EB含量明显降低（P＜0.05），且高TanⅡ A组明显低于低Tan ⅡA组（均P＜0.05）。结论Tan ⅡA减少脑缺血再灌注后细胞凋亡，抑制MMP-9表达，降低血脑屏障通透性，可能与抑制p38MAPK信号通路有关。
口腔鳞状细胞癌(Oral squamous cell carcinoma, OSCC)是头颈部最常见的恶性肿瘤(Head and neck squamous

cell carcinomas, HNSCC)之一,占口腔恶性肿瘤的90%以上。近来流行病学资料表明其发病率逐渐升高,并趋于年轻化。目前对早期OSCC患者的治疗方法多采用以手术为主,放化疗为辅的综合序列治疗,而晚期患者则以放化疗为主。化疗仍是OSCC重要的治疗手段之一。而当前化疗效果不佳的主要原因之一是长期使用化疗药物后肿瘤细胞对化疗药物的敏感性下降,使肿瘤细胞出现多药耐药(Multidrug PD0325901 resistance, MDR)现象。近年来在耐药机制的研究中,P-糖蛋白(P-glycoprotein, P-gp)介导的化疗药物外排增强是当前的研究热点之一 P-gp由MDRl基因编码,属ATP结合盒转运蛋白超家族(ATP-binding Cassette superfamily,

ABC)成员,是一种位于细胞膜上的渗透性磷酸糖蛋白,也是第一个被发现的、迄今为止最具有ABC家族特点的药物外排蛋白。P-gp在ATP作用下能逆向地将细胞内的抗癌药物转运到细胞外,从而降低细胞内的药物浓度,借此限制其细胞作用位点的药物的细胞毒性。其作用底物广泛,包括蒽环类药物、多肽类抗生素、生物碱及某些染料等。P-gp分布广泛,在肿瘤细胞中首次被发现,后来研究证实正常组织细胞包括肝肾脏、肠道系统、胰腺、肾上腺、血脑屏障和血睾屏障的毛细血管内皮、脉络丛、胎盘滋养层等均有表达。研究认为P-gp参与外源性及内源性物质的吸收及排泄。P-gp的功能包括：(1)限制药物的肠吸收：(2)一旦药物处于系统循环中,P-gp抑制药物致敏的通路,使组织细胞对药物不敏感；(3)促进药物清除及代谢。生理情况下,P-gp是在体内发挥保护作用,例如维持血脑屏障,将内皮细胞中的外源性物质转运到毛细血管腔内从而保护脑组织；肾脏中P-gp对药物排泄发挥重要作用；胃肠道中P-gp能减少外源性毒素的吸收。病理情况下,P-gp在组织中过表达,从而诱导MDR。当肿瘤细胞与化疗药物接触后,药物将与P-gp结合,P-gp借ATP水解的能量将底物逆浓度梯度泵到细胞外,从而降低细胞内药物浓度,导致化疗药物的细胞毒性作用减弱甚至消失,细胞出现耐药现象。有关人恶性肿瘤的研究证实MDR和细胞膜上P-gp的水平密切相关。研究一致认为在不同MDR细胞株中,P-gp表达水平与药物耐受程度相关,而在药物敏感细胞中其水平很低。 4-mu体外 环氧化酶(Cycloxygenase, COX)是催化花生四烯酸转化成前列腺素(Prosta-glandin, PG)的关键限速酶,有COX-1和COX-2两种亚型。COX-1在正常组织中表达,是一种负责各种生理功能的“管家酶”,维持自我平衡功能,如胃细胞保护、肾脏血管扩张和通过血小板生成促凝集前列腺素血栓素等。而COX-2除了在精囊、肾脏和大脑某些区域中表达外,正常组织中COX-2表达低或检测不到。COX-2由有丝分裂原、细胞因子、生长因子及致癌因子刺激产生,并参与肿瘤发展及发病机制如细胞凋亡、免疫监视、血管生成、侵犯与转移以及细胞分化。COX-2在肿瘤发生发展的作用机制大致为1、激活致癌物；2、诱导肿瘤细胞增殖；3、抑制肿瘤细胞凋亡；4、刺激新生血管生成；5、增强肿瘤细胞侵袭力及转移；6、促进肿瘤细胞逃避免疫监视等。研究发现COX-2的表达与总生存率以及预后参数如肿瘤大小、分化程度、淋巴结转移情况和肿瘤分期密切相关。COX-2是口腔癌预防及治疗的潜在分子靶点。而近年来研究发现COX-2与P-gp表达之间存在显著相关性。一些研究表明COX-2表达升高可能刺激MDR1/P-gp表达。因此人们设想,肿瘤组织中COX-2可能调控P-gp表达,从而降低肿瘤细胞对化疗药物的敏感性,介导多药耐药现象,COX-2抑制可能阻断P-gp表达,从而增强肿瘤细胞对抗癌药物的敏感性。 那个 近年来研究表明选择性COX-2抑制剂能降低体内外多种肿瘤细胞形成、生长和转移。塞来昔布能通过抑制COX-2活性而抑制肿瘤细胞增殖,而近年来发现表明COX-2非依赖性途径可能在抗增殖中发挥作用,报道的机制包括抑制细胞周期进程、诱导凋亡及抑制血管生成。研究同样发现COX-2抑制剂能增强化疗药物的细胞毒性作用。多项研究证实COX-2抑制剂联合化疗药物可显著抑制体内外肿瘤细胞生长,并认为COX-2抑制剂可能通过抑制P-gp或MRP1表达及活性增强肿瘤细胞对化疗的敏感性。

本研究中,我们通过体外实验探讨COX-2抑制剂塞来昔布增强口腔癌耐长春新碱细胞株KB/VCR对长春新碱敏感性与下调节P-gp表达和调节周期相关蛋白Cyclin D1、p21WAF1/CIP1表达的相关性,在前期研究的基础上进一步探索口腔癌化疗耐药性的产生及COX-2抑制剂逆转多药耐药的分子机制。 第一章塞来昔布联合长春新碱对KB/VCR细胞活力及细胞周期分布的影响 目的：探讨塞来昔布及长春新碱对人口腔癌耐长春新碱细胞株KB/VCR增殖及周期分布的影响,以及塞来昔布能否增强长春新碱对KB/VCR细胞的生长抑制作用及改变KB/VCR细胞的周期分布。方法：常规培养KB/VCR细胞。取对数生长期细胞进行实验。实验分为4组：(1)塞来昔布组：塞来昔布浓度分别为10、20、40和80μM。(2)长春新碱组：长春新碱浓度分别为0.375、0.75、1.5和3.0μM。(3)联合用药组：预实验已证实当塞来昔布浓度
目的:探讨姜黄素对DSS诱导的小鼠急性期UC的肿瘤坏死因子（TNF）-α、髓过氧化物酶（MPO）影响及其对UC治疗作用，同时检测结肠黏膜磷酸化p38MAPK及p38MAPK mRNA的表达，探讨p38MAPK信号通路在溃疡性结肠炎疾病中的机制，以及姜黄素对小鼠UC模型中p38MAPK通路的影响。方法：将健康60只雌性BALB/c小鼠，鼠龄6-7wk，体重16-20g，按随机数字表分为6组：正常组（A组）、模型组（B组）、地塞米松干预组（C组：1.5mg/kg.d）、姜黄素低剂量干预组（D组:姜黄素15mg/kg.d）、姜黄素中剂量干预组（E组：姜黄素30mg/kg.d）、姜黄素高剂量干预组（F组：姜黄素60mg/kg.