969;Co MSIA:q2=0.765,r2=0.938)。3D-QSAR模型三维等值图揭示了一些结构特性与抑制活性的关系,为该类药物结构改造提供了有效信息,可减少设计合成工作量,提高新药研发成功的可能性。
~~
The striatum is the main input structure of the basal ganglia and is involved in voluntary motor control,habit learning and reward processing.Medium spiny neurons(MSNs)comprise80%and 95%of striatal neurons in primates and rodents,respectively,while the remaining

population is made up of
肝脏疾病正逐渐成为全球棘手的医疗问题。肝细胞是肝脏生理活动的主要承担者,在肝脏疾病的研究以及药物的研发和测试方面有着举足轻重的作用。然而,体外分离培养的原代肝细胞面临在体外不能无限增殖和稳定表达肝脏特异基因等问题。有强大的自我更新能力和三胚层分化潜能的诱导性多能肝细胞(i PSCs)能被诱导因子、外源基因和小分子化合物等定向诱导分化为功能性肝细胞。同时,还避免了伦理、宗教以及免疫排斥等诸多问题。本文简要综述了从不同策略诱导i HDAC抑制剂 PSCs成为功能性肝细胞的研究方法和成果,并对该领域进行小结和展望。
关节软骨位于骨骼末端,主要起承重、减震和润滑关节的作用。由于缺乏血运,关节软骨损伤后难以自行修复。关节软骨损伤为临床常见疾病,目前尚无理想的方法促进其修复和再生,而以种子细胞、支架材料和细胞生长因子为基础的组织工程技术为关节软骨修复开辟了新道路。诱导多能干细胞(i selleck化学药品 PSC)作为软骨组织工程全新的种子细胞,与其他种子细胞相比,在软骨细胞移植及体外软骨组织和器官再造方面具有更广阔的应用前景。随着对i PSC的重编程机制、诱导方法、定向软骨分化条件以及临床应用安全性等研究的不断深入,其应用于临床的脚步将越来越近。
Epithelial-mesenchymal transition(EMT),mesenchymal-epithelial transition(MET),and even the sequential EMT-MET can be observed during multiple cell fate conversions including cancer progression and embryonic development.In the current review,we first focused on the existence and beneficial roles of the sequential EMT-MET during three typical cell fate conversions,differentiation from pluripotent stem cells(PSCs)to neurons,de-differentiation

from mouse embryonic fibroblasts(MEFs)to PSCs,and trans-differentiation from MEFs to neurons.We tried to provide some preliminary hypotheses to connect EMT-MET and cell fate conversions,like the possible contributions of the intermediate mesenchymal state to iPSCs generation and neurontrans-differentiation.The intermediate mesenchymal state during sequential EMT-MET was further discussed by exploring the conserved signatures on gene expression during a variety of EMT.Discussion on the interaction among vitamin C,DNA methylation,and EMT/MET was also provided.
目的:研究从人皮肤真皮组织中分离培养的成纤维样细胞向中胚层细胞分化的潜能,初步探讨其替代自体骨髓间充质干细胞(BMSCs)用于组织损伤和缺损修复的可行性。方法:将一定大小的成人腹部全层皮肤组织分别用分散酶和Ⅰ型胶原酶消化,分离获得真皮来源总细胞。单层培养扩增的细胞在含有一定浓度N2、B27、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和表皮细胞生长因子(EGF)的无血清培养液中进行悬浮培养,并收集培养液中悬浮存在的球状细胞聚集体(SDDSs),用含胎牛血清的培养液进一步单层扩增细胞。以免疫细胞荧光法分析细胞和鉴定细胞的分化特性。结果:真皮中分离的一些单个细胞在无血清培养液中分裂增殖形成SDDSs;在含血清的单层培养条件下,从SDDSs分离培养的细胞增殖活跃,细胞表达间充质干细胞标志物CD90、CD105和波形蛋白;分别向骨细胞、软骨细胞以及脂肪细胞诱导分化后,呈现类似于BMSCs分化特点,分化的细胞呈茜素红、番红O和油红O特殊染色阳性反应,但真皮细胞分化形成的软骨细胞番红O染色弱于骨髓干细胞来源的软骨细胞。结论:结合无血清培养和有血清培养法,可从人真皮组织中分离培养具有向软骨细胞、骨细胞和脂肪细胞分化潜能的细胞,此细胞将有望替代BMSCs用于临床组织损伤修复的再生治疗。
Objective:

此网站 Parkinson’s disease(PD), which is one of the most common neuro‐degenerative disorders, is characterized by the loss of dopamine(DA) neurons in the substantia nigra in the midbrain. Experimental and clinical studies have shown that fetal neural stem cells(NSCs) have therapeutic effects in neurological disorders. The aim of this study was to examine whether cells that were differentiated from NSCs had therapeutic effects in a rat model of PD.

MTT法检测Weel抑制剂MK-1 775和化疗药物阿霉素对细胞活性的影响：将ALL细胞Nalm-6、Jurkat、Sup-T1、Molt-4和正常骨髓基质细胞HS-5接种于96孔培养板中,加入不同浓度的MK-1775、阿霉素或者两者联合培养24、48、72小时,MTT法检测MK-1775对ALL细胞和HS-5活性的影响,计算细胞活性和半数抑制浓度(IC50)。3.流式细胞术检测Weel激酶抑制剂MK-1775对ALL细胞周期的影响：将Nalm-6和Jurkat细胞接种于6孔培养板中,加入OnM、100nM、300nM的MK-1775,继续培养24小时,PI染色,流式细胞术检测细胞DNA含量,ModFit

LT软件计算细胞周期的变化。4. Annexin V-FITC/PI细胞凋亡试剂盒检测细胞凋亡：ALL细胞系接种于6孔培养板中,加入不同浓度的MK-1775、阿霉素或者两者联合作用,培养24或48小时,收集细胞,Annexin V-FITC/PI染色,流式细胞术检测FITC/PI阳性细胞,Summit 5.2软件计算凋亡率。5. Western blot检测相关蛋白的表达：ALL细胞系接种于培养瓶中,分别加入一定浓度的MK-1775、阿霉素或者两者联合作用,继续培养24小时,收集细胞,提取蛋白质,用10%SDS-PAGE胶进行凝胶电泳,Western 哪里 blot检测CDK1、p-CDK1、p-H3、PARP1、γH2AX、AKT、mTOR、p-mTOR、bcl-2、Notch1、 Hes1蛋白的表达。研究结果：1. Weel基因在ALL组和对照组的表达：Weel mRNA在ALL组的表达相对量=2-△Ct(ALL)=0.15±0.08,Well mRNA在对照组的表达相对量=2-△Ct(对照组)=0.09±0.05,ALL组表达高于对照组(p0.05)和33.3+5.4%(与对照比p>0.05),S期比例分别为55.1±7.7%、60.2±9.6%(与对照比p>0.05)、61.4±17.2%(与对照比p>0.05),G2/M期比例分别为3.3±2.0%、3.9±3.5%(与对照比p>0.05)、7.2±9.0%(与对照比p>0.05),与对照比,G1期、S期和G2/M期比值改变统计学无差异；Jurkat细胞G1期比例分别为42.54±4.1%、43.3±7.5%(与对照比p>0.05)、15.64±3.5%(与对照比p0.05)、62.64±9.6%(与对照比p0.05)和27.0±4.9%(与对照比p<0.05)、88.83±7.65%(与对照比p<0.05)：Jurkat细胞凋亡率分别为2.12±0.47%、41.26±12.30%(与对照比p<0.05)、70.08±8.52%(与对照比p
第一部分中国人非小细胞肺癌PIK3CA基因突变研究肺癌是全世界最常见的恶性肿瘤之一,在肿瘤相关死亡率中居首位。其中,约85%是非小细胞肺癌,主要包括鳞状细胞癌、腺癌和大细胞癌等。近来年,尽管外科手术治疗、肿瘤含铂化疗和以吉非替尼、厄罗替尼为代表的靶向治疗等取得了长足的发展,但全球范围内非小细胞肺癌的5年生存率仍只有10%-15%。研究表明,磷脂酰肌醇3激酶(P13K)通路与肿瘤生成密切相关。靶向于P-13K通路成员的抑制剂被证明有明显抗肿瘤作用并已进入临床试验。然而,对PIK3CA基因突变、扩增以及PI3K

Brefeldin A核磁共振 查找更多 P110 α, p-Akt, mTOR, PTEN表达的综合分析罕有报道。中国人非小细胞肺癌PIK3CA基因突变及与其他驱动癌基因突变关系仍不很清楚。弄清以上问题,将有利于了解中国人群PIK3CA基因突变现状并有助P13K靶向药物患者选择。基于以上情况,我们开展本部分研究,回顾分析复旦大学附属肿瘤医院1117例临床肺癌手术切除新鲜冰冻标本,提取RNA,逆转录为cDNA后进行逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)。对PCR产物进行基因测序检测PIK3CA(9号外显子和20号外显子),EGFR(18-21号外显子),KRAs(2号和3号外显子),HER2(18-21号外显子),BRAF(11-15号外显子),AKT1(2-3号外显子)的基因突变以及ALK(EMLL4-ALK，KIF5B-ALK和TFG-ALK)基因融合情况。对研究中发现的PIK3CA突变标本及野生pIK3CA对照标本(连续收集自2008年7月至2009年6月肺鳞癌、腺癌野生PIK3CA样本),以荧光原位杂交(fluorescent

in situ hybridization, FISH)法检测PIK3CA基因拷贝数,以免疫组织化学法(immunohistochemical,IHC)检测PI3K P110 α, p-Akt, mTOR和PTEN的表达。研究发现,1117例非小细胞肺癌中共有34例PIK3CA基因突变,807例腺癌和310例鳞癌中PIK3CA的突变频率分别为2.7%和3.9%。在34例PIX3CA突变中,17例伴EGFR突变,4例伴KRAS突变。PIK3CA基因突变与PI3K P110α(p=0.0001), p-Akt(p=0.024)以及mTOR(p=0.001)表达呈正相关,但与PIK3CA基因拷贝数无明显相关性(p＝0.463)。仅存在PIK3CA突变患者的总生存时间较pIK3CA-EGFR/KRAs共突变者明显缩短(p=0.

通过比较现实工作中晚期非小细胞肺癌NSCLC患者生存期的差异,分析其影响因素。2.初步分析现实工作中药物对晚期NSCLC疗效的影响。方法:本研究收集西京医院呼吸内科2011年3月至2013年6月收住的764例晚期NSCLC患者,按治疗与未治疗及性别之间比较OS。进而,对其中接受治疗的638例晚期NSCLC患者,根据年龄、性别、肿瘤分期、吸烟史、PS评分、病理类型等临床特征进行分析,比较现实工作中药物对晚期NSCLC疗效的差异。生存时间应用Kaplan-Meier及Cox回归分析,Log-rank对生存曲线的差异进行显著性检验。检验水准P<0.05认为差异有统计学意义。采用SPSSl8.0统计软件进行处理。结果:1.生存的影响因素:全组的MST为10.2月,95%CI为9.3~10.9。全组患者的1年及2年生存率分别为44.2%和18.1%。接受治疗的患者MST为12.0月,95%CI为9.2~14.8;未接受治疗的患者MST为6.4月,95%CI为4.3~8.5,P
急性肺损伤(acute lung injury,ALI)和急性呼吸窘迫综合征(acute

respiratory distress syndrome,ARDS)是由严重感染、休克、创伤及烧伤等非心源性疾病引起的破坏性大、死亡率高的急性综合征,其发病机制复杂,涉及炎症反应失控、氧化和抗氧化等多个层面,各种因素形成复杂的调控网络,因此难以寻找有效的辅助诊断指标和治疗措施。代谢组学是从代谢产物入手,对生物体的病理生理变化进行全面认识的研究方法,可望用于发现新的急性肺损伤辅助诊断指标。目前治疗ALI/ARDS唯一有效的措施是机械通气,而机械通气也会诱发和加重肺损伤,目前尚无防治机械通气所致肺损伤(ventilator-induced

寻找更多 一般 lung injury,VILI)的有效药物,因此,寻找防治VILI的有效药物并对其作用机制进行研究,也是肺损伤研究面临的一个重要的问题。 随着我国肺癌发病率与死亡率的日益升高,肺癌在呼吸系统疾病研究中所占地位越来越重要,其中,肺癌的个体化治疗是近年来的研究热点。人群对药物治疗反应的差异是由基因多态性(single nucleotide polymorphisms,SNPs)决定的,铂类联合第三代化疗药物是治疗晚期非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)的一线方案,但其白细胞毒性不容忽视。基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)在恢复造血功能方面具有重要作用,其SNPs可能是影响含铂化疗白细胞毒性的重要因素。 在本研究中,我们首次使用核磁共振氢谱(‘H nuclear magnetic resonance spectroscopy,’H NMR spectroscopy)结合模式识别技术对急性肺损伤的代谢产物进行研究,以期发现新的肺损伤辅助诊断指标；研究了中药单体姜黄素对机械通气肺损伤的保护作用及机制,以期发现新的肺损伤防治措施；探索了MMP-2SNPs与晚期NSCLC含铂化疗严重白细胞毒性的关系,以期指导肺癌的个体化治疗。 第一部分 基于核磁共振氢谱结合模式识别技术的急性肺损伤代谢组学研究目的：本研究拟利用1H NMR谱结合模式识别技术研究急性肺损伤代谢产物,并用糖皮质激素类抗炎药地塞米松(dexamethasone,DXM)进行干预,研究代谢产物变化的机制是否与肺部炎症相关。 方法：本研究将实验动物分为3组,分别为气道滴入生理盐水的假手术组(Sham组)、气道滴入5mg/kg脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)的急性肺损伤组(LPS组)以及气道滴入5mg/kgLPS同时腹腔注射5mg/kg地塞米松的地塞米松治疗组(LPS+DXM组),4小时后,通过形态学观察及肺损伤评分、肺脏湿干重比及支气管肺泡灌洗液(bronchial alveolar lavage fluid,BALF)蛋白浓度检测评价是否造成急性肺损伤动物模型；通过髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)活性、肺组织白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)及肿瘤坏死因子-a(tumor necrosis factor-a,TNF-a)表达检测研究炎症反应程度；通过三磷酸腺苷(adenosine

获悉更多 triphosphate,ATP)含量检测了解能量代谢情况,通过1H NMR谱结合模式识别技术检测和分析肺组织萃取液,研究ALI肺组织代谢产物的变化情况。结果：形态学观察及肺损伤评分结果显示LPS诱导的小鼠ALI模型以炎细胞浸润、肺血气屏障通透性增加、肺间质水肿为特征,DXM可以显著减轻上述现象；BALF蛋白浓度检测发现,LPS组BALF蛋白浓度增高,LPS+DXM组BALF蛋白浓度较LPS组下降,提示LPS诱导的ALI肺血管通透性增加可被DXM所抑制；在炎症指标的检测中发现,LPS可提高IL-1β转录和TNF-α表达水平,增强MPO活性,而DXM可以改善上述现象,提示DXM可通过其抗炎作用减轻LPS诱导的急性肺损伤；能量代谢检测显示,LPS刺激后,肺组织ATP含量下降,而DXM可以恢复ATP水平,提示ALI能量代谢失衡可能与其炎症反应增强有关,DXM可能通过其抗炎作用恢复了LPS诱导的ALI能量代谢失衡。利用1H NMR谱结合模式分析技术可以将Sham组和LPS组,以及LPS组与LPS+DXM组的样本区分开,而Sham组与LPS+DXM组的样本无法区分,进一步分析区分各组的主成分发现,肺组织中缬氨酸(valine,Val,δ1.06)、乳酸(lactate,Lac,δ1.33)、醋酸盐(acetate,Ace,δ1.91)和肌酸(creatine,Cre,δ3.93)四种代谢物浓度改变所占的权重最大,其浓度在各组中的差异具有统计学意义,而磷酸胆碱和甘油磷酸胆碱(phosphocholine and glycerophosphocholine,GPCPC,δ3.22)、肌酸酐(creatinine,Crn,δ3.07)、琥珀酸(succinatc,Suc,δ2.

应用实时定量PCR技术检测非小细胞肺癌组织miR-34b的表达水平,并且分析其与临床病理参数之间的统计学意义。应用细胞转染技术获得miR-34b高表达细胞,并检测细胞凋亡与细胞增殖。运用免疫组织化学方法探索miR-34b表达与下游蛋白c-Met, p53以及Mdm2之间的相关性。 对于miR-34b在非小细胞肺癌与邻近癌旁组织中的表达差异应用两样本t检验。应用Pearson卡方检验和Fisher精确检验来检验miR-34b表达水平与临床病理参数之间相关关系。应用等级相关检验来检验miR-34b表达水平与phospho-Met, p53(phospho S392)以及Mdm2相关关系。 研究结果：miR-34b在非小细胞肺癌中低表达,并与淋巴结转移负相关(P=0.031). miR-34b通过诱导凋亡抑制肿瘤增殖。非小细胞肺癌中miR-34b表达与c-Met负相关(P=0.012)。 结论：miR-34b影响肿瘤细胞的凋亡、增殖、转移,在肿瘤发展过程中发挥抑制肿瘤的作用；HGF-Met信号通路中p53磷酸化并增强转录活性,上调miR-34b,反馈抑制c-Met。由于p53信号通路参与细胞周期抑制与细胞凋亡,并于其中发挥重要作用,因此miR-34基因可能受到抑癌基因p53的调节,而p53可以通过miR34调节一系列的下游蛋白。另外,miR-34又可以反向作用于p53的mRNA,从而避免p53的连续激活。
目的：实体肿瘤的生长需要足够的血液供应。多年来，血管萌芽被看做肿瘤血管生成的一种独立过程。然而，近年来包括脉管共选择、套叠、招募内皮前体细胞、血管生成拟态（vasculogenic

NVP-AUY922溶解度 mimicry，VM）等多种机制在内的肿瘤血管生成模型已被提出。其中，血管生成拟态是指快速增长的肿瘤细胞本身可以形成类似血管样的管道结构。血管生成拟态已在多种实体瘤中得到发现，并且存在血管生成拟态的患者预后往往不佳。 血管生成拟态最早于1999年被用来描述高侵袭性的黑色素瘤细胞具有分化形成复杂细胞表型并获得内皮样性状的独特能力。该过程中生成具有血管样结构的管道，其中含有血浆及红细胞。形态学上的观察显示血管生成拟态富含层粘联蛋白并被肿瘤细胞所包绕，并深入球形的肿瘤组织中。然而，在这富含基质的管道中内皮细胞并未被包括光镜、电镜及免疫组化等多种方法所检测到。随着VM在黑色素瘤中的发现，此后在乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、肺癌、尤文肉瘤、肾透明细胞癌等多种实体瘤中相继发现。尽管VM的发生率不高，但癌症患者肿瘤组织中VM的存在与转移风险及不良预后相关。

VM网络的出现可以丰富血管萌芽生成理论。VM的出现表明侵袭性的肿瘤细胞具有转变成未分化的原始细胞的能力。基因分析显示生成VM的侵袭性黑色素瘤细胞具有分化成内皮细胞、上皮细胞及成纤维细胞的能力。此外，这些研究显示VE-cadherin、EphA2及laminin5γ2基因在存在VM的肿瘤组织中表达上调。这几种分子及其配体在血管生成中起重要作用。让人惊讶的是在尤文肉瘤组织中表达VE-cadherin和EphA2的肿瘤细胞直接围绕在VM周围。VM的生成依赖其独特的血管生成调控机制，传统的血管生成因子如bFGF和VEGF对VM的生成并不起主导作用。 Selleckchem Crizotinib 肝细胞生长因子受体（c-Met）和它的配体肝细胞生长和离散因子（HGF/SF）在肿瘤的发生和肿瘤血管的生成过程中扮演着非常重要的角色，并参与肿瘤的侵袭和转移。部分研究显示，p-Akt蛋白作为HGF/c-Met通路的下游信号分子参与肿瘤的发生和血管生成，而关于c-Met受体和p-Akt蛋白是否与胃癌血管生成拟态的产生有关，目前还未见相关报道。本文对胃癌中p-Akt蛋白与HGF/c-Met通路的关联性进行初步研究，并进一步探讨p-Akt蛋白与HGF/c-Met通路是否参与胃癌VM的形成及其可能的分子机制。 方法：按照入组标准与排除标准，收集华北石油总医院2003年9月1日至2008年8月18日之间收治的胃癌患者共74例，正常胃组织16例。收集患者的临床相关信息，包括年龄、性别、组织学分型、分化程度、脉管瘤栓有无、侵润深度、淋巴结转移和远处转移情况。应用免疫组织化学法检测肿瘤组织及正常对照组中c-Met受体、p-Akt蛋白的表达情况，应用CD-34和PAS双染法测定VM。应用SPSS13.0统计学软件进行统计分析，c-Met受体、p-Akt蛋白和VM与各临床病理参数之间采用χ2检验；VM在c-Met受体、p-Akt蛋白高表达与低表达组间的差异应用χ2检验；两变量相关性采用Spearman等级相关进行分析。以上均以P＜0.05作为有统计学意义的标准。

selleck化学药品液面控制 结果： 1c-Met受体、p-Akt蛋白在胃癌组与对照组的免疫组化检测结果 在胃癌患者中，c-Met受体的阳性表达率为66.22%（49/74），而在正常胃组织中阳性表达率仅为18.75%（3/16），胃癌组中c-Met受体的表达显著高于正常组（P＜0.05）。胃癌组中p-Akt蛋白的阳性表达率为71.62%（53/74），而在正常胃组织中仅为25%（4/16），胃癌组患者p-Akt蛋白的高表达率显著高于正常组（P＜0.05）。 2c-Met受体、p-Akt蛋白的表达与胃癌各临床病理参数间的关系 c-Met受体在胃癌患者不同性别、年龄、有无脉管瘤栓、原发灶部位、淋巴结转移、远处转移组间的表达无显著差异（P＞0.05）。而c-Met受体在胃癌患者中的表达受不同组织学类型、分化程度、浸润深度及分期的影响（P＜0.05）。p-Akt蛋白在胃癌患者不同性别、年龄、有无脉管瘤栓、不同组织学类型、原发灶部位、远处转移组间的表达无显著差异（P＞0.05）。而p-Akt蛋白在胃癌患者中的表达受分化程度、浸润深度、淋巴结转移及分期的影响（P＜0.05）。 3胃癌患者VM 胃癌患者中存在VM，阳性率为29.73%（22/74），而在正常胃组织中未发现VM的存在，两组间差异显著（P＜0.05）。 4胃癌患者VM与各临床病理参数间的关系 本研究中胃癌患者VM与患者性别、年龄、原发灶部位、淋巴结转移无密切关系（P＞0.05），而与组织学分型、肿瘤分化程度、脉管瘤栓、肿瘤浸润深度、远处转移、分期密切相关（P＜0.