22±12.3ng/dl(n=3),雌激素浓度0.05)。FSH组睾酮水平和基础培养基组未见明显统计学差异(p>0.05)，在这三组中均未检测到雌激素水平的改变。结论：通过本实验的分离和培养方法可以得到大量贴壁生长的卵泡膜间质细胞，其中很少有颗粒细胞的混杂，此方法可以快速、高效的进行小鼠卵泡膜间质细胞的分离培养。
目的：探讨快速眼动睡眠剥夺（REMSD）对小鼠海马tau蛋白磷酸化、磷酸化p38MAPK及GSK3β的影响。 方法：将32只8周龄SPF级雄性健康昆明小鼠随机分为对照组、REMSD24h、REMSD48h及REMSD72h组。对照组置于普通笼中饲养，REMSD组置于SD箱中饲养，各组在开始实验前先让小鼠熟悉环境3d。在实验后，迅速颈椎脱臼处死小鼠，取出脑组织经固定、脱水及包埋之后做成石蜡切片，用HE染色法观察各组小鼠海马形态结构的变化。利用免疫组织法观察总tau蛋白（T-tau）、磷酸化tau蛋白（p-tau）、磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶（p-p38MAPK）及糖原合成激酶-3β（GSK3β）在小鼠海马组织的表达情况，并用Image-Proplus6.0图像分析软件测定平均光密度值（OD值）来反映各项指标表达的变化。

结果：HE染色显示在光镜下对照组海马内神经元均匀分布，形态规则，排列致密、整齐，细胞核结构清楚，核内染色质清晰可见，呈蓝色；REMSD组中，剥夺睡眠24h后海马内神经元结构即发生改变，细胞排列欠整齐，REMSD72h组细胞结构损伤较明显，细胞排列疏松，部分细胞呈萎缩状，胞浆呈嗜酸变性，细胞核结构不清，染色质颗粒欠清晰，部分神经元胞浆减少、细胞核固缩浓染。免疫组化结果显示，无论对照组或是REMSD组，T-tau平均OD值均无明显差异。对照组、REMSD24h、48h及72h组小鼠海马p-tau平均光密度（OD值）分别为0.1040.007、0.1560.027、0.1800.030和0.1880.032（P＜0.05），REMSD各组均高于对照组，差异有统计学意义；p-p38MAPK平均OD值分别为0.1690.028、0.2090.020、0.2390.017和0.2660.035（P＜0.05），REMSD各组均高于对照组，且随着时间的延长平均OD值也增加；GSK3β平均OD值分别为0.0840.009、0.0900.008、0.1030.011与0.1170.013（P＜0.05），REMSD48h及72h组均高于对照组与REMSD24h组，同时72h组高于48h组，而REMSD24h组与对照组之间差异无统计学意义。

selleck激酶抑制剂 或者 结论：REM睡眠剥夺可以引起tau蛋白磷酸化水平的增高，其中可能有p38MAPK与GSK3β的参与。
目的探讨在乙酸诱导的急性内脏痛模型中,小鼠前扣带回皮质(ACC)内磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)表达的时空变化及可能作用。 方法本研究采用正常的成年雌性昆明小鼠作为研究对象。实验组小鼠腹腔注射0.6%的乙酸(10ml/kg)建立急性内脏痛模型,对照组小鼠腹腔注射等量生理盐水。实验以腹壁收缩次数为指标观察动物的内脏痛反应。采用免疫组织化学和Western Blot检测小鼠ACC内p-ERK1/2表达的时程变化,免疫荧光双标法检测p-ERK1/2在GABA能神经元的表达情况。为了探讨ERK1/2的活化对乙酸诱导的小鼠内脏疼痛及痛相关的焦虑样行为的影响,在注射乙酸30分钟前皮下给予小鼠MEK的抑制剂SL327(30mg/kg)抑制ERK1/2的磷酸化,然后检测小鼠的痛反应及痛相关的焦虑样行为。

结果腹腔注射乙酸后小鼠前扣带回皮质区p-ERK1/2呈双相性增高表达：腹腔注射0.6%的乙酸后1小时内小鼠的腹壁收缩次数明显高于对照组(p0.05),但在乙酸注射1hr时小鼠ACC内p-ERK1/2的表达又有明显增强,与对照组相比阳性细胞数明显增多(p0.05)。同时,Western selleck抑制剂 Blot结果还显示小鼠ACC内总ERK1/2在各时间点的表达实验组与对照组相比没有明显的差异(p>0.05)。 注射乙酸10mmin时小鼠前扣带回皮质内p-ERK1/2与GAD没有明显的共表达：免疫组织化学和Western Blot结果均显示在乙酸注射10min时小鼠ACC内p-ERK1/2的表达达到峰值,为了检测此时ACC内p-ERK1/2在何种细胞类型中表达,我们采用免疫荧光双标法检测了p-ERK1/2与GAD67(GABA能神经元标记物)的共表达情况。结果发现ACC内p-ERK1/2与GAD67没有明显的共存。 皮下注射MEK的抑制剂SL327不能有效减轻乙酸诱导的小鼠内脏疼痛反应,但能有效缓解小鼠痛相关的焦虑样行为：小鼠皮下给予SL327(30mg/kg)或同剂量的DMSO (SL327的溶剂),30分钟后再向两组小鼠腹腔给予0.6%的乙酸。免疫组织化学结果显示乙酸注射10min时实验组(SL327组)小鼠ACC内p-ERK1/2的免疫阳性细胞数与对照组(DMSO组)相比明显减少(p0.05)；高架十字迷宫结果显示乙酸注射2小时后SL327组小鼠在开放臂停留的时间百分比明显高于对照组,差异具有显著性(p<0.

05)。STAT3mRNA表达活性也受到显著抑制(p<0.05),但STAT1mRNA并未出现显著抑制效应。T-2毒素诱导IL-6基因表达在12h出现了显著的抑制p
背景：人参皂苷Rh2是中国传统中药人参中的主要活性成分，具有优异的免疫调节、抗炎、抗疲劳、抗肿瘤等药理作用。然而因其难溶于水,限制了体外实验中可应用的最大浓度，人参皂苷Rh2的生物活性在实际应用和生产研究中受到严重的制约。为了提高Rh2的水溶性和生物活性，本室制备了人参皂苷Rh2的硫酸化修饰产物Rh2-B1和Rh2-B2。两种衍生物的水溶性都获得大幅提高。在本论文中，我们研究了Rh2-B1对细胞毒性T细胞系CTLL-2细胞的作用，细胞毒性T细胞因其能够保护机体免受病毒感染而成为近年来研究的热点，此外，我们还探讨了Rh2影响CTLL-2细胞增殖和发挥免疫功能的分子机制。

目标：我们的目标是调查Rh2-B1对干扰素-（γInterferon-γ, IFN-γ）的分泌和细胞增殖的影响，并研究其可能的机制。 FDA-approved Drug Library 材料与方法：酶联免疫吸附实验（Enzyme Linked ImmunosorbentAssay,ELISA）被用于检测IFN-γ在全血培养上清和CTLL-2细胞培养上清液中的浓度。噻唑蓝染色法（MTT Cell Proliferation Assay，MTT）被用来检测CTLL-2细胞的增殖情况。蛋白免疫印迹试验（Western blot）被用来评价CTLL-2细胞中信号转导通路相关蛋白表达量及其活化程度的变化。 结果：我们的研究证明，Rh2-B1能够显著提高Balb/c小鼠全血培养上清中IFN-γ的水平。在此之后，我们评估了Rh2-B1对CTLL-2这种细胞毒性T细胞的增殖、IFN-γ的分泌情况的影响，并研究了其作用机制。Rh2-B1刺激了CTLL-2细胞的增殖和IFN-γ的分泌，还能够介导丝裂原活化蛋白激酶p38（p38mitogen-activated 点击此处 protein kinase，p38MAPK）和胞外信号调节激酶（extracellular regulated proteinkinases，ERK）的表达和活化，但对淋巴细胞特异性蛋白酪氨酸激酶（Lymphocyte-specific protein tyrosine kinase,Lck or p56Lck）和信号转导及转录激活因子（Signal transducers and activators oftranscription5，STAT5）的表达呈现抑制作用。这种作用能够被特异性的p38MAPK抑制剂SB203580和特异性ERK抑制剂U0126阻断。 结论：Rh2-B1能够通过激活p38MAPK和ERK依赖的信号通路进而刺激细胞毒性T细胞的增殖和IFN-γ的分泌。这可能成为一种新的病毒感染治疗潜在药物。
凋亡对于胚胎发育具有至关重要的作用，细胞增殖和凋亡的共同作用才雕塑出了面部复杂精细的结构。各种原因导致的凋亡改变，会干扰两侧腭突和原始腭的融合，从而引起腭裂的发生。研究证明骨形成蛋白（bone

morphogenetic protein (BMP))通过调节凋亡，能够导致上颌骨和腭骨的缺损，进而引起腭裂的发生；而其上游基因GATA-6作为与胚胎发育密切相关的转录调节因子，能引起多个胚层来源的器官发育异常。GATA-6等位基因完全被敲除的杂合子动物无法存活，而胚胎干细胞小体（embryonic stem cell–derived embryoid 或者 bodies (EBs))能够准确模拟胚胎发育早期的情况，因此是研究GATA-6与腭裂等胚胎发育异常导致的先天性畸形相关性的理想模型。 GATA蛋白家族，作为一组锌指翻译因子，对于细胞分化和胚胎器官发育具有非常重要的作用。在小鼠体内敲除GATA-6会阻碍内胚层的分化，并且引起外胚层的凋亡。之前的实验观察到，敲除GATA-6的EB内出现大量的凋亡，并且其内胚层的分化会受到影响。本实验发现，将正常的内胚层细胞的移植到突变的胚胎干细胞小体能够完全阻止细胞凋亡，并恢复外胚层极化和成腔。laminin能够诱导基底膜细胞在突变胚胎干细胞小体上组装；而laminin

γ1被敲除的内胚层细胞移植到突变胚胎干细胞小体上，由于不分泌三聚体层粘连蛋白，就不会形成基底膜，只能部分抑制凋亡。这些现象说明内胚层细胞来源的基底膜和非基底膜因素都对于GATA-6依赖的细胞存活具有重要的作用。 我们的微阵列分析显示在EB分化的过程中，BMP-2、IGF-2、TGF-β和VEGF-A的表达增加，而BMP-4，FGF-4，PDGF-A，PDGF-C和VEGF-C的表达减少。为了确定这些生长因子的表达在GATA-6被敲除的胚胎干细胞内是否发生了改变，我们采用了逆转录PCR（RT-PCR）和免疫印迹的方法对2天的EB进行分析，发现GATA-6被敲除后，BMP-4和IGF-2的mRNA表达明显减少，而FGF-4的mRNA表达不变。重要的是，BMP-2的mRNA在2天正常的EB内已经能检测到，然而在GATA-6被敲除的EB内则检测不到。为了证明各种生长因子对EB凋亡的影响，我们在1天的GATA-6-/-的EB内，使用分别使用浓度为0.1μg/ml的BMP-2, FGF-4, EGF, IGF-2,PDGF和TGF-β1分别作用24小时，并且与对照组相比，然后使用全量免疫染色，通过检测cleaved caspase-3对凋亡进行分析。结果显示凋亡广泛的出现在GATA-6-/-的EB的周围细胞内，而BMP-2的加入明显抑制了caspase-3的激活， FGF-4, EGF和PDGF则没有效果。将BMP-2的浓度增加到0.

p.)和21α-MMD(5mg/kg和20mg/kg,i.p.)均可降低LPS诱导的小鼠血浆NO的生成。结果提示4-methoxyhonokiol和21α-MMD均具有体内抗炎活性。 许多 体内NO和PGE_2的产生有赖于细胞诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxidesynthase,iNOS)及环氧化酶(cyclooxygenase,COX)-2的表达或酶活性,过量NO和PGE_2的产生与慢性炎症和癌症过程密切相关,因此,通过抑制iNOS和COX-2的表达或活性,有效控制活化的巨噬细胞产生过多的NO和PGE_2可降低炎症疾病和癌症的发生。在LPS诱导的小鼠RAW 264.7巨噬细胞体外炎症模型中,1～30μM的4-methoxyhonokiol和21α-MMD均能浓度依赖性地降低LPS诱导的NO和前列腺素E_2(prostaglandin E2,PGE_2)的生成,同时对iNOS、COX-2蛋白和mRNA的表达均有抑制作用。此结果证明,4-methoxyhonokiol和21α-MMD对LPS所诱导的NO和PGE_2生成的抑制作用是通过下调iNOS和COX-2蛋白质和mRNA的表达而实现的,并且此调节作用发生于基因转录水平。iNOS与COX-2皆受NF-κB的调控,为了阐明此抑制作用的分子机制,我们利用碱性磷酸酶报告基因测定法和免疫印迹法分别检测了4-methoxyhonokiol、21α-MMD和21β-MMD对LPS诱导的NF-κB转录活性以及IκB-α的磷酸化和降解的影响,结果显示,三个化合物均能显著抑制LPS诱导的NF-κB转录活性,并且此作用是通过抑制IκB-α的磷酸化和降解而实现的。

可能 丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPKs)的磷酸化在巨噬细胞产生NO和促炎细胞因子的过程中起着关键的作用。因此,为了进一步探讨参与4-methoxyhonokiol、21α-MMD和21β-MMD抑制NO产生的作用通路,我们检测了这些化合物对LPS诱导的MAPKs磷酸化的影响。结果显示,4-methoxyhonokiol、21α-MMD和21β-MMD皆对LPS诱导的c-Jun氨基末端激酶(c-Jun

N-terminal kinase,JNK)和p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,p38 MAPK)的磷酸化有不同程度的抑制作用,但对细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinases 1/2,ERK1/2)却没有影响。这些结果提示,除了对NF-κB转录活性的抑制外,抑制JNK和p38 MAPK的磷酸化可能是4-methoxyhonokiol、21α-MMD和21β-MMD下调iNOS的表达从而抑制NO产生的另外一个作用机制。 综上所述,本文首次证明了厚朴提取化合物4-methoxyhonokiol和枳实提取化合物21α-MMD均具有体内外抗炎活性,提示4-methoxyhonokiol和21(α,β)-methylmelianodiol分别是厚朴和枳实中的重要抗炎成分。该研究为厚朴和枳实作为抗炎中药的运用提供了重要的药理学基础。
土槿皮乙酸(PAB)是从松科植物金钱松的根皮中分离的二萜酸,具有抗肿瘤、抗生育等作用。本文对土槿皮乙酸体外抗肿瘤活性进行了较为系统的研究,主要阐述了土槿皮乙酸在两种肿瘤细胞:人乳腺癌MCF-7细胞和鼠成纤维肉瘤L929细胞中抑制细胞生长的机制。

在人乳腺癌MCF-7细胞中,土槿皮乙酸诱导凋亡,自噬,衰老及M期周期阻滞。土槿皮乙酸在36和48h的IC_(50)分别是3.4和1.35μM。4μM土槿皮乙酸处理36h,MCF-7细胞DNA出现片段化,凋亡小体增加。其凋亡通路主要是土槿皮乙酸激活蛋白酪氨酸激酶(PTKs),PTKs激活JNK并抑制ERK的活化,进而诱导MCF-7细胞凋亡。但MCF-7细胞的凋亡与Fas死亡受体途径无关。在土槿皮乙酸诱导凋亡的过程中,有一部分细胞因为自噬而逃逸凋亡机制,最终成为衰老的细胞。这部分细胞在4μM土槿皮乙酸作用36h时,MDC染色阳性,Beclin Gefitinib分子重量 1表达上调,LC3Ⅰ转变为LC3Ⅱ(自噬)。而在4μM土槿皮乙酸处理3d,去药培养5d的时候存活细胞变大变扁平,SA-β-galactosidase染色为蓝色(衰老)。在研究细胞周期阻滞的过程中,4μM土槿皮乙酸在36h时显著上调细胞核内的cyclinB1和cdc2而诱导M期细胞周期阻滞。同时土槿皮乙酸上调p21和p53的表达,说明p21和p53有可能参与M期周期阻滞和凋亡。而M期周期阻滞有可能与自噬,凋亡和衰老相关。 在鼠成纤维肉瘤L929细胞中,土槿皮乙酸不诱导凋亡,但诱导自噬,衰老和M期周期阻滞。80μM土槿皮乙酸在36h的抑制率是65.37±4.

7细胞中P38MAPK表达的影响,从中探讨当归补血汤及当归黄芪提取部位组合物抗动脉粥样硬化作用的信号转导调控机制。 实验方法: 1.制备当归补血汤煎液及当归黄芪提取部位,并将提取部位相互配比排列组合分组后制备成含药血清。 2.制备氧化低密度脂蛋白。 3.细胞常规培养;台盼蓝染色法检测细胞活力;用MTT法测细胞生长曲线及检测不同浓度对照血清、含药血清对RAW264.7细胞的存活率的影响。 4.免疫印记法检测当归补血汤及当归黄芪提取部位组合物对氧化低密度脂蛋白激活RAW264.7细胞中P38MAPK表达的影响。 为什么 实验结果: 1.运用血清药理学方法将当归补血汤煎液及当归黄芪提取部位组合物制备成含药血清。 2.将冻存的细胞株复苏后,细胞常规培养。台盼蓝染色法检测细胞活力＞95%,可用于实验。用MTT法测细胞生长曲线,选取传代后细胞培养至第四天待细胞生长稳定进行后续实验,每组均选取同样生长条件的细胞从而减少细胞本身的组间差异。兔血清本身对于细胞细胞有一定的营养作用能促进细胞生长,实验中应该尽量减少血清本身对细胞的影响,高浓度的兔血清对细胞生长不利,故选取10%兔血清浓度进行后续实验。

3.免疫印记检测结果显示: P38MAPK蛋白免疫印记检测结果显示:Ox-LDL组蛋白条带光密度比值为5.3167±0.16169,与空白对照组比较差异有意义(P＜0.05),说明Ox-LDL刺激RAW264.7细胞能够明显激活P38MAPK信号转导通路,增强P38MAPK的蛋白活性;抑制剂组与空白对照组比较差异有意义,说明抑制剂SB203580对P38MAPK蛋白活性有抑制作用。当归补血汤和当归黄芪提取部位组合物A组、B组与空白对照组比较差异有意义,说明当归补血汤和当归黄芪提取部位组合物有抑制P38MAPK蛋白活性作用:与Ox-LDL组比较有差异,说明当归补血汤与当归黄芪提取部位组合物A组、B组能下调P38MAPK蛋白活性;与抑制剂比较有差异,说明抑制剂较当归补血汤与当归黄芪提取部位组合物组下调P38MAPK蛋白活性作用强。当归补血汤与当归黄芪提取部位组合物A组、B组比较无统计学意义(P＞0.05),说明当归补血汤及当归黄芪提取部位组合物在P38MAPK蛋白的表达中无差异。 Selleckchem LY294002 磷酸化P38MAPK蛋白免疫印记检测结果显示:Ox-LDL组蛋白条带光密度比值为5.3767±0.36638,与空白对照组比较差异有显著性意义,说明Ox-LDL刺激RAW264.7细胞能够明显激活P38MAPK信号转导通路,增强磷酸化P38MAPK的蛋白活性;抑制剂SB203580组(1.7233±0.11015)与空白对照组比较差异显著,说明SB203580对磷酸化P38MAPK的蛋白活性有明显的抑制作用。当归补血汤和当归黄芪提取部位组合物A组、B组与空白对照组比较差异有意义,说明当归补血汤和当归黄芪提取部位组合物有抑制磷酸化P38MAPK蛋白活性作用;当归补血汤组(2.8567±0.34559)和当归黄芪提取部位组合物A组、B组与Ox-LDL组比较有差异(P＜0.05),说明当归补血汤与当归黄芪提取部位组合物能下调磷酸化P38MAPK蛋白活性:与抑制剂比较有差异,说明抑制剂较当归补血汤与当归黄芪提取部位组合物组下调磷酸化P38MAPK蛋白活性作用强。当归补血汤组与当归黄芪提取部位组合物A组、B组比较有差异(P＜0.05),说明当归补血汤及当归黄芪提取部位组合物各组均能下调磷酸化P38MAPK的蛋白活性,当归补血汤的作用较当归黄芪提取部位组合物A组、B组明显。当归黄芪提取部位组合物A组与B组之间比较差异无意义(P＞0.05),说明当归黄芪提取部位组合物下调磷酸化P38MAPK的蛋白活性无差别。

实验结论: 100μg/ml的Ox-LDL刺激RAW264.7细胞15min后,可明显激活RAW264.7细胞内的P38MAPK信号转导通路,增强P38MAPK总蛋白和磷酸化P38MAPK的蛋白活性;P38MAPK抑制剂SB203580对P38MAPK的活化有明显的抑制作用;当归补血汤及当归黄芪提取部位组合物能够抑制P38MAPK蛋白的表达,对磷酸化P38MAPK的活化有一定程度的抑制作用;其中当归补血汤的抑制作用较当归黄芪提取部位组合物明显。本实验证实了当归补血汤可以通过下调P38MAPK的活性从而阻断该通路的级联作用来减轻动脉粥样硬化炎症反应。所以,当归补血汤及当归黄芪提取部位组合物可能通过下调P38MAPK信号转导通路以调控相关致炎因子的表达进而影响动脉粥样硬化的发生发展,阻断P38MAPK信号转导通路可能是当归补血汤及当归黄芪提取部位组合物抗动脉粥样硬化损伤的机制之一。
目的:探讨P38

而且 MAPK在顺铂化疗和热疗诱导肝癌细胞凋亡的机制,以及对正常肝细胞的影响,为临床应用提供实验依据。 方法:通过体外培养正常肝细胞HL-7702、癌旁肝硬化肝细胞QSG-7701和肝癌细胞QGY-7703,应用免疫组织细胞化学、MTT、激光扫描共聚焦显微镜、Western Blot、流式细胞仪和TUNEL法等方法观察顺铂和热诱导对其凋亡的影响,然后加入P38 MAPK的特异性抑制剂SB203580,再观察顺铂和热诱导对细胞凋亡情况的变化。 结果:P38 MAPK表达从正常肝细胞、癌旁肝硬化肝细胞到肝癌细胞逐渐增高。P38 MAPK的特异性抑制剂SB203580可以使细胞的凋亡率降低。3株培养细胞加顺铂后凋亡率均明显增加,存活率明显下降,加用P38 MAPK的特异性抑制剂SB203580后,可使细胞凋亡率下降。3株培养细胞对于顺铂的反应性不同,肝癌细胞最敏感,凋亡率和坏死率最高。热诱导可以使3株培养细胞发生凋亡,其中肝癌细胞最敏感,引起凋亡和坏死的细胞最多。 结论1顺铂诱导细胞凋亡有P38 MAPK通路的参与。 2热诱导可以引起细胞凋亡,这过程中有P38 MAPK通路的参与。 3癌旁肝硬化肝细胞的生物学特性与正常肝细胞和肝癌细胞都不同,属于正处在转化过程中的癌前期细胞,值得进一步研究。
目的探讨甲羟戊酸(Mev)对人系膜细胞(HMC)增殖及丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号通路的影响及其机制。 方法本研究采用常规体外培养HMC:①随机分为两组,对照组,Mev组。Mev组设1nmol/L、10nmol/L、100nmol/L、1μmol/L、10μmol/L、100μmol/L、1mmol/L 7个浓度段。对促增生最明显的Mev组,分别于12、24、48h检测Mev对HMC的增殖程度。通过MTT法测定Mev对10%胎牛血清刺激的HMC增殖的影响。②随机分为四组,对照组、Mev组、Mev+SB203580组和SB203580组。以酶联免疫吸附法(ELISA)检测Mev刺激后MAPK通路下游TGF-β的表达。以Westernblot法检测Bax和Bcl-2及p38的表达。 结果①Mev对HMC增殖有促进作用,且作用呈一定的浓度依赖性和时间依赖性。②Mev组与对照组相比,TGF-β的表达增高(P＜0.

43%,与对照比较有统计学意义;IgM的阳性率2.86%;与对照比较,无统计学意义。②ICVD患者CPn DNA的阳性率为81.08%,显著高于对照组。③当血浆标本按1:500稀释后,仍可检测到CPn0308的抗体。当用结合GST-CPn 0308的凝胶微粒(Beads)预吸附可中断反应,而用GST-CPn0186 Beads预吸附则不能中断反应,说明反应的特异性。 购买GW3965 结论:①ICVD患者CPn IgG的阳性率明显升高。②ICVD患者PBMC中CPnDNA阳性率显著升高;检出率高于EIA法,是一种敏感的检测CPn感染的检测方法。③初步分析显示CPn0308在感染人群中具有一定的免疫原性。
肝脏缺血再灌注损伤是肝脏移植中常见的问题之一,缺血再灌注引起的肝脏损伤是一个连续不断的过程,并最终导致肝细胞损伤。这个过程是在肝脏短暂缺氧并再氧合时触发,临床上许多情况下可发生肝脏缺血再灌注,例如肝脏低灌流状态,各种各样的外科手术操作,以及移植中的供体器官切取。实际上肝脏缺血再灌注损伤是抗原成分获取的结果,是影响肝脏移植结果的重要因素,引起10%左右的早期移植后器官功能衰竭,并且急性和慢性排异的发生率较高。此外,由于边缘性供体对于缺血再灌注损伤非常敏感,这加剧了供体器官的短缺。因此减少缺血再灌注损伤能明显增加获得手术成功的病人数量。然而,到目前为止仍没有可以预防缺血再灌注损伤的有效方法。所以,为了保护细胞和器官的功能,需要通过广泛的研究更好的了解肝脏缺血再灌注损伤的机制以及寻找合适的干预方法必要的。

AZD6244细胞系 青藤碱是从防己科防己属植物青风藤Sinomenium acutum Rehd.et Wils.根茎中分离出的主要活性成分,其结构类似于吗啡,分子式为C_(19)H_(23)NO_4,分子量为329.38,具有镇痛,抗炎等作用,临床主要用于类风湿病的治疗,疗效确切。国内外的研究表明,青藤碱具有良好的抗炎、免疫抑制作用。但是在缺血再灌注损伤中的作用却未见报道。本课题应用“二袖套”法建立大鼠原位肝移植模型,研究青藤碱在肝脏缺血再灌注损伤中的保护作用,并对其作用机制进行探讨。 第一部分:青藤碱对大鼠原位肝移植缺血再灌注损伤的保护作用 目的:探讨青藤碱对大鼠原位肝移植缺血再灌注损伤的保护作用。方法:应用SD大鼠为模型动物;采用Kamada’s“二袖套法”建立SD→SD大鼠原位肝移植模型,大鼠196只随机分为假手术组、生理盐水对照组、低剂量(40mg/kg)和高剂量青藤碱治疗组(80mg/kg),将供肝在4℃林格液中保存5h后植入受体,分别观察移植术后1周存活率,检测移植术后2,6,12,24h血清ALT、AST,TUNEL法检测肝细胞凋亡指数(AI),RT-PCR检测肝脏组织中的TNF-α、IL-β、ICAM-1mRNA的含量,ELISA检测血清IL-2含量,并观察移植肝脏病理形态学的改变。结果:与对照组比较,青藤碱低剂量、高剂量治疗组术后1周存活率显著提高(75%,75%vs12.5%,P＜0.01),在各个时间点,青藤碱治疗组的ALT、AST水平明显低于生理盐水对照组(P＜0.01),肝组织中的TNF-α、IL-1β、ICAM-1mRNA表达与对照组相比均显著减少(P＜0.01),肝细胞凋亡指数下降,在肝移植术后24小时,生理盐水对照组的AI为37.0±4.30,而在青藤碱两治疗组分别为23.8±3.27、18.6±3.03,与对照组相比有显著差异(P＜0.01)。血清IL-2含量降低,肝细胞和肝窦内皮细胞形态也明显改善。

结论:青藤碱可以通过抑制Kupffer细胞激活及释放TNF-α、IL-1β等炎症性细胞因子及ICAM-1等粘附分子,抑制肝细胞凋亡,减少细胞免疫相关IL-2的分泌,减轻肝细胞及肝窦内皮细胞的损伤,达到保护肝移植缺血再灌注损伤的效果。 Ceritinib供应商 第二部分青藤碱对大鼠肝移植缺血再灌注后TLR4、MAPKs和NF-κB表达的影响 目的:通过观察不同剂量的青藤碱对大鼠肝移植术后TLR4、MAPKs和NF-κB的影响,探讨青藤碱保护大鼠肝移植缺血再灌注损伤的机制。方法:应用“二袖套法”建立SD→SD大鼠原位肝移植模型,大鼠196只随机分为假手术组、对照组、低剂量(40mg/kg)和高剂量青藤碱治疗组(80mg/kg),将供肝在4℃林格液中保存5h后植入受体,选择缺血再灌注后大鼠肝功能损伤最严重的术后6小时为观察点。采用Western Blot方法检测大鼠肝脏组织的TLR4、磷酸化JNK、ERK、p38 MAPK和NF-κB蛋白表达的变化情况。结果:在假手术组TLR4呈低表达,生理盐水对照组TLR4呈高表达,青藤碱显著降低了肝组织TLR4的表达(P＜0.01)。磷酸化JNK、ERK在各组的表达比较无明显差异。磷酸化p38 MAPK和NF-κB在假手术组呈低表达,在生理盐水对照组高表达,而青藤碱明显抑制了磷酸化p38 MAPK和NF-κB的表达(P＜0.

7巨噬细胞和人源性的THP-1细胞作为研究对象,运用分子生物学技术,如酶联免疫吸附实验(ELISA)、蛋白免疫印迹实验(Western blot)、放射性同位素标记等方法,观察姜黄素对Ox-LDL刺激下巨噬细胞分泌MCP-1和逆胆固醇转运的影响,并探讨其可能的相关机制,进一步揭示姜黄素在心血管药理学方面的分子机制,为姜黄素在心血管疾病治疗上的应用提供理论依据。 研究方法 第一部分姜黄素对Ox-LDL诱导巨噬细胞MCP-1分泌的影响及相关信号通路的研究 1、药物毒性试验 实验分组：1)正常对照组,2)姜黄素5μM组,3)姜黄素10μM组,4)姜黄素20μM组,5)姜黄素40μM组,6)姜黄素80μM组；按分组给予刺激后,于细胞培养箱中干预24h,采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)检测细胞生存活性,目的是排除在实验范围内引起细胞因子分泌水平减少是由于药物引起细胞数量减少所致的可能性,同时寻找合适的药物刺激浓度范围。 2、Ox-LDL对Raw264.7巨噬细胞及THP-1巨噬细胞MCP-1分泌的影响

1、浓度效应：实验分组：1)正常对照组,2) Ox-LDL (10μg/ml)组,3)Ox-LDL (20μg/ml)组,4) Ox-LDL (40μg/ml)组,5) Ox-LDL (80μg/ml)组,干预24h； 2、时间效应：实验分组：1)0h对照组,2)6h刺激组,3)12h刺激组,4)24h刺激组,均以80μg/ml Ox-LDL干预： 通过ELISA方法检测细胞培养基中MCP-1的浓度。 3、姜黄素对Ox-LDL诱导Raw264.7巨噬细胞及THP-1巨噬细胞MCP-1分泌的影响 实验分组：1)正常对照组,2) Ox-LDL (80μg/ml)组,3) Ivacaftor分子重量 Ox-LDL (80μg/ml)+姜黄素(5μM)组,4) Ox-LDL (80μg/ml)+姜黄素(10μM)组,5)Ox-LDL (80μg/ml)＋姜黄素(20μM)组,6) Ox-LDL (80μg/ml)+姜黄素(40μM)组。

通过ELISA方法检测细胞培养基中MCP-1浓度。 4、不同促分裂原活化蛋白激酶MAPK (Mitogen activated protein kinase, MAPK)信号通路(p38MAPK, JNK,ERK1/2)抑制剂及核转录因子-κB(NF-κB)通路抑制剂对Ox-LDL诱导Raw264.7巨噬细胞MCP-1分泌的影响 实验分组：1)正常对照组,2) Ox-LDL (80μg/ml)组,2) Ox-LDL (80μg/ml)+SB203580(p38抑制剂)组,3) Ox-LDL (80μg/ml)+SP600125(JNK抑制剂)组,4)Ox-LDL 有 (80μg/ml)+PD98059(ERK1/2抑制剂)组,5) Ox-LDL (80μg/ml)+BAY11-7082(NF-κB抑制剂)组。 通过ELISA方法对Raw264.7细胞培养基MCP-1进行检测,通过此实验确定OxLDL诱导细胞分泌MCP-1可能被介导的信号通路,为下一步实验提供参考。 5、JNK抑制剂(SP600125)对Ox-LDL诱导Raw264.7巨噬细胞JNK磷酸化的影响 实验分组：1)正常对照组,2) Ox-LDL (80μg/ml)组,3) Ox-LDL (80μg/ml)+SP600126组。 通过Western blot检测JNK通路磷酸化水平。 6.NF-κB抑制剂(BAY11-7082)对Ox-LDL诱导Raw264.7巨噬细胞核内NF-κBp65表达的影响 实验分组：1)正常对照组,2) Ox-LDL (80μg/ml)组,3) Ox-LDL (80μg/ml)+BAY11-7082组。 提取核蛋白,通过Western blot检测核内NF-κB p65蛋白水平。 7、姜黄素对Ox-LDL诱导Raw264.7巨噬细胞JNK磷酸化和核内NF-κB 那个 p65的影响 实验分组：1)正常对照组,2) Ox-LDL (80μg/ml)组,3) Ox-LDL (80μg/ml)+姜黄素(5μM)组,4) Ox-LDL (80μg/ml)+姜黄素(10μM)组,5) Ox-LDL (80μg/ml)＋姜黄素,6) Ox-LDL (80μg/ml)+姜黄素(40μM)。 分别提取细胞蛋白及核蛋白,通过Western blot检测JNK通路磷酸化和核内NF-κB p65蛋白水平。 第二部分姜黄素对Ox-LDL诱导下巨噬细胞逆胆固醇转运的影响及相关机制探讨 1、姜黄素对Ox-LDL诱导下Raw264.7细胞及THP-1巨噬细胞中胆固醇流出率的影响

实验分组：1)对照组,2)姜黄素(5μM)组,3)姜黄素(10μM)组,4)姜黄素(20μM)组,5)姜黄素(40μM)组； 通过放射性同位素标记法来检测各组样品的胆固醇流出率。 2、姜黄素对Ox-LDL诱导下Raw264.7巨噬细胞胆固醇转运相关蛋白表达的影响 实验分组:1)对照组,2)姜黄素(5μM)组,3)姜黄素(10μM)组,4)姜黄素(20μM)组,5)姜黄素(40μM)组； 提取蛋白,通过Western blot检测脂质转运相关蛋白表达情况。 3. MAPK通路抑制剂及NF-κB抑制剂对Ox-LDL诱导下Raw264.7巨噬细胞胆固醇流出率的影响 实验分组:1)对照组,2)SB203580(p38抑制剂)组,3)SP600125(JNK抑制剂)组,4)PD98059(ERK1/2抑制剂)组,5) BAY11-7082(NF-κB抑制剂)组； 通过放射性同位素标记法来检测细胞样品的胆固醇流出率。 4、JNK抑制剂对Ox-LDL诱导下Raw264.7巨噬细胞胆固醇转运相关蛋白表达的影响 实验分组：1)对照组,2)SP600125(10μM)组,3) SP600125(20μM)组； 按分组行不同刺激后,提取细胞蛋白,通过Western blot检测脂质转运相关蛋白表达情况。 研究结果 第一部分姜黄素对Ox-LDL诱导巨噬细胞MCP-1分泌的影响及相关信号通路的研究 1、姜黄素在0-80μM浓度范围内对巨噬细胞生存活性的影响 用不同浓度姜黄素(0,5,10,20,40,80μM)刺激Raw264.

A high frequency of hotspot mutations known as E542K,E545K and H1047R in the PIK3CA gene…
BACKG ROUD:ZSTK474[2-(2-difluoromethylbenzimidazol-1-yl)-4,6-dimorpholino-1,3,5-triazine]is a novel PI3K inhibitor which has potent anti-tumor effects.In addition,emerging evidence suggests ZSTK474may have anti-inflammatory and immunomodulatory properties

as well.Although its molecular mechanisms…
目的:利用荧光素酶报告基因系统,确定人p55PIK基因启动子全长序列和启动子核心序列;利用生物信息学技术,分析并预测人p55PIK基因启动子核心序列中可能影响转录活性的顺式作用元件;利用定点突变技术,观察上述DNA位点对p55PIK的转录活性的影响,明确哪些位点及相应转录因子在p55PIK的转录调节中起重要作用。 方法:以从正常人基因组DNA作为模板,用聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)法扩增基因组DNA人p55PIK基因5’端非编码区DNA不同长度片段,分别克隆到pGL3-Basic荧光素酶报告基因载体得到(-651/+45)-p55PIK、(-839/+45)-p55PIK、(-1064/+45) selleck化学药品 -p55PIK、(-1243/+45)-p55PIK和(-1633/+45)-p55PIK;在HepG2、Hela细胞中,利用荧光素酶报告基因法检测各片段DNA序列的报告基因活性,确定人p55PIK基因启动子活性最强的全长序列和活性变化最大的启动子核心序列;利用生物信息学方法,分析这一启动子核心序列并预测可能与之结合的转录因子和相应的顺式作用元件;利用定点突变技术结合荧光素酶报告基因检测技术,明确哪些位点及相应转录因子对p55PIK转录活性其重要作用。

点击此处 结果:构建得到p55PIK基因上游调控区不同长度片段的荧光素酶报告基因载体(-651/+45)-p55PIK、(-839/+45)-p55PIK、(-1064/+45) -p55PIK、(-1243/+45)-p55PIK和(-1633/+45)-p55PIK,酶切及测序鉴定分子量及序列正确;观察各质粒的相对荧光素酶活性,HepG2中(-1243/+45)-p55PIK的相对荧光素酶活性分别为4.90±0.21, selleck激酶抑制剂 p0.05) 结论:人p55PIK基因的启动子全长片段位于(-1243/+45),其核心片段位于(-1243/-840);其中若干DNA位点可能与MZF1、YY1、RUNX1、ADR1、IRF1、Delta E、p300等转录因子结合并调节p55PIK基因的转录;位于p55PIK基因的启动子(-900/-896)的“TGGGGA”位点可能与MZF1蛋白结合显著影响p55PIK基因启动子的转录水平。 目的:阐明MZF1在p55PIK转录调控中的作用及其机制,并观察该作用对肿瘤细胞增殖的影响。 方法:我们利用染色质免疫共沉淀法验证了MZF1蛋白与p55PIK启动子(-900/-896)位点的TGGGGA序列DNA之间的结合,阐明MZF1对p55PIK的转录调控作用的具体机制。我们分别在肿瘤细胞系中高表达、低表达了MZF1蛋白。用荧光素酶报告基因系统、荧光定量PCR法和Western

Blot免疫印迹法分别检测了p55PIK基因的转录水平、mRNA水平和蛋白表达水平的变化,阐明p55PIK是否受MZF1的转录调控;利用BrdU掺入法检测了细胞DNA合成能力,利用Ki67法检测了细胞增殖相关抗原的表达,p55PIK接受MZF1蛋白的转录调控对肿瘤细胞增殖的影响。在该作用的临床意义方面,我们利用荧光定量PCR法,检测了10例结直肠癌患者的肿瘤标本和正常组织标本中的MZF1和p55PIK的mRNA水平,分析了二者的表达的变化及相关性,阐明p55PIK表达与MZF1的表达的相关性,以及p55PIK在结直肠肿瘤发生发展中的作用及意义。 结果: MZF1 Antibody组和Input组均有明显的条带,而阴性对照IgG组则无明显条带。GFP-MZF1质粒组的p55PIK全长相对荧光素酶活性显著高于GFP空质粒组(P<0.01),MZF1-SiRNA组的p55PIK全长相对荧光素酶活性较SiRNA组显著降低(P<0.01),MZF1-SiRNA组的p55PIK的mRNA水平显著低于(SW480中P<0.01,LOVO中P<0.05)。GFP-MZF1质粒组DNA合成能力显著高于GFP空质粒组(P<0.01),MZF1-SiRNA组组DNA合成能力显著低于SiRNA组(SW480中P<0.01,LOVO中P<0.01),MZF1-SiRNA组Ki67荧光强度显著低于SiRNA组(P<0.

1、Zscan4d、Mu ERV-L和e IF-1A等ZGA标志基因m RNA的表达水平。5.收集KM小鼠1细胞胚,分别置于KSOM和含API-2(2μM)的KSOM培养液中培养,获取体外发育的2-细胞胚,运用Real-Time PCR技术检测干细胞因子Oct4和Sox2的m RNA表达水平。结果:1.p-Ser473-Akt和pan-Akt存在于小鼠植入前胚的1-细胞至4-细胞阶段。作为Akt主要的活性形式,p-Ser473-Akt在小鼠1-细胞胚至4-细胞胚内定位存在动态变化,其在1-细胞胚和2-细胞胚期间核内出现的时间与ZGA发生的时相(minor 而且 ZGA和major ZGA)基本一致。pan-Akt主要分布在胞质里,在不同发育阶段的细胞中其表达和定位没有发生明显的改变;2.Akt特异性抑制剂API-2和MK2206对小鼠1-细胞胚的体外发育具有明显的抑制作用,呈剂量依赖性。一定浓度的API-2(2.0μM)和MK2206(30μM)均可使体外培养的1-细胞胚出现“2-细胞阻滞”现象;3.2.0μM API-2和30μM MK2206阻滞的2-细胞胚内,p-Ser473-Akt在细胞核内的表达发生了明显的下调,而pan-Akt的定位与表达并没有产生明显的变化;4.2.0μM API-2诱导阻滞的2-细胞胚内,Mu ERV-L和e IF-1A的m RNA水平明显低于KSOM对照组(P0.05)。5.2.0μM API-2诱导阻滞的2-细胞胚内,干细胞因子Oct4的m RNA水平明显低于KSOM对照组(P0.05)。结论:Akt主要活性形式p-Ser473-Akt在小鼠1-细胞胚至4-细胞胚内定位存在动态变化,其在1-细胞胚和2-细胞胚期间核内出现的时间与ZGA发生的时相(minor

ZGA和major ZGA)基本一致,提示p-Ser473-Akt可能参与ZGA过程。Akt特异性抑制剂API-2和MK2206对小鼠1-细胞胚的体外发育具有明显的抑制作用,一定浓度的API-2(2.0μM)和MK2206(30μM)均可使体外培养的1-细胞胚出现“2-细胞阻滞”现象,同时,也使2-细胞胚核内p-Ser473-Akt表达水平下降。且一定浓度的API-2(2.0μM)使2-细胞胚内ZGA标志基因Mu Pifithrinα ERV-L和e IF-1A,以及干细胞因子Oct4的m RNA水平明显下调。这些结果进一步证实,Akt特异性抑制剂诱导产生的“2-细胞阻滞”,以及ZGA启动失败和干细胞因子Oct4表达下调与其降低核内p-Ser473-Akt表达水平有关。
背景与目的：1-磷酸鞘氨醇(sphingosine-1-phosphate, S1P)作为一种信号鞘磷脂，绝大多数与高密度脂蛋白(high-density lipoprotein, HDL)结合，并介导HDL诸多生物功能如抗动脉粥样硬化、抗血栓和保护血管内皮等。S1P通过其5个受体(S1PR1~S1PR5)激活细胞内复杂的信号转导通路实现生物功能多样化。其中S1PR1/3在细胞增殖、血管发生和重建、神经形成、免疫细胞迁移、炎症反应、内皮细胞屏障功能等方面发挥重要作用，但有关S1PR1/3对巨噬细胞内胆固醇代谢的影响未见报道。因此，本论文主要探讨S1P通过S1PR1/3对THP-1源性巨噬细胞胆固醇流出的调控作用及其信号机制，为全面了解S1P的抗动脉粥样硬化机制提供新的理论基础。 方法：1.佛波酯(Phorbol-12-myristate-13-acetate, PMA)诱导THP-1单核细胞24h后，选择不同时间和浓度的S1P进行处理，人胆固醇Elisa试剂盒检测细胞培养液中胆固醇含量。2.分别用VPC23019(S1PR1/3抑制剂，10μM)和JTE-013(S1PR2抑制剂，10μM)孵育THP-1源性巨噬细胞12h，然后加BODIPY-Cholesterol孵育过夜，激光共聚焦显微镜下观察胆固醇分布、定位和含量变化，同时用油红O染色显示细胞内脂质蓄积情况。3. VPC23019(10μM)处理THP-1源性巨噬细胞4h后，WesternBlot检测PI3K-Akt信号通路及NF-κB(P65)的蛋白活性，VPC23019(10μM)处理THP-1源性巨噬细胞24h后，Western Blot检测LXR及其下游基因ABCA1和ABCG1蛋白表达水平。4.分别以LY-294002和MK2206阻断P13K-Akt信号通路后，采用Western

Blot检测ABCA1的蛋白表达水平，RT-PCR检测ABCA1和ABCG1的mRNA表达水平，BODIPY-Cholesterol荧光探针结合荧光显微镜，观察THP-1源性巨噬细胞内胆固醇含量，荧光分光光度计检测培养液中胆固醇浓度和胆固醇外流情况。 哪里 结果：1.1μM S1P处理THP-1源性巨噬细胞24h，培养液中胆固醇含量达到最高。 2. THP-1源性巨噬细胞胆固醇大部分选择性定位于细胞胞膜上，S1P可降低THP-1源性巨噬细胞内胆固醇含量。3.与对照组相比，S1PR1/3抑制剂VPC23019下调THP-1源性巨噬细胞PI3K-Akt信号通路活性，并增加NF-κB (P65)蛋白活性，降低LXR、ABCA1和ABCG1的蛋白表达水平。4.分别用S1PR1/3抑制剂、PI3K抑制剂和Akt抑制剂阻断S1PR1/3-PI3K-Akt信号通路后，ABCA1和ABCG1的蛋白及mRNA表达水平下降，THP-1源性巨噬细胞内胆固醇含量增加，胆固醇外流减少。 结论: 1.S1P促进THP-1源性巨噬细胞胆固醇流出。 2.S1PR1/3-PI3K-Akt信号转导通路参与S1P对THP-1源性巨噬细胞胆固醇流出的调控作用。
随着分子生物学的研究发展，肿瘤的发病机制的认识逐渐深入，从过去的单一因素研究上升到多因素致病理论。研究肿瘤细胞增殖过程和细胞信号通路机理与药物的关系，为抗肿瘤药物研究开辟新的道路。具有潜在抗肿瘤活性的苯并咪唑及三联吡啶衍生物已大量进行研究，本论文以此为配体，合成了两个系列的钌配合物，通过对其进行抗肿瘤活性的筛选及细胞凋亡机制研究，结果表明抗肿瘤活性高且毒副作用较小的硝基苯并三联吡啶钌配合物可作为继续进行研究的潜在抗肿瘤药物。其主要结果如下： 设计并合成了两个系列钌配合物，其中包括八个苯并三联吡啶衍生物钌配合物和六个苯并咪唑吡啶类钌配合物，通过ICP-AES、ESI-MS、1HNMR、IR等方法对所合成的配合物进行表征，其结果与预期一致，表明所合成的配合物为目标产物。 选择多种肿瘤细胞株和正常细胞株，通过检测细胞存活的方法对所合成的配合物进行抗肿瘤活性筛选，结果表明所合成的配合物对所选癌细胞株都明显具有抑制生长作用，对正常细胞毒性较小；配合物的抗肿瘤活性并不完全同配体的共轭π键大小成正比；在配体上引入基团会影响其抗肿瘤活性；硝基的引入极大提高了配合物的抗肿瘤活性，抗肿瘤活性同顺铂相当的硝基苯并三联吡啶钌配合物抑制A375恶性黑色素瘤细胞的IC50值为16.9μM，硝基苯并咪唑吡啶钌配合物抑制Nerua-2a神经胶质瘤细胞的IC50值为5.

临床病例分析:观察原发性肝细胞肝癌患者中吸烟以及PDCD4表达情况的关系。由于影响肝细胞肝癌发病的因素很复杂,为了去除比较极端的因素,本研究制定了入选标准:1)男性;2)年龄＞30岁;3)HBsAg阳性;4)术前通过影像学检查除外肺转移及其他肝外转移;5)经历肝细胞肝癌手术切除治疗,术中确定剩余肝脏无肿瘤残余;6)术后病理证实为肝细胞肝癌,且标本切缘无肿瘤残余。严格准入条件以尽量减少可能的干扰因素。收集患者手术切除的肿瘤组织标本及癌旁无肿瘤细胞的正常组织标本,应用免疫组织化学法和western

blotting法检测肿瘤组织中及癌旁正常组织中PDCD4的表达情况。通过问诊确定患者吸烟情况,明确患者每天吸烟平均支数,以及吸烟总年数,换算成每年吸烟的包数(按照每包20支烟计算),同时综合考虑患者病情确诊时的年龄,手术中发现的肿瘤的大小,数目,门静脉及肝静脉侵袭情况,肝内胆管侵袭情况,肝脏总体情况,以及肿瘤组织的分化情况。组织在数据搜集后被编码,然后通过SPSS11.5统计学软件对结果进行曼-惠特尼U检验和菲希尔精确度检验,并以P＜0.05确认存在显著性差异。 2.培养正常人类肝细胞L02,肝癌细胞HepG2,应用针对人PDCD4的特异性抗体,通过western blot法及免疫细胞化学法检测在这二种细胞中PDCD4的表达情况的区别。根据以往研究提供的方法制备香烟提取物,简单来说,就是将两支不带过滤装置的香烟连接一个改良过的注射器,使燃烧产生的烟雾通过50ml不含血清的DMEM培养液,通过测定pH值来确定终止点,在pH值达到7.4的时候终止。然后通过孔径0.20μm滤膜除去细菌和杂质。应用5%浓度的CSE作用于人肝细胞L02不同时间,四氮唑蓝法(MTT)检测细胞活性增殖性改变情况,RT-PCR检测PDCD4基因改变情况。然后分别应用不同浓度(1%,5%,10%)的CSE作用于L02细胞4个小时,并应用5%CSE分别刺激L02细胞不同时间(1h,4h,16h,24h),通过western

因为 blot法检测观察PDCD4蛋白水平改变情况。通过使用新蛋白翻译抑制剂放线菌酮,结合应用5%CSE刺激L02细胞4小时,观察CSE对PDCD4蛋白的作用是发生在翻译阶段还是翻译后阶段。分别应用相关通路特异性阻断剂:PKC阻断剂Ro31-8425,MEK-ERK阻断剂PD98059,PI3K阻断剂LY294002,p38MAPK阻断剂SB203580,JNK阻断剂SP600125预处理细胞,然后应用5%CSE刺激L02细胞4小时,收集细胞提取蛋白通过western blot测定PDCD4蛋白含量改变情况,以观察上述通路在CSE对PDCD4作用过程中起的作用。 结果: 1.临床病例分析结果发现,在分析的68名男性并且不伴转移的原发性肝细胞肝癌患者中,吸烟组和不吸烟组的肿瘤组织中PDCD4表达无明显差异(P＞0.05)。但是在癌旁正常组织的比较中,吸烟组PDCD4的表达明显低于不吸烟组(P＜0.05).分别对吸烟组和不吸烟组的肿瘤组织和癌旁组织中PDCD4含量进行比较,发现在这两组中,肿瘤组织中PDCD4的含量较之癌旁正常组织中的均有所降低,不吸烟组的肿瘤组织和癌旁组织中PDCD4的差别更加显著(P＜0.01).对于其他相关因素比较,我们发现吸烟组的平均发病年龄比不吸烟组低,而不吸烟组患者的肝脏一般情况较差,二组在肝内门静脉,肝静脉及肝内胆管的侵及程度上没有显著性差异。

点击此处 已经 2.通过对正常肝细胞L02及肝癌细胞HepG2中PDCD4含量的比较,我们发现肝癌细胞中PDCD4蛋白含量较正常肝细胞减少,这一区别具有显著性差异(P＜0.05)。应用5%浓度的CSE作用于人肝细胞L02不同时间,MTT检测结果发现对细胞活性并无明显影响,RT-PCR结果显示PDCD4的mRNA的表达在CSE刺激下并无明显改变。通过不同浓度CSE的刺激和同一浓度不同时间的刺激,我们发现CSE刺激可以减少PDCD4蛋白水平,并且这一作用呈现一定的剂量和时间依赖性。通过结合应用新蛋白翻译抑制剂放线菌酮和5%浓度的CSE,我们发现同时应用这两者的情况下PDCD4蛋白水平随时间变化减少的更加迅速(P＜0.05),这说明CSE对PDCD4的作用可能是发生在翻译后。通过应用特异性通路阻断剂:PKC阻断剂Ro31-8425,MEK-ERK阻断剂PD98059,PI3K阻断剂LY294002,p38 MAPK阻断剂SB203580,JNK阻断剂SP600125预处理细胞,然后应用5%CSE刺激L02细胞4小时,通过western blot检测PDCD4表达情况,我们发现Ro31-8425,PD98059,LY294002均可明显改变CSE减少PDCD4含量的作用,而SB203580,SP600125没有明显作用。 结论: 1.原发性肝细胞肝癌中存在PDCD4含量减少的情况。吸烟与不吸烟者肿瘤组织中PDCD4含量没有明显差异,提示PDCD4作为肿瘤抑制物减少到一个临界点后发生了肝癌,之后可能由于某种反馈调节机制不再继续减少;吸烟者癌旁组织中PDCD4减少更加明显,提示吸烟肝癌患者预后较之不吸烟者可能更差。 2.

72%；弓形虫代谢物作用组的BV-2细胞分泌炎症因子，其中培养上清中IL-1β、IL-6、TNF-α、NO的含量、BV-2细胞IL-1β、IL-6、TNF-α、iNOS mRNA的表达以及iNOS蛋白的表达均随着培养时间的延长和弓形虫速殖子与BV-2细胞比例的提高逐渐增加，米诺环素能抑制上述炎症因子的产生。 结论我国流行的弓形虫Chinese1基因型TgCtwh6成囊株的代谢物作用的BV-2细胞能分泌IL-1β、IL-6、TNF-α等炎症因子，其在对抗弓形虫的过程中可能发挥一定的作用，但是对神经元细胞也有一定的损伤；米诺环素可以抑制炎症因子的产生，提示该药对弓形虫脑病具有潜在的治疗价值。但是弓形虫TgCtwh6诱导小胶质细胞分泌炎症因子以及米诺环素抑制的机制尚待进一步研究。
背景：动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)是一种与血脂异常及血管壁成分改变有关的动脉疾病。关于AS的发病机制有很多学说，目前认识比较多的是脂质浸润学说、血栓形成学说、血管内皮损伤学说。迄今为止的研究表明，内皮功能紊乱和炎症反应在AS的起始和发展中起着极为重要的作用。越来越多的学者认同上述观点，认为血管内皮细胞的损伤是发生动脉粥样硬化的始动因素，而粥样斑块的形成是动脉对内膜损伤反应的结果。血管内皮细胞有调节血管张力、血管通透性、抗血栓形成及分泌多种活性物质等重要生理功能。当血管内皮细胞受某些因素如：高血压、高血脂、血液中血管紧张素Ⅱ、肾上腺素、去甲肾上腺素、缓激肽的增高，血氧饱和度降低等刺激均可使血管内皮损伤，诱导表达多种粘附因子，促进白细胞的趋化和向内皮下基质的游走、黏附，促进AS的发生发展。导致AS的各种危险因素可激活一些信号通道蛋白和炎症因子最终损伤动脉内膜，其中氧化型低密度脂蛋白（oxidation

MG-132核磁共振 type low density lipoprotein，ox-LDL）是最重要的致动脉粥样硬化因子，是损伤内皮细胞和平滑肌细胞的主要因子。 传统观念认为，肾素-血管紧张素系统(Renin-Angiotensin-System，RAS)在心血管系统的调节中起着极为重要的作用，其中血管紧张素Ⅱ（angiotensin Ⅱ, AngⅡ）是其主要的效应分子。近年来，陆续发现了RAS一些重要的新成员，包括血管紧张素转化酶(angiotensin converting enzyme，ACE)2、血管紧张素1-7（Ang1-7)、Ang1-7受体Mas、肾素、肾素前体及其前体受体等。肾素前体是肾素的非活性酶原形式，肾脏是体内肾素前体的主要来源，但并不是唯一来源，可能存在其它组织释放肾素前体。近年来，有研究表明肾素（前体）可不依赖于传统的肾素血管紧张素原激活生成AngⅡ途径发挥生物学作用，肾素（前体）受体［(pro)renin selleck化学药品液面控制 receptor,(P)RR］的发现，解释了肾素（前体）的这种不依赖AngⅡ激活细胞内信号转导通路，上调某些基因表达的作用。有研究表明，ox-LDL与AngⅡ有协同促动脉粥样硬化作用，ox-LDL能够上调血管紧张素转化酶基因表达，AngⅡ生成增多，同时增强AngⅡ缩血管作用。ox-LDL参与动脉粥样硬化的发生发展，肾素前体通过受体依赖机制在心血管及肾脏疾病中起着重要作用，关于ox-LDL对肾素前体表达及其分泌量的影响，目前尚无相关研究报道。

目的： 观察ox-LDL刺激人脐静脉内皮细胞（Human selleck screening library Umbiliacal Vein EndothelialCells，HUVECs）对肾素前体表达及其分泌量的影响。 方法：1．体外培养HUVECs。 2．以100ug/mlox-LDL刺激HUVECs，分别于5min、15min、30min、60min、120min时收集内皮细胞总RNA，用RT-PCR检测肾素前体mRNA表达。 3.分别以25ug/ml、50ug/ml、100ug/ml、150ug/ml不同浓度的ox-LDL刺激HUVECs15min，收集内皮细胞总RNA，以RT-PCR检测肾素前体mRNA表达。 4．100ug/mlox-LDL刺激HUVECs，分别于5min、15min、30min、60min、120min时收集各组等量的细胞上清液，用ELISA方法观察细胞上清液中肾素前体分泌量。 结果：1.获得生长良好的HUVECs。 2．100ug/ml ox-LDL刺激HUVECs能够使其肾素前体mRNA表达增多，最早出现于作用后5min,15min时肾素前体mRNA表达最多，30min、60min、120min时较15min逐渐减少。 3.分别以25ug/ml、50ug/ml、100ug/ml、150ug/ml浓度的ox-LDL刺激HUVECs15min，25ug/ml、50ug/ml时肾素前体mRNA表达逐渐增多，100ug/ml时表达最多，150ug/ml表达较100ug/ml减少。 4.