05,其余为P<0.01)但显著低于H对应组(均P0.05)。结论:(1)p38、NF-B活性、IL-6 mRNA均对运动刺激敏感,急性运动后,三者变化相似,特别是大强度条件下。p38活性、NF-B活性、IL-6 还有 mRNA上调幅度及NF-B活性、IL-6 mRNA上调时间与运动强度有关。(2)MEF2c、MyoD mRNA均对运动刺激敏感。MEF2c、MyoD mRNA的上调幅度、MEF2c mRNA的上调时间与运动强度有关。MRF4、MyoG mRNA仅对大强度运动刺激敏感,Myf-5基因表达对运动刺激敏感。(3)大强度运动后,肌肉表型转化趋势经历了慢-快、快-慢两个阶段,后再恢复正常水平。中等强度运动后早期,表型转化同样为慢-快,表型转化结束较早。
1.不同人群唾液中变形链球菌的定量检测及其意义/赵冬…//中华口腔医学杂志.-2010,45(4).-223～227针对染色体DNA印迹法检测变形链球菌中出现的14kb的Hae Ⅲ酶切片段,合成特异性引物(Sm*),运用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)技术定量检测变形链球菌
星形胶质细胞上调基因-1(astrocyte elevated gene-1,AEG-1)是位于8q22的单跨膜蛋白,可表达于多种细胞的不同部位。目前认为它是一种癌基因,在多种肿瘤中表达上调,能通过多条信号转导通路影响肿瘤细胞周期,具有增强细胞的成瘤能力、促进瘤细胞增殖和生长、增强瘤细胞侵袭及转移能力等生物学功能。随着研究深入,AEG-1有望成为判断肿瘤预后和基因治疗的新靶点。
目的观察鞘内注射小胶质细胞抑制剂米诺环素、脑源性神经营养因子(BDNF)拮抗剂TrkB/Fc对大鼠神经病理性疼痛发生期脊髓背角BDNF表达的影响,探讨BDNF在神经病理性疼痛发生中的作用机制。方法成年雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠42只,行鞘内置管,建立L5神经根结扎(SNL)致神经病理性疼痛模型,仅切开皮肤及皮下组织暴露L5神经根者为假手术。根据手术类型及注射药物的不同分为7组,每组6只:Ⅰ组,对照基础值组,鞘内置管成功大鼠,不用任何药物;Ⅱ组,鞘内注射1g/LTrkB/Fc10μL+SNL组,观察TrkB/Fc对SNL大鼠的作用;Ⅲ组,鞘内注射1g/LTrkB/Fc10μL+假手术组,观察TrkB/Fc对假手术大鼠的作用;Ⅳ组,鞘内注射磷酸盐缓冲液(PBS)10μL+SNL组,使用溶剂PBS作为对照组,观察溶剂对SNL大鼠的作用;Ⅴ组,鞘内注射PBS10μL+假手术组,观察溶剂对假手术大鼠的作用;Ⅵ组,鞘内注射8g/L米诺环素10μL+SNL组,观察米诺环素对SNL大鼠的作用;Ⅶ组,鞘内注射8g/L米诺环素10μL+假手术组,观察米诺环素对假手术大鼠的作用。分别于术前1h、末次给药前1h用vonFrey纤维丝以up-down法测大鼠的50%机械缩爪阈值(50%PWT)。末次给药后3h取手术侧腰膨大段脊髓背角,采用Western印迹法测定BDNF。结果末次给药前1h,Ⅳ组的50%PWT较术前1h明显降低(P0.05)。末次给药后3h,Ⅳ组术侧脊髓背角BDNF的表达显著高于其余各组(P值均0.05)。结论小胶质细胞抑制剂米诺环素、BDNF拮抗剂TrkB/Fc均能有效抑制神经病理性疼痛大鼠痛觉过敏的发生,疼痛发生期脊髓背角BDNF的表达增高可能与小胶质细胞的活化相关。
目的探讨兔蛛网膜下腔出血(SAH)后丝裂原活化蛋白激酶p38(p38MAPK)、核转录因子-κB(NF-κB)及细胞间黏附分子-1(ICAM-1)在脑血管痉挛(CVS)发病机制中相互间内在联系。方法新西兰纯种健康级大白兔40只,随机分为对照组、ICAM-1单克隆抗体治疗组、NF-κB拮抗剂治疗组、p38MAPK抑制组,每组10只。枕大池二次注血制作兔SAH后CVS模型。分离兔基底动脉(BA),应用形态学观察、免疫组化和原位杂交等方法,观测兔BA管径、血管壁上p38MAPK、NF-κB及ICAM-1表达变化及其相互间关系。结果对照组血管造影出现管腔狭窄,而各治疗组未见明显血管狭窄。免疫组化显示对照组p38MAPK、NF-κB、ICAM-1在内膜、中膜有强烈的表达;p38MAPK抑制组p38MAPK、NF-κB、ICAM-1的表达主要局限在内膜、内膜下,表达微弱;NF-kB拮抗剂治疗组p38MAPK、NF-κB、ICAM-1在内膜和内膜下也有微弱表达,而p38MAPK在中膜也出现表达;ICAM-1单克隆抗体治疗组p38MAPK、NF-κB在内膜、中膜均有表达,ICAM-1仅在内膜和内膜下有微弱表达。原位杂交结果与免疫组化类似。结论在兔BA血管壁上存在着由p38MAPK、NF-κB调控、ICAM-1介导的痉挛血管壁炎症反应,这一级联反应在CVS的发生、发展过程中起了重要的作用。
目的:研究异丙酚对第三丁基过氧化氢(t-BHP)诱导的脐静脉内皮细胞(HUVECs)氧化应激的保护作用和机制。方法:体外培养的HUVECs分为对照组、异丙酚组、t-BHP组、异丙酚预处理+t-BHP组,给予相应处理后,Westernblot检测p38MAPK磷酸化水平变化,RT-PCR检测iNOS、eNOS表达。结果:t-BHP处理后,能显著诱导p38MAPK磷酸化,激活iNOS、eNOS表达,而异丙酚预处理后能减轻这些变化。结论:异丙酚通过抑制p38MAPK,减少iNOS、eNOS表达,减轻氧化应激从而起到保护HUVECs的作用。
目的观察银杏叶总黄酮(TFG)对肾缺血-再灌注(I-R)损伤大鼠p38丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)活性的影响。方法

OSI-027购买 BMS 777607 120只SD大鼠随机均分为假手术组I、-R组和TFG预处理组(TFG 250 mg/kg,每天3次)。3 d后采用夹闭双侧肾蒂致肾缺血45 min后再灌注制作大鼠肾I-R损伤模型。Western blot检测p38 MAPK和磷酸化p38 MAPK蛋白表达;免疫组化方法检测肾组织磷酸化p38 MAPK的分布情况。结果磷酸化p38 MAPK表达活性在再灌注10 min开始增加,1 h达最高峰,持续至24 h仍高于正常水平,且主要在肾小管细胞表达。TFG预处理组磷酸化p38 MAPK的表达较I-R组明显减弱(P
目的:探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对间充质干细胞(MSCs)增殖的影响及其信号机制。方法:全骨髓贴壁法培养MSCs,流式细胞仪分析其表面MSCs标记(CD45、CD34、CD90、CD29)以及成骨、成脂肪等多向诱导分化潜能,鉴定其特征。MTT法分析不同浓度bFGF对MSCs增殖的影响,确立最佳浓度bFGF诱导MSCs增殖的时间特征,分别以磷脂酰肌醇3-激酶、促分裂素原活化蛋白激酶、磷脂酶C、蛋白激酶C、钙通道和钙泵选择性抑制剂等处理P3MSCs后,观察其对bFGF介导MSCs增殖的影响。结果:培养的MSCs表现CD90、CD29强阳性,具有成骨、成脂肪等多向分化能力;bFGF诱导MSCs增殖呈时间和剂量依赖特征,5.

内膜癌组患者uPA、uPAR、P38的阳性表达率分别为58%、56%、54%,内膜增生组uPA、uPAR、P38的阳性表达率分别为20%、25%、25%,对照组的uPA、uPAR、P38的阳性表达率分别为8.3%、16.7%、0%；三组中内膜癌组织中uPA、uPAR、P38的含量最高,统计学分析显示：与内膜增生组及对照组比较,差别均有显著性(P0.05)。2.在子宫内膜癌组织中uPA、uPAR和P38的含量与临床病理特征关系统计显示：①Ⅲ-ⅣV期较Ⅰ～Ⅱ期阳性表达率高(x2分别为4.258、8.179、5.832)；②低分化癌组织较高中分化组织高(x2分别为5.109、9.399、6.629)；③肌层浸润深度≤1/2较浸润深度>1/2低(x2分别为5.221、9.475、7.034)；④有淋巴结转移者高于无淋巴结转移者(x2分别为9.805、10.464、11.15)；以上差别均有显著性(P均0.05)。3.子宫内膜癌组织uPA表达率的增高伴有uPAR及P38表达率的增高,uPA与uPAR、uPA与P38的表达均呈正相关(r分别为0.389、0.353,(P均<0.05)。结论：uPA与uPAR协同促进了子宫内膜癌的发展、转移,p38信号通路在此过程中可能参与调节uPA,促进癌细胞的浸润转移,因此uPA、uPAR、p38可能成为推测子宫内膜癌预后的重要参考指标。
目的：观察血小板反应蛋白-1(TSP-1)、色素上皮衍生因子(PEDF)在糖尿病鼠肾组织中的表达变化,并探讨Angiopoietin-1对这些因子的影响。

为什么 方法：构建并鉴定高效表达Ang-1腺病毒载体,用链脲佐菌素诱导大鼠糖尿病肾病模型。设四组,即正常对照组、糖尿病组、空白载体组、Ang-1治疗组、成模8周后尾静脉注射Ang-1腺病毒载体。分别于8、12、20、28周行尿蛋白、肾脏常规病理检测,采用免疫组化、实时定量聚合酶链反应(Real-Time PCR)方法,分别检测肾组织中TSP-1、PEDF蛋白及mRNA表达水平,并行相关分析。 Selleckchem BIX-1294 结果：(1)三个模型组尿蛋白均明显升高(P0.05)；三个模型组12周后肾组织TSP-1蛋白和mRNA表达上调(P<0.05),峰值在20周；Ang-1治疗组肾组织TSP-1蛋白和mRNA表达低于糖尿病组和空白载体组(P<0.05)。(3)PEDF主要表达于肾小球和或小管间质；正常对照组肾组织PEDF蛋白和mRNA表达差异不显著：三个模型组各时点12周后肾组织PEDF蛋白和mRNA表达明显下调(P<0.05),且呈递减趋势；Ang-1治疗组肾组织PEDF蛋白和mRNA表达高于糖尿病组和空白载体组(P
目的：探讨中性粒细胞弹性蛋白酶(Neutrophil Elastase, NE)在大鼠重度脑损伤误吸致急性肺损伤早期的表达与变化,为重度脑损伤误吸患者急性肺损伤发病机制的研究和临床防治提供理论依据。

方法：①采用改进型Marmarou法建立大鼠重度脑损伤模型。②80只脑损伤模型大鼠随机分为重度脑损伤组(SB组,n=40)和重度脑损伤误吸组(SA组,n=40)。SA组大鼠在脑损伤后经气管滴入胃液(0.4ml/kg, pH=1.2)制成脑损伤误吸模型。SB组(又分为SB1、SB2、SB4、SB6组,每组10只)与SA组(又分为SA1、SA、SA4、SA6组,每组10只)分别于造模成功后1h、2h、4h、6h处死大鼠,进行有关指标观察和检测。对照组(C组,n=10)不给予任何损伤处理。③应用酶联免疫吸附(ELISA)法检测支气管肺泡灌洗液(BALF)和血浆NE的含量；Real-time 没有 RT-PCR法测定肺组织NEmRNA的表达；免疫透射比浊法测定BALF中白蛋白浓度；称取肺组织的湿重、干重计算湿重／干重比；光镜、电镜观察肺组织形态学改变。④用SPSS13.0软件分析所得数据。 结果：①雄性SD大鼠170只(含对照组10只),制作脑损伤模型过程中死亡73只,成功制作脑损伤模型87只,死亡率为45.63%;制作误吸模型过程中,SA组共死亡8只,SA1、SA2、SA4、SA6组分别存活8、8、9、7只大鼠。②大鼠脑损伤后立即出现呼吸抑制,数秒至数分钟后自行恢复呼吸,随后出现呼吸急促,伴全身抽搐、口唇及四肢发绀、偏瘫、口鼻见泡沫样血性分泌物等表现。大鼠昏迷期间,角膜反射及翻正反射等生理指标消失。胃液滴入气管后,大鼠出现呛咳、烦躁、呼吸困难等症状。③肉眼观察脑组织见出血及水肿；光镜显示蛛网膜下腔及脑实质出血、脑血管扩张充血、组织疏松、神经细胞水肿等。④肉眼观察C组大鼠肺组织无充血、水肿、出血及梗死灶,SB、SA组肺组织不同程度充血、水肿,表面可见点、片状出血,挤压时可见粉红色泡沫状液体溢出；光镜观察SB、SA组肺组织均可见肺泡壁毛细血管扩张充血,肺泡腔内不同程度水肿液积聚伴出血,肺间质水肿、肺泡间隔增宽伴中性粒细胞浸润；电镜显示SB、SA组肺泡Ⅰ型上皮细胞及线粒体肿胀,胞核染色质边集、固缩甚至消失；肺泡Ⅱ型上皮细胞胞核变形,线粒体及板层小体呈空泡样变,绒毛变形、脱落。⑤SB、sA组BALF、血浆及肺组织NE水平均较C组明显升高(P<0.01),NE浓度随时间发展逐步增高；SA组不同时相点NE水平较SB组相应时相点明显升高(p<0.01)。⑥SB2～SB6、SA1～SA6组BALF中白蛋白浓度与C组比较明显升高(P<0.01),且随时间延长呈上升趋势；SA组各时相点白蛋白浓度较SB组同时相点明显增加(p0.05)；SA6组肺W/D明显高于SB6组(P0.05)

结论：①NE在重度脑损伤合并胃液误吸致急性肺损伤的过程中发挥重要作用。②重度脑损伤合并胃液误吸致肺损伤较重度脑损伤无合并胃液误吸致肺损伤更严重。③重度脑损伤误吸6h内,肺组织损伤程度随时间延长呈加重趋势。④重度脑损伤合并胃液误吸早期肺内即有炎性细胞浸润,提示可尽早用药干预,以预防或减轻肺部损伤。
目的研究p38MAPK抑制剂CBS3830在糖尿病大鼠自体移植静脉中抗内膜增生的作用,从而探讨p38MAPK信号通路在静脉桥狭窄中的作用,为糖尿病患者桥血管再狭窄的预防及治疗提供新的途径。 方法将30只SPF级SD雄性大鼠(6～8周龄,体重200～250g,),随机分为假手术组(sham group, S)、对照组(control group,C )、药物组(drug group,D),每组10只。假手术组仅模拟手术过程,不进行血管移植和药物干预;另外两组首先采用腹腔注射链脲佐菌素法建立糖尿病动物模型,然后再采用改良cuff法建立自体静脉移植模型,造模前1 h药物组经胃管灌入0.

84±0.02、0.82±0.02、0.57±0.03,30umol/L浓度细胞存活率分别为0.73±0.03、0.64±0.04、0.42±0.02;50umol/L浓度细胞存活率,分别为0.62±0.04、0.42±0.02、0.22±0.01;②不同浓度LY294002分别作用于胃癌细胞4、8、12小时,细胞凋亡指数(%)则呈逐渐增加的趋势,其中10umol/L浓度细胞凋亡指数(%)分别为5.23±0.21、13.23±0.31、18.23±0.25,30umol/L浓度细胞凋亡指数(%)分别为6.40±0.17、15.33±0.42、20.07±0.31,50umol/L浓度细胞凋亡指数(%)分别为8.40±0.10、25.17±0.21、32.17±0.21;③P27KIP1在胃癌细胞中为胞质弱表达或不表达,经LY294002作用后,胞质和胞核均有表达;④Caspase

9在胃癌细胞中为胞质弱表达或不表达,经LY294002作用后,胞质表达明显增强。 结论LY294002能显著抑制胃癌细胞SGC7901的增殖,诱导其凋亡,其机制可能是增强增殖蛋白P27KIP1表达,并促进其向核内转移,同时增强凋亡蛋白Caspase 9的表达,从而使细胞产生G1期阻滞。
肝细胞生长因子(Hepatocyte growth factor.HGF)是一种多肽生长因子,首先从部分肝脏切除大鼠的血清中提取。由于其对肝细胞具有强的丝裂原作用.因此命名为肝细胞生长因子。最初它仅仅被认为是肝细胞增殖的丝裂原之一[1]

SGC-CBP30体外 ,以后逐渐发现其具有促进肿瘤进展的多种功能,HGF生物学活性是由原癌基因c-met编码的跨膜受体蛋白所介导,对卵巢癌等多种肿瘤的失控性生长发挥重要的作用[2]。 HGF与c-met结合后,受体发生自身磷酸化,由此激活受体的内在酪氨酸激酶活性,进而引起细胞内一系列信号转导途径的级联激活,从而调节细胞的增殖、分化、运动和血管生成等。卵巢恶性肿瘤细胞中HGF/c- met的表达与MVD指数密切相关,提示可能由于细胞HGF/c- met蛋白异常高表达,导致其对HGF敏感性增强,从而促使该细胞过度增殖、分化乃至恶化[3]。 HGF是一种血管生成的强大诱导剂,可诱发内皮细胞增殖和迁移,刺激体内新血管的生成。因此,本课题旨在通过研究HGF及其受体在卵巢癌细胞中的表达,揭示HGF及其受体在卵巢癌等多种肿瘤的失控性生长及其转移过程中发挥的重要作用,并进一步探讨抗卵巢癌药物紫杉醇对HGF/c- met信号传导通路的调控。 目的: 1.明确HGF及其受体c- met基因及其蛋白在卵巢癌中的表达规律。 2.明确HGF与c-met在卵巢癌中表达的相关关系。 Selleck GDC0994 3.明确HGF/c-met在卵巢癌细胞侵袭转移过程中的作用。 4.探讨抗卵巢癌药物紫杉醇对HGF/c- Carfilzomib核磁共振 met表达及作用的影响。 方法: 1.免疫组化检测HGF/c-met蛋白在人卵巢癌组织中的表达水平。 2. RT—PCR,原位杂交技术检测体外培养的人卵巢癌细胞中HGF/c-met基因的表达水平。 3.Transwell侵袭小室检测HGF/c-met对卵巢癌细胞侵袭能力的影响。 4.MTT法、扫描电镜分析紫杉醇干预后对人卵巢癌细胞生长的影响。 结果: 1.卵巢肿瘤组织中存在HGF/c-met蛋白的高水平表达,二者与卵巢癌的发生、侵袭和转移密切相关。

2.体外培养的人卵巢癌细胞系H0-8910中存在HGF mRNA及c-metmRNA表达,一定浓度的HGF可以上调c-met的表达。 3. Transwell小室培养24小时后用fibronectin将穿透的细胞粘在膜的反面,染色后显微镜下人工计数,发现HGF/c-met诱导组的细胞侵袭能力明显增强。 4.扫描电镜下观察,发现HGF/c-met在细胞核细胞膜均表达强烈.但是在另一组加入一定工作浓度的紫衫醇后发现抑制其表达,显示图象所需激发电压也增高。 结论: 1.体外培养的卵巢癌肿瘤细胞和人的卵巢肿瘤组织中均存在着HGF/c-met的明显表达,而且呈相关关系。 2.HGF/c-met基因及其蛋白表达,使人卵巢癌细胞的侵袭能力明显增强。 3.抑制HGF/c-met基因及其蛋白的表达,是紫杉醇对卵巢肿瘤细胞抑制杀伤作用的重要途径之一。
目的： 促脑卒中后的血管新生治疗是近年来抗脑缺血药物研究的热点之一。羟基红花黄色素A(hydroxysafflor yellow A，HSYA)是传统活血化瘀中药红花的主要活性成分之一。我们前期研究结果提示HSYA可能通过促进血管新生而发挥脑保护作用，本研究旨在对其促脑缺血后血管新生的早期分子基础做初步探讨。 方法： 1．建立线栓法致大鼠大脑中动脉阻塞(Middle cerebral artery occlusion，MCAO)模型，设缺血后6h、12h、24h三个时间点，每个时间点分为假手术组(n=8)、模型组(n=8)、阳性对照药组(MK801 0.

6:1)，病情以中度为主((52.5%)，轻度的患儿占有一定比例(32.3%)，部分病人伴有变应性鼻炎(11.7%)；（2）治疗后，三组患儿打鼾、张口呼吸、睡眠不安、及呼吸暂停等临床症状及PSG监测结果均较治疗前明显改善；（3）C组患儿与A组和B组相比，打鼾、呼吸暂停及睡眠不安等临床症状消失时间均缩短，C组患儿治疗后总有效率较A组和B组均高，A组和B组两组间各项值无显著差异；（4）A2组的扁桃体大小分级明显高于A1组。 结论：（1）轻度OSAHS在住院OSAHS患儿中占有约1/3比例；（2）对轻度OSAHS患儿，围手术期可采用口服孟鲁司特钠或鼻喷糖皮质激素或二者联用治疗，能有效缩小腺样体体积，缓解部分临床症状，联合用药总有效率较单用药更高，缓解症状更快。以上临床观察结果均提示炎症反应可能参与了上气道淋巴组织增生肥大的病理机制；（3）孟鲁司特钠可能对伴有3度以上扁桃体肥大的OSAHS治疗效果不佳。

Tie 2 inhibitor 第二部分LTD4对腺样体T细胞增殖及凋亡的作用研究 目的：观察CysLTR1在OSAHS患儿腺样体组织中的表达与细胞定位，研究LTD4对腺样体单个核细胞(AdMC)中CD4+T和CD8+T细胞增殖和凋亡的影响。 方法：（1）收集重庆医科大学附属儿童医院耳鼻咽喉科因OSAHS或分泌性中耳炎（对照组）住院行腺样体切除术患儿的腺样体组织；（2）收集的标本分为三个组：AHI＜5组、5＜AHI＜10组、AHI＞10组，分离AdMC，用ConA刺激培养48小时，收集上清，ELISA检测LTC4的表达水平；（3）收集的标本制备石蜡切片，免疫组化法检测CysLTR1在腺样体组织中的表达情况，免疫荧光双标法激光共聚焦观察CysLTR1是否可表达于CD3+T细胞；（4）分离AdMC，分为4个组：对照组，PHA刺激组，PHA+LTD4组和PHA+LTD4+孟鲁斯特纳（montelukast）组，CFSE标记法流式细胞术（FCM）检测LTD4对PHA刺激的AdMC中CD4+、CD8+T细胞增殖的调节作用；（5）分离AdMC，分为4个组：对照组，DEX刺激组，DEX+LTD4组，DEX+LTD4组+montelukast组，Annexin Ⅴ FITC/PI双染FCM检测LTD4对DEX诱导的AdMC中CD4+、CD8+T细胞凋亡的调节作用。 结果：（1）OSAHS患儿组腺样体CysLTR1的表达水平显著高于对照组，CysLTR1在OSAHS患儿腺样体组织中部分表达于CD3+T细胞，但并非优势表达；（2）中重度组分泌的LTC4水平显著高于正常对照组与轻度组；（3）LTD4+PHA共同刺激AdMC后，CD4+T和CD8+T细胞的增殖率比PHA组明显增加，montelukast可抑制LTD4的促增殖效应；（4）LTD4+DEX共同刺激AdMC后，CD4+T和CD8+T细胞的早期凋亡率比DEX组明显降低，montelukast可抑制LTD4的抑制凋亡效应。

Barasertib 花费 结论：（1）AdMC上清液中LTC4的表达与OSAHS患儿病情程度相关；（2）CysLTR1在腺样体组织中表达增高，部分CysLTR1定位于CD3+T细胞，提示CysLTs可能与腺样体组织增生肥大相关，并可能参与儿童OSAHS的发病机理；（3）LTD4对AdMC来源的CD4+T和CD8+T细胞的增殖和凋亡具有调节功能。 第三部分LTD4调节腺样体T细胞增殖及凋亡的机制研究 目的：探讨LTD4是否通过MAPKs通路调节AdMC中CD4+T细胞和CD8+T细胞细胞增殖和凋亡。 方法：（1）分离AdMC，分为对照组和处理组，处理组中加入PHA（浓度10ug/ml）和LTD4(浓度1×10-4mmol/l)，24孔板中，37℃，5%CO2孵箱培养。按培养时间点5min、15min、30min、1h、2h、12h收集细胞，提取总蛋白；（2）Western blot法检测LTD4对MAPK通路P38、ERK1/2、JNK的磷酸化蛋白及非磷酸化总蛋白的影响；（3）分离AdMC，分为四个组：对照组、PHA组、PHA+LTD4组和PHA+LTD4+p38抑制剂SB203580组或PHA+LTD4+ERK1/2抑制PD98059组，CFSE标记法FCM检测，观察CD4+T细胞和CD8+T细胞增值率的变化；（4）分离AdMC，分为四个组：对照组、DEX组、DEX+LTD4组和DEX+LTD4+p38抑制剂SB203580组或DEX+LTD4+ERK1/2抑制PD98059组，Annexin

更多 Ⅴ FITC/PI双染FCM检测，观察CD4+T细胞和CD8+T早期凋亡率的变化。 结果：（1）Western Blot法检测显示，PHA+LTD4组中，LTD4刺激AdMC后5min后，p38磷酸化水平明显开始增加（P＜0.05)，刺激1小时后，表达量达高峰（P＜0.001)，刺激2小时后，表达量逐渐下降，刺激12小时后，表达量降至基础水平，而p38非磷酸化总蛋白的表达无明显变化（P＞0.05)。CysLTR1抑制剂montelukast或p38的抑制剂SB203580可抑制该磷酸化反应。（2）PHA+LTD4组中，LTD4刺激30min后，ERK1/2磷酸化水平表达水平显著增加（P＜0.01)，刺激1小时后，表达量达高峰（P＜0.001)，刺激1.5小时后，表达量逐渐下降，刺激2小时后，表达量基本降至基础水平，而ERK1/2非磷酸化总蛋白的表达在各时间点均无明显变化（P＞0.

5,5, 10μg/ml)或protoapigenone (2.5,5,10μg/ml) 24 h后,使用台盼蓝染色法、流式细胞术、和Western LBH589订单 blot技术检测了细胞存活率、凋亡百分比、胞内ROS积累、线粒体膜电位变化情况及Procaspase-3,-8,-9、Bcl-2家族成员、MAPK通路蛋白等凋亡相关因子的蛋白表达水平。结果显示： 与正常肝细胞相比,肝癌细胞HepG2对DEDC高度敏感(#P
AGR2(anterior gradient-2)是一种分泌蛋白,广泛存在于肺、乳腺、前列腺、胰腺和结肠等腺体组织,并在这些腺体的肿瘤组织中过量表达,与肿瘤细胞的存活、生长和转移相关。AGR2的表达与乳腺癌、前列腺癌、胰腺癌等癌症的发生发展和预后相关,被认为是一个很有前途的早期诊断和判定预后的标志物。 已有的研究主要集中于AGR2在相关肿瘤中的作用,观察肿瘤细胞系过表达或敲除AGR2之后,对其生长、迁移等的影响；然而AGR2作为一个分泌蛋白,究竟是如何作用于靶细胞,相关的信号通路等信息知之甚少。 本研究中,我们首先利用原核表达纯化技术得到高浓度无标记的AGR2蛋白,然后用它去处理乳腺癌细胞系MCF7；实时细胞分析仪监测发现,在AGR2处理后的20分钟就能观察到信号的升高,而一些细胞质蛋白激酶的抑制剂可以特异性的阻止这些信号的产生；利用Western Bloting也检测到了AGR2刺激的P38、AKT的活化；这些结果表明,我们纯化的AGR2能够作为分泌蛋白,迅速激活靶细胞内的信号。

为了深入了解其作用机理,我们用AGR2蛋白处理MCF7细胞,然后利用基因表达谱芯片分析其靶基因的表达,并结合生物信息学方法,分析AGR2调控可能涉及的信号通路。AGR2刺激细胞12小时后,能够调控大量基因的表达,对其中20个差异基因的表达进行Q-RT-PCR验证,证实了VEGFA、VLDLR、 很少 FZD10、CCL2、AXIN2等基因表达被上调或下调；通过GO分析、Pathway分析和聚类分析,发现分泌蛋白AGR2蛋白可能通过mTOR等信号通路发挥作用。 本研究证明AGR2作为分泌蛋白可以快速激活靶细胞内的信号,并通过靶基因表达谱分析,初步探讨了其作用机制,为后续的详细研究奠定了基础；研究结果对于了解相关肿瘤发生发展的分子机制,以及在临床上开展以AGR2为分子靶点的个体化诊疗、预后判断等具有重要参考意义。
丝裂原活化蛋白激酶（Mitogen-activated protein kinases，MAPKs）是一类广泛存在于细胞内的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶。研究证实，MAPKs通路是重要的信号转导系统，可将细胞外的刺激信号转导至细胞及其胞核内，在引起一系列的细胞生物学反应如细胞增殖、转化、分化及凋亡等过程中发挥重要的作用。MAPKs家族主要包括4个亚族: ERK、JNK、p38MAPK和ERK5。p38MAPK在1993年被Brewster、Han等发现，是MAPKs家族中的重要一员。

谷氨酸是中枢神经系统内主要的兴奋性神经递质，脑缺血时细胞外液中异常升高的谷氨酸可引起兴奋性毒性作用，损伤神经元。而脑内突触间隙缺乏谷氨酸的代谢酶，主要依赖兴奋性氨基酸转运体（excitatory aminoacid transporters, EAATs）来调节其浓度，目前认为EAAT2在维持细胞外液谷氨酸浓度方面发挥着主要作用，因其蛋白主要存在于星型胶质细胞，又被称为胶质细胞谷氨酸转运体1（glial

glutamate transporter-1, GLT-1）。因此，调制GLT-1的功能，是防止由过多的谷氨酸导致的兴奋性毒性作用的有效方法。 我室既往的研究结果表明，脑缺血预处理（cerebral ischemicpreconditioning，CIP）可上调p-p38MAPK及GLT-1蛋白的表达，p-p38MAPK蛋白表达的上调早于GLT-1蛋白表达的上调；且p38MAPK的特异性抑制剂SB203580可抑制CIP诱导的脑缺血耐受及GLT-1表达上调。反义寡核苷酸（antisense Seliciclib制造商 oligodeoxynucleotides，AS-ODNs）是一类人工合成的、可与靶基因DNA或mRNA结合而抑制目的基因和蛋白表达的单链核苷酸片段。本实验通过应用p38MAPK AS-ODNs，观察其对CIP诱导的脑缺血耐受及GLT-1蛋白表达的影响，进一步探讨p38MAPK信号通路在CIP上调GLT-1表达诱导的脑缺血耐受中的作用。 1CIP诱导脑缺血耐受过程中p38MAPK的活化和GLT-1蛋白的表达上调 方法：40只健康雄性Wistar大鼠（280～300g），永久凝闭椎动脉，恢复2天后，随机分为以下4组：①sham组（n=10）：只暴露双侧颈总动脉，但不阻断其血流；②CIP组（n=10）：夹闭双侧颈总动脉3min作为CIP，之后恢复血流灌注；③脑缺血损伤（ischemic insult，II）组（n=10）：夹闭双侧颈总动脉8min作为损伤性脑缺血，之后恢复脑血流灌注；④CIP+II组（n=10）：夹闭双侧颈总动脉3min，恢复血流再灌注2天后，再次夹闭双侧颈总动脉8min。以上各组动物均在sham手术或末次脑缺血/再灌注后6h和2d（每个时间点n=5）断头取脑，分离海马CA1区，应用Western blot分析p-p38MAPK及GLT-1蛋白的表达。 结果： p-p38MAPK蛋白的表达在6h时间点sham组大鼠海马CA1区的p-p38MAPK蛋白有一定量的基础表达。与sham组相比，CIP组p-p38MAPK蛋白的表达明显升高（P＜0.05），为基础表达值的1.25倍；II组p-p38MAPK蛋白表达显著上升，为基础表达值1.64倍（P＜0.01），为CIP组的1.32倍（P＜0.05）。CIP+II组与II组相比，p-p38MAPK蛋白表达明显下降（P＜0.05），接近sham水平。2d时间点p-p38MAPK蛋白在各组表达的变化趋势均与6h时间点相类似。 GLT-1蛋白的表达在6h时间点，Sham组大鼠海马CA1区的GLT-1蛋白有一定量的基础表达。与sham组相比，CIP组GLT-1蛋白表达升高（P＜0.05），为基础表达的1.18倍；II组GLT-1蛋白的表达显著下调，是基础值的0.28倍（P＜0.01），是CIP组的0.24倍（P＜0.05）。CIP+II组与II组相比，GLT-1蛋白表达明显上升（P＜0.

05),AQP4的表达上调(P<0.05),缺血侧半球脑含水量升高(P<0.05),AQP4的表达下调(P<0.05),缺血侧半球脑含水量降低(P
目的探讨西罗莫司诱导K562细胞γ珠蛋白基因表达的作用机制。方法终浓度10

nmol·L-1西罗莫司处理K562细胞3 d,同时设立阳性药物(丁酸钠)对照、二甲基亚砜对照和空白对照。采用Western blot方法检测p38MAPK。采用基于Real time PCR的染色质免疫共沉淀方法分析γ珠蛋白基因启动子乙酰化组蛋白H3水平。结果经西罗莫司处理的K562细胞的磷酸化p38MAPK相对水平及γ珠蛋白基因启动子乙酰化组蛋白H3水平分别比空白对照细胞升高2.8和9.8倍、分别比二甲基亚砜处理组升高2.9和9.1倍,而与丁酸钠处理的细胞无显著性差别。SB203580预处理K562细胞可中止西罗莫司升高磷酸化p38MAPK及γ珠蛋白基因启动子乙酰化组蛋白H3的作用。结论西罗莫司诱导K562细胞γ珠蛋白基因表达的机制与其激活p38MAPK信号和上调启动子乙酰化组蛋白H3有关。
目的探讨拟胚体(EBs)培养密度对小鼠胚胎干细胞(ESCs)心肌细胞分化的影响。方法小鼠ESCs经过悬滴培养后形成EBs后,以高、低密度(120、60个EBs/60mm组织培养皿)贴壁培养,免疫荧光检测心肌特异性蛋白肌钙蛋白T(TnT)的表达。在不同时间点计算不同密度组搏动EBs百分比;RT-PCR检测Nkx2.5、GATA4、β-MHC及ANF基因表达水平;Western-blot检测TnT及p38表达水平。结果通过悬滴培养法形成的EBs能够出现自发性搏动并且有TnT表达。高密度培养组与低密度培养组相比具有更高的搏动EBs百分比,Nkx2.5、GATA4、β-MHC和ANF基因高表达水平,以及TnT蛋白高表达水平(P
p38通路是真核细胞转导细胞外信号到细胞内引起细胞反应的一类重要信号通路,它能够调控多种细胞内分子事件。p38是p38通路发挥生物学作用的末端激酶,它能够通过调控MyoD、Myf-5活性或表达、组蛋白修饰、染色体重塑、某些细胞分化相关mRNA的更替等方式影响肌肉分化进程。运动能够激活p38,p38可能通过NF-κB/IL-6/成肌调节因子(myogenic

AZD8931 Aurora B phosphorylation regulatory factor,MRF)及肌细胞专一增强因子2(muscle-specific enhancement factor2,MEF2)、过氧化物增殖物活化受体γ辅激活因子1α(peroxisome proliferator activated receptor γ coactivator-1α,PGC-1α)、葡萄糖转运蛋白4(glucose transporter 4,GLUT4)在运动介导的肌肉发生、线粒体发生、血糖摄取能力提高等几方面发挥作用。
目的研究表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对结肠癌细胞HT-29RECK基因甲基化及p38信号通路的影响。方法用50μMEGCG以及p38特异性抑制剂SB203580与培养的HT-29细胞孵育36h,甲基化特异性PCR(MSP)检测RECK甲基化情况,并用Western

blot检测p38的磷酸化改变。结果MSP结果显示EGCG、SB203580处理后,HT-29细胞内甲基化RECK基因有所减少,而非甲基化基因明显增多,同时EGCG能抑制HT-29细胞中p38的磷酸化水平。结论EGCG可能通过抑制p38磷酸化而逆转肿瘤细胞RECK甲基化。
目的探讨血管紧张素Ⅱ对内皮细胞肌动蛋白骨架的影响及其作用机制。方法血管紧张素Ⅱ(10-6mol/L)处理人脐静脉内皮细胞不同时间(0、5、15、30及60 MLN2238分子重量 min)。激光共聚焦显微镜下观察细胞纤维状肌动蛋白骨架的形态学变化。Western blotting检测丝裂原活化蛋白激酶磷酸化水平。结果正常组内皮细胞的纤维状肌动蛋白主要富集于细胞膜周边,分布均匀。血管紧张素Ⅱ处理组细胞膜周边的纤维状肌动蛋白消失,胞浆中出现密集的应力纤维,细胞间隙形成,且呈明显的时间依赖性。血管紧张素Ⅱ上调p38丝裂原活化蛋白激酶、c-Jun氨基末端激酶和热休克蛋白27的磷酸化水平,但对细胞外信号调节激酶无明显影响。p38丝裂原活化蛋白激酶特异性抑制剂SB203580阻断血管紧张素Ⅱ引起的纤维状肌动蛋白重排和细胞间隙形成。c-Jun氨基末端激酶特异性抑制剂SP600125则无明显作用。结论血管紧张素Ⅱ通过激活p38丝裂原活化蛋白激酶/热休克蛋白27信号通路引起内皮细胞的纤维状肌动蛋白重排,导致细胞骨架损伤。
目的:研究高浓度葡萄糖对体外培养的视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞增生以及活性氧(reactive oxygen species,ROS)生成的影响。方法:体外培养人RPE(ARPE-19),随机分成4组,即正常对照组用含5.

JNK通路介导软脂酸对Mcl-1的负向调节。 结论 本研究发现软脂酸诱导肝细胞凋亡过程中Mcl-1的蛋白水平显著下调,并进一步明确软脂酸诱导肝细胞凋亡主要是通过激活JNK通路、促进Mcl-1下调实现的,提示JNK/Mcl-1途径在软脂酸诱导的肝细胞脂性凋亡过程中具有重要作用。本研究为深入理解非酒精性脂肪肝发病机制提供新的线索,并为该病的治疗提供新的潜在靶点和策略。
肝纤维化(

hepatic fibrosis)是机体对慢性肝损伤的一种修复反应,是一种渐进的病理过程,是慢性肝病的共有病理变化,是多种类型细胞、氧化应激、细胞因子和生长因子等一系列复杂作用的结果。肝纤维化的特征改变是肝脏内细胞外基质( extracellu2larmatrix, ECM)的过度增生和异常沉积,如不加以及时治疗,将引起严重的肝纤维化并导致肝硬化,甚至引起肝功能衰竭。肝纤维化已成为一个危害人类生命健康的世界性问题,如果能阻止其发生,肝硬化及其并发症就能得到有效控制。近年来国内外研究认为,肝星状细胞(hepatic 也许 stellate cell,HSC)是肝纤维化时过量ECM的主要来源,激活的HSC大量增殖,发生表型改变并分泌更多的ECM沉积于肝脏,是肝纤维化形成的关键。目前从肝纤维化发生发展的不同环节入手研制了许多抗纤维化药物,但仍未有十分确定、特效的药物,因此,寻找理想的抗肝纤维化药物及有关肝纤维化发病机制的阐明,具有重要的理论和临床意义。 苦参素(oxymatrine,OM),又名氧化苦参碱,是苦参碱经氧化合成、纯化、提取而得到的有效单体,是苦参碱的N-氧化物,氧化苦参碱因具有特殊的氧结构,从而使分子极性大增,较苦参碱具有独特的作用机理和疗效。以往的研究证实苦参素具有调节免疫、抗炎和抗肿瘤等多种功效。近年又有研究表明,OM具有抗乙肝及防治肝纤维化的作用,引起关注。本实验采用四氯化碳诱导的大鼠肝纤维化模型,首先从整体水平考察了OM对大鼠肝纤维化的作用;进一步在体外从细胞和分子水平探讨OM抑制HSC增殖的分子机制,观察OM对TGF-β1刺激HSC-T6增殖的影响,探讨MAPK信号转导通路与TGF-β1/smads信号通路在TGF-β1刺激HSC-T6增殖中的作用及相互关系,以企探讨OM的作用机制。

那个 本研究内容包括以下两个部分 一. OM对CC14诱导的大鼠肝纤维化的保护作用 建立CC14诱导的大鼠肝纤维化模型,设立正常组、模型组、OM给药组(30mg?kg-1, 60mg?kg-1, 120mg?kg-1)、秋水仙碱阳性对照组(0.2 mg?kg-1)。结果显示,OM对CC14诱导的大鼠肝纤维化具有良好的保护作用。模型组HA,LN, CIV,PCIII等纤维化血清学标志物水平较正常组明显升高,给予OM(60mg?kg-1, 120mg?kg-1)后可使其显著降低。肝纤维化的另一个重要指标肝组织Hyp含量的检测结果显示,OM可显著降低模型组的Hyp值。组织病理学结果表明OM可明显的抑制肝纤维化程度,改善肝组织结构,减少胶原沉积。 模型组大鼠肝匀浆中SOD和GSH-Px酶活性显著下降,而MDA含量显著升高。给予(30mg?kg-1,

FDA approved Drug Library cell assay 60mg?kg-1, 120mg?kg-1)后可显著降低升高的MDA值,并显著升高SOD和GSH-Px活性。提示OM可缓解肝纤维化大鼠肝脏的氧化应激状态。 实验观察了OM对模型大鼠肝组织中α-SMA、TGF-β1、smad2、smad3、smad7mRNA的表达含量的影响,RT-PCR检测结果显示OM治疗后模型大鼠肝组织α-SMA、TGF-β1、smad2、smad3含量明显降低,smad7则有所上升。 在肝纤维化模型大鼠中,p38、JNK、ERK1/2磷酸化程度明显增加,给予OM可以有效降低肝纤维化大鼠p38、JNK、ERK1/2磷酸化的程度。 二探讨OM抗肝纤维化的分子机制 1苦参素对TGF -β1刺激的HSC-T6增殖的抑制作用 建立体外TGF-β1诱导的HSC-T6模型,OM在0.01,0.1,1,10,100mg·L-1浓度可抑制HSC-T6增殖,抑制率与OM浓度呈浓度依赖性。 2.苦参素对TGF -β1刺激的HSC-T6 p38MAPK信号通路的影响 Western blot检测结果显示,TGF -β1刺激HSC-T6可引起p38MAPK的迅速磷酸化,OM可显著抑制TGF -β1刺激的HSC-T6 p38MAPK的激活,明显降低p38磷酸化水平。提示抑制TGF-β1刺激的HSC-T6 p38MAPK磷酸化是OM抗肝纤维化的作用机制之一。 3.苦参素对TGF -β1刺激的HSC-T6 TGF–β1/smads信号通路的影响 Western blot检测结果显示,随TGF-β1刺激HSC-T6时间的递增,TβRI, smad2,Smad3蛋白表达递增,Smad7则有所降低。 OM可显著抑制TGF-β1刺激的HSC-T6 TβRI,smad2, Smad3蛋白的表达,上调Smad7的表达。提示抑制TGF–β1/smad通路是OM抗肝纤维化的作用机制之一。 4.

1的关系、K_(Ca)3.1与MCP-1之间的关系并探讨其信号转导通路。结果:100μmol/L PA上调体重指数(body mass index,BMI)位于20~27.9 kg/m~2的T2DM患者PBMCs K_(Ca)3.1的表达并促进其跨内皮迁移,对BMI≥28 kg/m~2的T2DM患者PBMCs无影响;K_(Ca)3.1特异性阻滞剂TRAM-34、NF-κB阻滞剂PDTC(100μmol/L)和Bay11-7082(10μmol/L)抑制PA诱导的BMI位于20~27.9 kg/m~2的T2DM患者PBMCs跨内皮迁移;TRAM-34和K_(Ca)3.1特异性si RNA显著减少PA(200μmol/L)诱导的THP-1细胞跨内皮迁移及THP-1细胞中MCP-1的分泌和表达,anti-TLR2/4(4 selleck mg/L)、p38MAPK抑制剂SB203580(10μmol/L)及SB202190(10μmol/L)、PDTC(100μmol/L)和Bay11-7082(10μmol/L)显著减少PA诱导的THP-1细胞中K_(Ca)3.1和MCP-1的表达。结论:PA通过TLR2/4-p38MAPK-NF-κB通路上调K_(Ca)3.1促进MCP-1的表达,进而诱导单核细胞的跨内皮迁移。
目的:研究Toll样受体4(TLR4)在脂多糖(LPS)诱导肾小管上皮细胞炎症反应中的作用及其可能的分子机制。方法:雄性SD大鼠8只,随机分为假手术组(Sham组)和盲肠结扎穿孔组(CLP组),各4只。CLP组大鼠采用盲肠结扎穿孔法建立脓毒血症动物模型,Sham组除不行盲肠结扎穿孔外,其余处理同脓毒血症组,造模后24h处死大鼠取肾组织。体外培养大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E),以1μg/ml

PF-477736临床试验 LPS刺激不同时间(5,15,30,60min),采用免疫荧光、Western blot法检测大鼠肾组织及肾小管上皮细胞TLR4的表达及分布,Western blot法检测细胞丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路(包含p38、JNK两条主要通路)及Iκ-B磷酸化情况。TLR4抑制剂TAK-242(5mol/L)及MAPK通路抑制剂SB202190(10μmol/L)、SP600125(25μmol/L)预处理NRK-52E后,分别检测TLR4蛋白表达、MAPK信号蛋白及I-κB磷酸化水平。结果:1免疫荧光结果显示TLR4主要表达在大鼠肾小管上皮细胞;正常肾小管上皮细胞TLR4主要分布于细胞质。2Western

blot结果显示随LPS刺激时间的增加,肾小管上皮细胞TLR4表达显著升高(P<0.05)。5SB202190、SP600125分别预处理NRK-52E细胞,均可显著降低LPS诱导的I-κB磷酸化(P
近年来对脂多糖（ＬＰＳ）介导细胞激活的信号转导过程已取得实质性进展。ＬＰＳ与血浆ＬＰＳ结合蛋白（ＬＢＰ）结合被运输到单核巨噬细胞表面，与ｍＣＤ１４受体结合引起细胞激活。ＭＡＰＫ参与了ＬＰＳ激活细胞产生肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）等活性物质的细胞内信号转导过程。ｐ３８ＭＡＰＫ对ＴＮＦα等细胞因子具有重要的调节作用。对ＬＰＳ激活细胞的信号转导研究可能为治疗内毒素休克提供新的理论和思路。
为探讨ｐ３８蛋白激酶在热损伤诱导单核细胞株Ｒａｗ 还有 ２６４．７凋亡中的调控作用．应用流式细胞检测术、透射电镜技术、ＤＮＡ 凝胶电泳、Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ、激酶活性测定检测ｐ３８蛋白激酶在热损伤诱导细胞凋亡中的作用．结果显示，热损伤后５ ｍ ｉｎ，ｐ３８即被激活，３０ ｍ ｉｎ 时达到最高水平，然后逐渐下降，２ ｈ 达基底水平；热损伤后３ ｈ 细胞凋亡率开始明显增高，ｐ３８蛋白激酶活性增高是细胞凋亡发生之前的事件；进一步观察了ｐ３８特异性抑制剂ＦＨＰＩ对细胞凋亡的影响，发现ＦＨＰＩ可以抑制热损伤诱导的细胞凋亡．上述结果提示，ｐ３８参与介导热损伤诱导的Ｒａｗ

２６４．７细胞凋亡．
目的探讨丝裂素活化蛋白激酶家系（ＭＡＰＫｓ）在大鼠心脏缺血预处理（ＩＰＣ）保护中的作用。方法在离体灌注的ＳＤ大鼠心脏缺血／再灌注（Ｉ／Ｒ）模型上，观察ＩＰＣ对于Ｉ／Ｒ后损伤的影响，并观察ＭＡＰＫｓ中三种激酶［细胞外信号调节激酶（ＥＲＫｓ）、蛋白激酶ｐ３８（ｐ３８）、应激活化蛋白激酶（ＳＡＰＫ）］活性的变化及其与保护作用的关系。结果ＩＰＣ明显改善大鼠Ｉ／Ｒ后的心脏功能，减少Ｉ／Ｒ造成的心肌肌酸激酶漏出及ＡＴＰ消耗。ＩＰＣ过程ＥＲＫｓ和ｐ３８激酶的活性分别较单纯Ｉ／Ｒ组高７３％（Ｐ＜００１）和６９％（Ｐ＞００１）；而心肌ＳＡＰＫ的活性无明显改变。预先给予酪氨酸激酶抑制剂ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ和ＥＲＫｓ抑制剂ＰＤ０９８０５９可分别消除ＩＰＣ的上述保护作用，而ｐ３８抑制剂ＳＢ２０２１９０对ＩＰＣ无明显影响。结论ＥＲＫｓ激酶参与了ＩＰＣ的心肌保护作用，而ｐ３８和ＳＡＰＫ未参与ＩＰＣ保护机制。
自噬(autophagy)是细胞利用溶酶体降解自身受损的细胞器和大分子物质的过程,在稳定细胞内环境中发挥着重要作用.研究发现,自噬影响血管功能,与血管疾病的病理生理进程密切相关.本文从自噬对血管功能的影响,与血管相关疾病(如动脉粥样硬化、腹主动脉瘤、肺动脉高压、糖尿病血管并发症等)的关系及药物对血管壁细胞自噬的调控进行综述,希望从自噬的角度来了解血管的功能和病变及一些疾病的发生发展进程,为治疗血管相关疾病提供新的思路.

4在HSC细胞中,三种MAPK抑制因子均可抑制Imp7表达及入核。三种抑制因子均可抑制Imp8表达,p38抑制因子可减少Imp8入核。提示,在HSC细胞中ERK、JNK通路对Smad2/3/4复合物的转位入核的调控可能与Imp7/Imp8的表达及Imp7的入核有关；而p38通路对Smad2/3/4复合物的转位入核的调控可能与Imp7/Imp8表达及入核有关。而在HepG2细胞中,三种MAPK抑制因子均可抑制Imp7入核,尤其是p38抑制因子。ERK抑制因子、JNK抑制因子可抑制Imp8入核,p38抑制因子对Imp8核浆分布无明显影响。提示,在HepG2细胞中,ERK、.JNK通路对Smad2/3/4复合物的转位入核的调控可能与Imp7/Imp8的入核有关；p38通路对Smad2/3/4复合物的转位入核的调控可能与Imp7的入核有关。 5.5ERK、JNK、P38抑制因子均能明显抑制HSC细胞内TGF-β1诱导的靶基因PAI-lmRNA的表达。提示,ERK、JNK、p38通路均参与HSC细胞内TGF-p1信号通路靶基因PAI-1转录活性的调控。ERK、JNK、P38抑制因子均能明显抑制HepG2内TGF-β1诱导的靶基因PAI-1mRNA的表达。提示,ERK、JNK、p38通路均参与HepG2内TGF-β1信号通路靶基因PAI-1转录活性的调控。

Selleckchem AUY922 总之,在HSC细胞内p38、ERK通路可能主要通过调控Smad3蛋白连接区的磷酸化及Smad2/3/4复合物的形成而影响靶基因PAI-1的转录,JNK通路主要通过调控Smad2/3/4复合物的转位入核影响靶基因PAI-1转录。而在HepG2细胞内p38通路可能主要通过调控Smad3蛋白连接区的磷酸化及Smad2/3/4复合物的形成而影响靶基因PAI-1的转录；ERK通路主要通过调控Smad2/3/4复合物的转位入核影响靶基因PAI-I转录；JNK通路可能通过调控Smad3蛋白连接区的磷酸化及Smad2/3/4复合物的形成及调控Smad2/3/4复合物的转位入核影响靶基因PAI-1转录。
摘要 第一章槟榔碱对原代培养口腔粘膜上皮细胞和成纤维细胞增殖、凋亡及DNA损伤作用的影响 目的：研究槟榔碱对原代培养口腔粘膜上皮细胞和成纤维细胞增殖、凋亡及DNA损伤作用的影响。 方法：体外培养、扩增口腔粘膜上皮和成纤维细胞,通过细胞形态学及角蛋白和波形丝蛋白免疫组织化学染色等鉴定细胞；MTT实验检测高浓度槟榔碱短时间干预及低浓度槟榔碱长时间作用对上皮细胞和成纤维细胞增殖的影响；流式细胞术分析槟榔碱干预对上皮细胞和成纤维细胞的细胞周期的影响；彗星实验检测槟榔碱对上皮细胞和成纤维细胞DNA损伤的影响。 结果：所培养的细胞具有典型的上皮细胞和成纤维细胞形态,角蛋白和波形丝蛋白染色阳性。高浓度(0.2mM-0.8mM)槟榔碱短期(0-72小时)作用于上皮细胞和成纤维细胞后,上皮细胞随槟榔碱浓度的增加及作用时间延长而活力下降,形态变化明显,差异具有统计学意义(P0.05)。在对细胞周期影响方面,0.8mmM槟榔碱干预48小时导致了上皮细胞位于G2/M期的比例相比对照组明显增加,差异具有统计学意义(P0.05)。0.6mM槟榔碱干预24小时可诱导上皮细胞出现凋亡,呈现剂量和时间的依赖性,差异具有统计学意义(P0.05)。低浓度槟榔碱显著抑制上皮细胞生长的条件是0.1mM作用12天后,差异具有统计学意义(P0.05)。各浓度槟榔碱作用成纤维细胞24小时后,成纤维细胞DNA损伤情况与对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05)；上皮细胞DNA损伤情况与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05),且与槟榔碱具有浓度依赖性。低浓度槟榔碱(0.1mM)长时间(24小时)处理口腔粘膜上皮细胞后,细胞继续培养24小时,MMP-2表达显著高于对照组,差异有统计学意义(P
酸敏感离子通道(acid-sensing

ion channels, ASICs)是一类由胞外酸激活的阳离子通道,开放的通道对Na+、Ca2+有通透性,进而引起细胞一系列生理病理变化。目前为止,已发现4个基因编码的7个ASICs亚基(ASIC1a、ASIC1b、ASIC1b2、ASIC2a、 FHPI制造商 ASIC2b、ASIC3、ASIC4),均属于DEG/ENaC家族成员。近年来ASICs研究备受关注,其不仅在神经系统中存在表达并发挥疼痛、感觉、神经传递等调节作用,还在非神经系统如肿瘤、炎症、缺血性损伤、胃肠道疾病中发挥作用,这些病理反应中共同的特点是局部组织环境酸化、pH值下降,诱发ASICs激活导致Na+、Ca2+内流,进而引起各种病理生理效应。本课题组前期研究发现SD大鼠关节软骨中存在ASIC1a、ASIC2、和ASIC3的表达,在佐剂性关节炎(Adjuvant Arthritis, AA)大鼠关节软骨中ASIC1a、 ASIC2a和ASIC3的表达均明显高于正常组,ASICs非特异性阻滞剂Amiloride、非甾体类抗炎药阿司匹林能明显抑制。ASICs表达,并对AA大鼠关节软骨具有保护作用。进一步考察ASICs在关节炎中作用机制发现,当大鼠关节炎症发生时,可造成局部关节酸化,ASICs表达增加和通道开放,Ca2+流入关节软骨细胞内,导致关节软骨细胞外基质(Extracellular

确认细节 matrix, ECM)代谢失衡引起关节软骨损伤。 肝纤维化(hepatic fibrosis, HF)是慢性肝病的共同病理过程,是形成肝硬化的中间阶段。目前研究认为,病毒感染和酒精的过量摄入导致肝脏炎症是肝纤维化形成的主因。当炎症刺激时,肝脏产生氧化应激和脂质过氧化损伤,酸性代谢产物增加,肝星状细胞(Hepatic stellate cells, HSCs)活化增殖,转化为肌样成纤维细胞,表达α-SMA,合成和分泌细胞外基质(extracellular matrix, ECM)增加,导致ECM的合成与降解失衡,致使过多的ECM在肝组织沉积形成纤维化。该病理进程与关节炎症类似,即同样存在炎症导致的局部酸化,同样引起ECM代谢的失衡,那么,肝脏是否存在ASICs的表达?当肝纤维化时肝组织的酸性代谢会否导致ASICs的表达增加和通道激活,进而发挥其病理生理学作用?为此,我们研究以下内容： LASICla在大鼠肝组织、肝星状细胞的表达 分离大鼠肝组织,RT-PCR检测.ASIC1a mRNA表达,发现大鼠肝组织中存在ASIC1a的表达,CC14诱导的肝纤维化模型大鼠ASIC1amRNA表达增加；采用ASIC1a, α-SMA免疫荧光双标染色模型组大鼠肝组织,发现大鼠肝组织ASIC1a与α-SMA染色区域高度重叠,提示ASIC1a主要表达与活化肝星状细胞。肝灌注分离正常组、模型组大鼠HSC细胞进行RT-PCR, Western blot发现,正常组HSCs存在ASIC1amRNA及其蛋白表达,模型组表达高于正常组。选择HSC-T6表型活化细胞株,用酸诱导HSC-T6体外模型(pH6.0),考察不同pH值环境下ASIC1a在HSC-T6的动态表达,研究发现,与pH7.4组相比,pH6.0酸诱导HSC-T6组ASIC1a表达增加。 2.

0软件进行统计学处理,p<0.001)；而与缺血再灌注组比较,缺血再灌注乌司他丁处理组大鼠脑组织TNF-α、P38、JNK的mRNA表达水平也显著降低(P
PPARγ是过氧化物酶体增殖物激活受体（peroxisome proliferator activedreceptors，PPARs)的一个亚型，作为影响骨代谢的侯选基因目前在基础和临床的相关研究较少，其人工合成配体噻唑烷二酮类药物(TZDs)作为糖尿病的治疗药物已广泛应用于临床。2006年糖尿病血糖控制的大型临床研究ADOPT研究首次正式报道TZDs对骨代谢的负面影响，表现为在绝经后女性糖尿病患者中引起骨量下降，具有引起或加重骨质疏松风险的可能，其具体机制仍待于研究。脂联素(Adiponectin,APN)是近年发现的由脂肪细胞分泌的一种特异性蛋白,具有抗炎、改善胰岛素抵抗状态、降糖、抗动脉粥样硬化及调节骨代谢的作用。目前对于脂联素在改善胰岛素抵抗等方面的研究已非常成熟，但在骨代谢里的影响机制的研究比较少，其在绝经后骨质疏松中所起的作用以及与PPAR-γ之间关系的研究在国外日渐增多，而国内尚未见报道。 YM155 目的：本研究首先通过观察TZDs类药物吡格列酮对去卵巢大鼠骨代谢变化、体脂变化及骨代谢相关指标的影响，探讨其与绝经后骨质疏松的关系及作用的可能机及其对去卵巢脂联素的影响，探讨脂联素的作用机制及其骨效应，为临床合理用药提供理论基础。

方法：选用144只健康雌性3月龄Wistar大鼠作为研究对象，分为去卵巢组及假手术组，两组各包括生理盐水组、吡格列酮4mg/kg.d、吡格列酮20mg/kg.d，共六组，对其进行灌胃给药，分别在0周、4周、8周、12周不同时间点各取6只大鼠进行各项指标的检测，用DPX双能X线骨密度扫描仪检测实验动物骨量的变化，脱钙骨片进行HE染色观察骨形态学变化，用血糖仪测定血糖，用放免法测定血胰岛素、血雌二醇及骨钙素的水平，用分光光度仪测定血脂、血钙、血磷，血碱磷酶变化，用RT-PCR检测PPARγ2水平，用酶联免疫法测定脂联素、骨髓上清液骨碱磷酶水平。 没有 结果：1去卵巢组大鼠与假手术组比较，体重、TG、CHO、LDL-C、血ALP、FNS、HOMA-IR、BGP、BALP、PPARγ2、APN均升高，E2、HDL-C、BMD下降，差异有统计学意义（P＜0.01）。

2不同浓度吡格列酮干预后假手术组和去卵巢组胰岛素、胰岛素抵抗指数、BMD、BGP、BALP呈剂量依赖性下降，而APN、PPARγ2呈剂量依赖性上升，组间比较差异均有统计学意义（P＜0.05）。去卵巢组TG、CHO、LDL-C、ALP呈剂量依赖性下降，组间比较差异有统计学意义（P＜0.05）。 3吡格列酮干预后假手术组吡格列酮4mg/kg.d组以及吡格列酮20mg/kg.d组的大鼠BGP、BALP、BMD随时间的变化下降，PPARγ2、脂联素上升，组间比较差异均有统计学意义（P＜0.01）。去卵巢组对照组大鼠BGP、BALP水平随时间的变化上升，吡格列酮4mg/kg.d组以及吡格列酮20mg/kg.d组的大鼠BGP、BALP水平均随时间的变化下降；对照组、吡格列酮4mg/kg.d以及20mg/kg.d组中的大鼠PPARγ2、APN水平随时间的变化上升，BMD随时间的变化下降，组间比较差异均有统计学意义（P＜0.01）。

Integrase 抑制剂 4脂联素与PPARγ2正相关（r = 0.718，P＜0.05），与BGP、BALP呈正相关（r = 0.339，r =0.595；P＜0.05），而与BMD呈负相关（r = -0.946，P＜0.05）。 5骨形态学变化：假手术组椎骨骨小梁结构正常，与其相比，去卵巢组椎骨骨小梁变细、排列稀疏、部分断裂，骨小梁周围的成骨和破骨细胞增生活跃。吡格列酮干预后，假手术组与去卵巢组的骨小梁均有不同程度的破坏，但去卵巢组更为明显。 结论：1.吡格列酮激活PPARγ2转录活性上调PPARγ2表达，降低成骨细胞标志基因BGP、BALP的水平，并呈时间依赖性和剂量依赖性的降低BMD,证实了其对骨代谢的不利影响。 2.吡格列酮以时间依赖性和剂量依赖性促进APN的分泌，且APN水平与BMD呈负相关，提示了APN水平的变化可能参与了TZDs类药物在绝经后患者应用引起骨量下降的发生和发展过程。
壳聚糖（Chitosan）是甲壳质的脱乙酰基产物，是天然多糖中唯一的阳离子多糖，具有多种特殊的物理化学性质和生物活性。研究证明壳聚糖能够增强机体免疫力，如激活免疫细胞；然而近年来更多研究发现壳聚糖在伤口愈合，气管炎等炎症性疾病的治疗中起着重要的作用，表明壳聚糖亦能弱化炎症处激活的免疫细胞。 本论文参考Cooper的方法建立了结肠炎模型建立：32只小鼠(雌雄各半)随机分成A、B、C、D四组，每组小鼠(雌雄各半)自由饮用5%的DSS溶液7天，后换为正常自来水，自第一天起分别用双蒸水、5mg/mL、10 mg/mL、15mg/mL的水溶性壳聚糖每只小鼠灌胃0.