0,溶氧体积分数20%,甲醇浓度0.25%,诱导3天,rh IL-1β的表达量最高,可达280mg/L。本文对rh IL-1β分离纯化方法进行了初步研究,研究结果显示,首先采用低温离心法去除大部分菌体,然后用磷酸氢二钾/无水乙醇双水相体系对收集的发酵液上清进行抽提,收集上相溶液,经10k 和 D超滤、浓缩,最后经DEAE弱阴离子交换层析分离纯化方法,可以得到纯度在95%左右,收率75%的rh IL-1β。本文分别采用MTT法和Hoechst33258染色法对获得的重组蛋白进行初步的生物学活性检测,MTT法实验数据显示,rh IL-1β对人肝癌细胞株Hep G2和小鼠黑素瘤细胞株B16具有增殖抑制作用,通过显微镜观察rh IL-1β处理过的Hep

G2和B16细胞发现,rh IL-1β可促进上述两种癌细胞的凋亡。综上所述,本文为rh IL-1β的工业化生产及研究其生物学作用奠定基础,也为研发抗肿瘤新药提供实验依据。
中药在我国的应用有着悠久的历史,在预防及治疗某些常见病、慢性病中有着不可替代的作用。但是近年来随着环境因素的变化,中药退化严重,品质下降,直接影响到临床的治疗效果。中药药效的优劣与其所含的化学成分中的活性物质(药用成分)关系密切,因此考察环境因素对药用植物生长的影响及其与药用成分的相关性分析,有助于我们科学的种植、生产药材,从而为提高中药临床疗效提供理论参考。本实验通过盆栽试验,研究不同施硒水平下接种AM真菌对丹参幼苗生长和营养物质含量的影响。1、研究发现丹参的生长和养分吸收可以通过接种AM真菌来调节,但AM真菌接种效果会受土壤Se含量的影响。综合各方面因素,本试验表明当硒质量浓度为20~40μg·ml-1时AM真菌对丹参的接种效果最佳。2、同一施硒水平下,接种AM真菌显著提高丹参幼苗株高、根长、各部分质量、侵染率及叶绿素、蛋白质、微量元素的质量分数,丙二醛质量摩尔浓度、脯氨酸质量分数均显著降低,表明AM真菌能够促进丹参生长,提高植株抗逆性,增强其对营养元素的吸收。且接种株丹参酮ⅡA、丹酚酸B质量分数均高于未接种株,当硒质量浓度为40μg·ml-1时接种株丹参酮ⅡA质量分数最高,为0.272%。3、不同施硒水平下,随硒质量浓度的增加,接种株与未接种株丹参生长量、可溶性糖、丙二醛及丹参酮ⅡA均先增大后减小,但接种株含量高于未接种株,在Se1(20μg·ml-1)~Se40μg·ml-1)时达到最大,说明高硒抑制丹参生长和药用成分的富集。由此看出适量质量浓度的硒与AM真菌协同作用,能够更有效的提高丹参生长和药用成分的积累。丹参中硒质量分数与施硒质量浓度呈显著正相关,但无明显线性关系,且硒的分布为茎叶>根部。本课题考察不同浓度Se肥对接种AM真菌丹参生长量和药用成分的影响,为提高药用植物品质及合理应用提供了依据。
疼痛是人类绝大多数疾病共有的最痛苦和难以解决的症状。它的管理一直是医学比较棘手的问题。疼痛的治疗方法主要分为药物治疗和非药物治疗。药物治疗对炎性和神经病理性疼痛的效果有时并不理想,且存在副作用。非药物治疗以其方便、安全可靠、对患者伤害性小、无副作用及疗效佳等特点值得被应用于临床。其中电针疗法操作相对简单,且参数较易调节控制,更适合在临床发展应用。电针镇痛效应涉及外周和中枢神经体液众多因素参与。目前,电针的中枢镇痛调节机制已成人们研究的热点。研究证明电针可通过调节中枢下行抑制系统(中脑导水管周围灰质、延脑头端腹内侧核、脊髓背角等)中神经递质(5-羟色胺、去甲肾上腺素、乙酰胆碱、谷氨酸等)和神经调质(阿片肽、八肽胆囊收缩素等)的释放,产生镇痛效应。这些神经递质或调质应通过细胞内信号转导机制发挥调节作用。但目前有关电针镇痛的中枢信号分子和信号通路的研究缺乏。研究表明伤害性刺激可激活脊髓MAPKs信号通路,在早期主要激活p38MAPK,而抑制其信号通路中相关分子的活化可以减轻痛觉超敏和触痛敏,提示p38

KU-60019小白鼠 ARRY-162 MAPK信号通路参与疼痛的中枢敏化。但电针是否通过调节细胞内p38 MAPK信号通路抑制中枢敏化尚不清楚。本试验以完全弗氏佐剂(CFA)注射大鼠后肢趾面建立炎性疼痛模型,研究电针对大鼠触痛敏、足容积以及中枢中脑导水管周围灰质(PAG)、延脑头端腹内侧核(RVM)和脊髓背角(SCDH)中p38MAPK磷酸化水平的影响,以探讨电针调节炎性疼痛的中枢分子机制。试验选择6周龄健康SD大鼠,144只,体重200±20g。将其随机分为氯化钠组(Saline)、模型组(CFA)、模型+电针组(CFA+EA)及模型+假针组(CFA+sham)四组,每组36只。Saline组大鼠左后肢足底趾面皮下注射0.1m L无菌生理盐水,另三组大鼠左后肢足底趾面注射0.1m L完全弗氏佐剂。CFA+EA组于注射后30min、24.5h、48.5h及72.

抗纤维化药物筛选模型的建立 COL1A1启动子报告基因载体的构建。根据COL1A1基因上游的序列设计合成扩增引物，以人基因组DNA为模板，PCR扩增COL1A1启动子序列，将其插入报告基因载体pGL4中，构建COL1A1启动子报告基因载体pGL4-COL1A1promoter，限制性酶切和DNA测序鉴定其正确性。

抗纤维化药物筛选模型的建立及检测。以LX-2细胞为宿主细胞，将COL1A1启动子报告基因载体与内参报告基因载体共转染LX-2细胞，24h后收集细胞，双报告基因检测COL1A1启动子活性。抗纤维化药物筛选模型建立之后，使用对Ⅰ型胶原蛋白表达有抑制作用的TGFβ1siRNA验证其有效性。结果：TGFβ1siRNA不影响COL1A1启动子活性。分析其原因：一方面可能与细胞内源性TGFβ1表达低下有关；另一方面与正常LX-2细胞COL1A1启动子处于低活化状态有关。拟外源表达活化剂TGFβ1活化LX-2细胞，模拟肝纤维化肝星状细胞的高活化状态，再进行药物评价实验。 2.抗纤维化药物筛选模型的优化 抗纤维化药物筛选模型的首次优化。以HepG2细胞提取的总RNA逆转录产物为模板，PCR扩增TGFβ1全长编码基因，插入到表达载体pcDNA3.1中，构建TGFβ1的重组载体pcDNA3.1-TGFβ1，限制性酶切和DNA测序鉴定为正确连接的克隆。将pcDNA3.1、pcDNA3.1-TGFβ1分别与COL1A1启动子报告基因载体及内参报告基因载体共转染LX-2细胞，24h后收集细胞，双报告基因检测COL1A1启动子活性。结果：过表达TGFβ1仅使COL1A1启动子活性提高了不到2倍（t=3.396，P=0.0274）。推测其原因：可能是TGFβ1在细胞内表达但没有分泌到细胞外，无法与细胞膜受体结合进而发挥作用。拟构建含分泌信号肽的TGFβ1重组表达载体，验证上述推测是否正确。 抗纤维化药物筛选模型的再次优化。同上方法构建含分泌信号肽的TGFβ1重组表达载体pJW4303-TGFβ1。将pJW4303、pJW4303-TGFβ1分别与COL1A1启动子报告基因载体及内参报告基因载体共转染LX-2细胞，24h后收集细胞，双报告基因检测COL1A1启动子活性。结果：分泌表达TGFβ1使COL1A1启动子活性提高了200倍以上（t=21.78，P=0.0001）。该结果验证了上述推测：TGFβ1只有被分泌到细胞外并与自身细胞膜受体结合后才能发挥活化作用。故选择pJW4303-TGFβ1用于抗纤维化药物筛选模型的优化。

selleck化学 KU-60019 3.抗纤维化药物筛选模型的有效性鉴定 文献报道糖皮质激素类药物地塞米松可以下调COL1A1启动子活性进而抑制Ⅰ型胶原蛋白表达，故选其作为阳性模式药物来鉴定该筛选模型的有效性。在高活化状态的筛选模型中，加入不同浓度地塞米松，观察其抑制效果。结果：地塞米松对COL1A1启动子活性具有明显的抑制作用且具有剂量依赖关系。这说明该模型可以用于筛选和评价抑制I型胶原蛋白表达的抗纤维化药物。 本研究证实了HBV能感染LX-2细胞并促进Ⅰ型胶原蛋白表达；HBV编码蛋白尤其是HBx能上调COL1A1启动子活性进而促进Ⅰ型胶原蛋白表达；TGFβ1不参与而P38MAPK通路参与HBx对Ⅰ型胶原蛋白的调控。另外，本研究以COL1A1启动子活性调控机制为基础，建立了一种新型抗纤维化药物筛选模型，为抑制COL1A1启动子活性进而抑制Ⅰ型胶原蛋白表达的抗纤维化药物研究奠定了基础。
目的：通过观察OSAHS合并高血压大鼠血浆中TNF-α、Leptin水平变化，探讨TOLL样受体4（TLR4）是否通过JNK信号通路对脂肪细胞因子进行调控，借此探索OSAHS合并高血压的可能发病机制。方法：将雄性SD大鼠48只随机分为3组，即：正常对照组、缺氧6周组、缺氧8周组，实验时将实验组大鼠放入密闭玻璃舱内，玻璃舱内充入氮气和氧气,每天缺氧8h,每次循环120秒,将正常对照组大鼠置于相同规格的玻璃舱内，充入空气，无缺氧。于实验前、试验后检测各组大鼠血压。于间歇低氧42、56天后先后处死实验6组和实验8周组大鼠，采用荧光定量PCR、Western-Blotting方法观察脂肪组织中TLR4受体和JNK受体的表达情况，ELISA方法观察大鼠血浆中TNF-α、Leptin含量的变化，HE染色方法观测大鼠肾动脉的病理变化。取间歇低氧8周组大鼠脂肪组织进行原代培养脂肪细胞，通过细胞免疫组织化学以及油红O法鉴定前脂肪细胞和成熟脂肪细胞；分为4组脂肪细胞，即:间歇缺氧8周模型组（缺氧8周组），间歇缺氧8周脂多糖诱导组（LPS诱导组），间歇缺氧8周TLR4阻滞组（TLR4阻滞组），间歇缺氧8周JNK阻滞组（JNK阻滞组）。利用荧光定量PCR法和Western-blot法观察脂肪细胞中TLR4受体、JNK受体mRNA和蛋白质的表达，利用ELISA法观察脂肪细胞培养液中TNF-α、Leptin的含量。结果：1模型组大鼠尾动脉压增加,并且出现肾动脉管腔变小、肾动脉管壁变厚的病理变化,因此成功建立了OSAHS合并高血压大鼠模型。2间歇性缺氧6周组、间歇性缺氧8周组血清TNF-α、Leptin含量比正常对照组显著升高（P<0.01，P<0.01），且缺氧8周组更显著（P<0.05）。3缺氧6周组、缺氧8周组脂肪组织中TLR4受体、JNK受体的表达水平与正常对照组相比明显升高(P<0.01，P<0.01)。4培养出OSAHS合并高血压模型原代大鼠脂肪细胞；采用油红O染色方法可见脂肪细胞胞内出现红染色颗粒；采用细胞免疫组化可见细胞胞浆着色成棕黄色。5TLR4介导JNK信号通路在脂肪细胞中的表达：与间歇性缺氧8周组相比，脂多糖诱导剂使TLR4受体、JNK受体mRNA和蛋白的表达增加（P<0.05）；TLR4阻滞剂使TLR4受体、JNK受体mRNA和蛋白的表达减少（P<0.05，P<0.05）；JNK阻滞剂可以使JNK受体mRNA和蛋白的表达减少（P<0.05），而对TLR4受体mRNA和蛋白的表达无意义。6OSAHS合并高血压模型大鼠脂肪细胞中TLR4介导的JNK信号通路对TNF-α、Leptin分泌的调控：脂多糖诱导剂组比间歇缺氧8周组TNF-α、Leptin分泌增加（P<0.05），TLR4阻滞剂组、JNK阻滞剂组比间歇缺氧8周组TNF-α、Leptin分泌均减少（P<0.05，P<0.05）。结论：TLR4介导的JNK炎症信号通路在OSAHS合并高血压的发生、发展中发挥重要作用，为进一步寻找更有效的治疗方法奠定了基础。
[目的]

还有 采用基因芯片技术检测油酸型急性呼吸窘迫综合征(acute respiratory distress syndrome ARDS)大鼠肺组织中炎症免疫相关基因的表达；应用AG490(氰-3,4-二羟基-N-苄基肉桂酰胺)和GCs(糖皮质激素)干预ARDS大鼠,观察其RhoA基因表达变化；通过建立体外脂多糖(LPS)诱导RAW264.

049,P＜0.01),内皮细胞的通透系数Pa由191.32±4.28%分别降至114.52±2.23%和120.53±1.72%,与单纯AGE-HSA组相比差异有统计学意义(P＜0.01),但细胞的通透性并没有降至正常,且与对照组相比差异仍具有统计学意义(P＜0.01)。 Protein Tyrosine激酶抑制剂 (4)用重组腺病毒改变RhoA活性对HMVECs单层通透性的影响 在细胞转染重组腺病毒试验组中,与对照组相比,50μg/ml的AGE-HSA作用8 h可以显著增加单层HMVECs的通透性(209.01±3.34%),差异有统计学意义(P＜0.01)。细胞转染活性重组腺病毒RhoA

L63后,细胞的通透性也显著增加(187.69±5.83%),差异有统计学意义(P＜0.01)。而细胞转染无活性重组腺病毒RhoA N19,对通透性(96.25±1.81%)没有显著影响(P＞0.05);细胞先转染无活性重组腺病毒RhoA N19后,再与50μg/ml的AGE-HSA作用8 h,与AGE-HSA作用组(209.01±3.34%)相比内皮细胞通透性(92.90±1.65%)显著降低,差异有统计学意义(P＜0.01)。 3.AGE-HSA刺激对HMVECs中RhoA、ROCK蛋白表达和磷酸化水平的影响 (1) AGE-HSA引起HMVECs内RhoA、ROCK磷酸化水平的改变 ①AGE-HSA以时间和剂量依赖的方式引起HMVECs内RhoA磷酸化水平的增多 AGE-HSA刺激引起RhoA磷酸化水平显著增加,且呈时间(F=2.633,P=0.019)和剂量(F=26.234,P＜0.01)依赖性,但对RhoA本身的表达没有显著影响(P＞0.05)。在时间效应组中,随着AGE-HSA作用时间的延长,细胞中RhoA的磷酸化水平逐渐增多,与对照组相比,从45 min分钟起差异有统计学意义(P＜0.01),至60 min时,到达峰值,随后RhoA磷酸化水平开始缓慢下降,当AGE-HSA作用90 min时与对照组相比差异仍有统计学意义(P＜0.05),随着时间延长,RhoA磷酸化水平继续降低,当达到120 min时,与对照组相比虽然没有显著性差异(P＞0.05),但RhoA磷酸化水平的绝对值仍然比对照组高。剂量效应组中,随着AGE-HSA浓度的增加,细胞中RhoA的磷酸化水平逐渐增多,当AGE-HSA浓度达到25μg/ml时,与对照组相比,差异具有统计学意义(P＜0.05),随着AGE-HSA浓度增加,细胞中RhoA磷酸化水平持续增加,当达到50μg/ml时,细胞中RhoA的磷酸化水平达到峰值,并维持在这一水平,而AGE-HSA对RhoA的表达水平则没有明显的影响(P＞0.05)。

还有 ②AGE-HSA以时间和剂量依赖的方式引起HMVECs内ROCK磷酸化水平的增多

AGE-HSA以时间(F=3.247,P=0.044)和剂量(F=17.549,P＜0.01)依赖的方式引起ROCK磷酸化水平显著增加,而AGE-HSA对ROCK的表达水平没有明显的影响(P＞0.05)。时间效应组中,随着AGE-HSA作用时间的延长,内皮细胞中ROCK的磷酸化水平逐渐增加,与对照组相比,45 min分钟起差异有统计学意义(P＜0.05),至60 min时,ROCK磷酸化水平达到峰值(P＜0.01),然后开始缓慢下降,但与对照组相比差异仍有统计学意义(P＜0.01)。在剂量效应组中,随着AGE-HSA浓度的增加,细胞中ROCK的磷酸化水平逐渐增多,当AGE-HSA浓度达到12.5μg/ml时,与对照组相比,差异具有统计学意义(P＜0.05),随着AGE-HSA浓度的增加,细胞中ROCK的磷酸化水平持续缓慢上升。 (2)活性或无活性RhoA重组腺病毒对HMVECs内RhoA、ROCK及其磷酸化水平的影响 对照组中,RhoA及ROCK均有少量磷酸化,转染活性的重组腺病毒RhoAL63后,RhoA、ROCK的磷酸化水平明显升高,而RhoA、ROCK本身则没有明显变化,单独转染无活性的重组腺病毒RhoA DNA Damage antagonist N19,内皮细胞内RhoA、ROCK及其磷酸化水平均没有明显改变,而先转染无活性的重组腺病毒RhoA N19,然后再和AGE-HSA作用,则明显抑制了AGE-HSA引起的RhoA、ROCK磷酸化水平的增多。 4.AGE-HSA引起的内皮细胞反应中RhoA、ROCK活性变化与p38 MAPK通路的关系 ROCK特异性抑制剂Y-27632或H-1152均能够显著降低AGE-HSA引起的p38MAPK磷酸化水平的增加;同时p38MAPK特异性抑制剂SB203580也能够显著降低AGE-HSA引起的RhoA、Rho激酶磷酸化水平的增加。 结论: 1.AGE-HSA以时间和剂量依赖的方式引起HMVECs形态和功能的改变。 2.RhoA/ROCK信号通路参与了AGE-HSA介导的HMVECs形态和功能的改变,但并不是唯一的通路。 3.AGE-HSA通过介导RhoA、ROCK的磷酸化而引起HMVECs形态和功能上的改变。 4.

5％戊二醛中，用于制作扫描电镜标本，观察内皮覆盖情况；一份塑料包埋，碳化钨钢刀切片，分别行elastic-van Gieson和Masson染色，形态学观察，另一份用于第三部分分子生物学指标检测。结果发现，术后28天，对照组血管内膜表面已完全内皮化，210μg DT包被支架组＞90％内皮化；光镜结果显示，各组血管损伤程度无显著性差异(P＞0.05)。内弹力板层包绕面积在各组间无差别。支架置入后28天，对照组内膜明显增厚，ECM面积占内膜总面积的40％，6个月后增加到91％(P＜0.001)。DT呈剂量依赖性减少内膜ECM比例。血管参数分析显示，各指标在小剂量组与对照组差异均无显著性(P＞0.05)； 术后28天，大、中剂量组的平均新生内膜厚度、新生内膜面积无差别(P>0.05)， 但均大于小剂量组和对照组(P<0.OOI);DT呈浓度依赖性增加管腔面积(P0.05)。上述结果表

明，60林gDT对预防再狭窄无效，在支架置入术后6个月内，中、高剂量DT(130陀， 210林g)包被支架呈剂量依赖性地抑制支架术后内膜增生，其机制与DT降低内膜 SMC聚集和减少ECM沉积有关。 第二部分，设计DT与32P联合包被支架，置入犬无病变的冠状动脉，期望经 两个不同途径，更彻底地抑制内膜增生。分别制作蛋白涂层的DT包被支架(210林留 以及 支架)，’ZP包被支架(20林ei/支架)和DT与犯P联合包被支架(210林g+20林ei/支 架)置入犬冠状动脉，于术后28天和6个月行冠状动脉造影后处死动物，取材， 分别制作扫描电镜标本和组织切片，行elastic一van Gieson和Masson染色，形态学 观察，进行参数测量、计算。结果发现，术后6个月，DT包被支架组血管内膜表 面完全内皮化，联合包被支架组内皮化程度与32P支架组相似(80%)。Masson染 色显示，各治疗组抑制内膜增生的同时伴有ECM含量的降低，联合组最低。血管 参数分析发现，术后28天和6个月，各指标在治疗组与对照组差异均有显著性意

义(尸<0.05)，但管腔面积大于32P和nT组(尸.05)。术后28天，联合包被组的平均新生内膜厚度虽小 于32P组(尸.05);6个月后不仅联合包被组对内 膜增生的抑制程度大于32P和DT组(尸
背景和目的:肥胖已在全球范围内广泛流行,肥胖尤其是腹型肥胖常与高血压、糖尿病、高脂血症等多个心血管疾病危险因子在同一个体中聚集,导致心脑血管疾病发生或加重,称为“代谢综合症(MS)”或“死亡四联症”,使得肥胖的研究已越来越引起重视,成为世界医学的一个热点问题。肥胖是环境因素和遗传因素相互作用的结果,发病因素极为复杂,发生机制仍不完全清楚。目前已有的食物所诱导的肥胖动物模型,可能与人类所产生的肥胖最为接近,但仍存在表型较单一的问题,常可有体重增加和血脂改变,却很少伴有高血压。因此,制备能更好模拟人类肥胖发病状态,具有肥胖、高血压和多种代谢紊乱的MS大鼠模型,对于研究肥胖特征及其发病机制至关重要。 许多 还有 肾素血管紧张素系统(RAS),是一个重要的机体血压及水电解质平衡调节系统。近年研究发现,除循环RAS外,局部组织如心脏、血管壁、脑、肾等也能合成AGT、肾素、ACE,能有效地生成AngⅡ,具有独立的RAS系统。而且这种AngⅡ起自分泌、旁分泌或近分泌作用,在器官结构的病理改变以及对组织生长、纤维化和炎性反应等功能中起重要作用。AngⅡ与AT1R结合可激活细胞内信号通路,其中包括Rho/ROCK和ERK/p38MAPK通路,介导RAS系统的大部分生物效应,如收缩血管、升高血压,促进醛固酮分泌,以及组织重构,细胞增生、肥大等。已有报道,脂肪细胞中存在RAS系统主要组分的mRNA表达,提示脂肪组织中也有局部RAS系统的存在。目前认为脂肪组织中RAS活性增高,可能在肥胖相关的高血压发病机制中占重要地位,并对脂肪组织的生长产生影响,但其作用途径不明。那么要思考的问题是肥胖者脂肪组织中RAS系统各组分的表达是否不同,这与脂肪细胞的肥大增生是否相关?脂肪细胞增殖与肥大的细胞内信号通路是否与其他组织一样,存在Rho/ROCK和ERK/p38MAK途径的激活,不同部位的脂肪组织是否存在差异?

本课题从整体到组织再到分子水平,分三部分进行研究:通过社区人群中肥胖的筛查,了解国人肥胖的特征;建立与人类肥胖特征更为接近的动物模型,观察其脂肪组织生长特点;进而探讨脂肪组织局部RAS系统的表达及RhoA/ ROCK和ERK/p38信号途径在肥胖发生(脂肪组织生长)中的病理生理作用,为寻找肥胖及MS的防治新途径提供实验依据。 方法:(一)流行病学调查:采用现场调查的方法,筛查社区30岁以上人群共1449人,男730人,女719人。检测指标:身高、体重、血压、腰围(WC)、臀围、腰臀比、体重指数(BMI)和75g葡萄糖耐量实验、体脂百分含量(FAT%)测定。肥胖和超重诊断:分别按WHO、亚太地区和中国成人BMI分类标准分析。糖尿病及高血压诊断:按1999年WHO标准。(二)动物模型研究:1. 健康8周龄雄性Wistar大鼠30只,随机分为正常对照组(NC)和MS组,每组15只,以49%高脂结合高盐饮食复制MS大鼠模型。2. 测量血压、空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)、血脂(TG)和游离脂肪酸(FFA)。3. 肥胖特征指标:体重、腹围、Lee’s指数、各部位白色脂肪组织(WAT)重量、内脏脂肪(VAT)系数、测量脂肪细胞的面积、大脂肪细胞的数量。4. 光镜下观察白色脂肪组织(WAT)、棕色脂肪组织(BAT)以及肝脏、骨骼肌组织病理切片。(三)分子生物学实验:RT-PCR及Western blot检测各部位脂肪组织AGT,Renin,ACE,ACE2,Ang II(包括AT1和AT2)以及RhoA,ROCK,ERK1/2和p38的表达。 主要研究结果: (一) 流行病学调查 超重及肥胖患病率:30岁以上人群,超重及肥胖患病率分别为41.5%和10.

Autophagy of MSCs was analyzed by flow cytometry and transmission electron microscopy, and the expression of beclin Ⅰ?and LC3-Ⅱ was detected by Western blot. MSCs were labeled in vivo with the fluorescent dye, CM-Dil, and subsequently transplanted into the portal veins of rats that had undergone HIRI. Liver levels of proliferating cell nuclear antigen(PCNA) were quantified by fluorescent microscopy. Serum 并且 aminotransferase activity and the extent of HIRI were also assessed at each time point.RESULTS: HSP for 2 h reduced apoptosis of MSCs induced by H2O2 as seen by a decrease in apoptotic rate, a decrease in Bax and cytochrome C expression

and an increase in Bcl-2 expression(P < 0.001). In addition, HSP for 2 h induced autophagy of MSCs exposed to H2O2 as shown by an increase in acidic vesicular organelle-positive cells, beclin 1 and LC3-Ⅱ expression, and autophagosome formation(P < 0.05). Treatment with 3-methyladenine attenuated HSPinduced autophagy and abolished the protective effects of HSP on the apoptosis of MSCs. Rapamycin failed to have additional effects on either autophagy or apoptosis compared with HSP

alone. The phosphorylation of p38 MAPK was significantly elevated and the phosphorylation of m TOR was downregulated in heat shock pretreated MSCs. Treatment with the p38 MAPK inhibitor, SB203580, reduced HSP-induced autophagy in MSCs. In vivo studies showed that the transplantation of HSP-MSCs 更多 resulted in lower serum aminotransferase levels, lower Suzuki scores, improved histopathology and an increase in PCNA-positive

cells(P < 0.05).CONCLUSION: HSP effectively induces autophagy following exposure to H2O2 via the p38MAPK/m TOR pathway, which leads to enhanced MSC survival and improved MSC repair following HIRI in rats.
目的研究参苓白术散抗脂多糖(LPS)诱导肠隐窝上皮细胞(IEC-6)损伤作用及其机制。方法用200μg·mL~(-1)LPS复制模型,将IEC-6细胞分为10组:空白对照组,模型组,低(4%)、中(8%)、高(16%)剂量参苓白术散含药血清组,10%胎牛血清(FBS)阴性对照组,ROCK阻断剂Y27632组,MLCK阻断剂ML-7组,MAPK抑制剂SB203580组,ERK抑制剂PD98059组。通过MTT法检测LPS细胞毒性;用蛋白质印迹法(western 购买Wortmannin blot)检测p38MAPK、ERK1/2通路蛋白水平;用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术测定肿瘤坏死因子(TNF-α)mRNA的表达;通过激光共聚焦测定细胞骨架结构蛋白纤维肌动蛋白(F-actin)的变化。结果 MTT实验中,不同浓度的LPS对IEC-6有不同程度的抑制、损伤作用。Western blot和RT-PCR结果显示,与空白对照组比较,模型组IEC-6细胞p38MAPK、磷酸化ERK1/2、TNF-αmRNA水平明显上升;而参苓白术散含药血清对其有明显的下调作用(P<0.01,P<0.05)。激光共聚焦检测F-actin实验中,模型组与空白组比较细胞微丝纤维表达显著增多;而参苓白术散含药血清组相对于模型组,细胞微丝纤维表达明显下降。结论参苓白术散含药血清对LPS诱导的IEC-6细胞损伤具有保护作用。
目的探讨血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)过表达对小鼠间充质干细胞(MSC)迁移能力的影响,并初步探讨其作用机制。方法将正常小鼠MSC(C3)、转染空载体的小鼠MSC(C3+N)和基因修饰过表达VCAM-1的小鼠MSC(C3+VCAM-1)分别接种在Transwell培养体系培养8和12 h,以胎牛血清为趋化物质诱导MSC迁移。甲紫(结晶紫)和DAPI染色法观察并计数各组细胞的迁移细胞数和迁移率。利用丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路抑制剂〔SB203580,PD98059和Jun激酶(JNK)抑制剂Ⅱ〕阻断细胞活化的信号通路,观察各组MSC迁移能力的改变。结果 MSC在Transwell体系培养8和12 h,C3+VCAM-1组细胞迁移数分别为7467±485和8795±255,迁移率分别为(14.9±1.0)%和(17.6±0.5)%,均显著高于C3组〔2731±562和4779±224;(5.5±1.1)%和(9.6±0.4)%〕和C3+N组〔2539±321和5645±1080;(5.1±0.6)%和(11.3±1.1)%〕(P<0.05,P<0.01)。加入JNK抑制剂Ⅱ可抑制MSC的迁移能力,C3+VCAM-1组迁移的细胞数为4843±167,迁移率为(9.7%±0.

It is concluded that sodium salicylate can induce the expression of HSP27 in HLECs-B3. The effects are mediated, at least in part, through the activation of P38MAPK and ERK1/2 signaling pathway.
目的探讨p38丝裂原激活的蛋白激酶(p38MAPK,p38)和心锚重复蛋白(cardiac ankyrin repeat protein,CARP)与心肌梗死后心肌重塑的关系,及辛伐他汀改善心肌梗死后心肌重塑的机制。方法结扎大鼠冠脉前降支致心肌梗死,术后24h存活大鼠随机分为心肌梗死组(MI组)、p38抑制剂SB203580组(SB组)、辛伐他汀组(Sim组)和假手术组(sham组)。7d后测定左心室重量指数(LVWI),心肌细胞横切面面积(CSA),RT-PCR和免疫组化法测定p38和CARP在非梗死区心肌中的表达。结果与Sham组相比,MI组LVWI和CSA明显增加(P<0.01),磷酸化p38(P-p38)和CARP表达明显增加(P<0.05)。与MI组相比,SB组和Sim组LVWI和CSA明显降低(P<0.01),SB组CARP表达低于MI组(P<0.01),Sim组p38和CARP表达明显低于MI组(P<0.01)。结论大鼠心肌梗死后p38和CARP表达增加;抑制p38可抑制CARP的表达,CARP可能部分受p38信号通路调节;辛伐他汀改善心肌梗死后心肌重塑的作用可能与抑制p38和CARP有关。
目的研究半边旗5F(Pteris

semipnnata L5F,PsL5F)对人未分化甲状腺癌FRO细胞的凋亡诱导及其与细胞内活性氧(reactive

oxygen species,ROS)水平升高和丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinases,MAPKs)激活的关系。方法MTT法测定PsL5F对FRO细胞的生长抑制作用;流式细胞术与Annexin 已经 V-FITC/PI标记法联用检测PsL5F对FRO细胞的凋亡诱导;用ROS特异反应试剂CM-H2DCFDA标记在流式细胞仪上分析PsL5F对FRO细胞内ROS水平的影响;Western blot法分析PsL5F处理对FRO细胞ERK、JNK和p38MAPK磷酸化水平的影响。结果PsL5F对FRO细胞具有显著的生长抑制作用,且呈剂量-时间依赖性;在PsL5F INCB28060溶解度 100 mg/L浓度下,磷脂酰丝氨酸(phosphatidylserine,PS)外翻细胞的比例呈时间依赖性逐渐增加;用PsL5F处理FRO细胞,在1 h时细胞内ROS水平就表现出明显的升高,GSH可抑制PsL5F诱导的细胞内ROS水平升高和细胞凋亡到对照水平;PsL5F处理可使FRO细胞ERK、JNK和p38MAPK磷酸化而被激活,JNK抑制剂Dicumarol可减轻PsL5F诱导的细胞凋亡,ERK和p38MAPK的抑制剂PD098059和SB203580加剧PsL5F诱导的细胞凋亡。结论PsL5F对FRO细胞的生长抑制作用是通过诱导细胞凋亡进行的;细胞内ROS水平升高起到了非常重要的作用;PsL5F处理可导致FRO细胞MAPKs信号通路激活,其中JNK信号通路是促凋亡信号,而ERK和p38MAPK作为生存信号被激活来对抗PsL5F诱导的细胞凋亡。
丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)是生物体内重要的信号转导系统之一,是一类丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,在细胞的生长、发育、分化等方面发挥重要作用,P38丝裂原活化蛋白激酶(P38 MAPK)是其中的一个亚类.肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)是肝纤维化形成过程中主要的效应细胞,本文主要讨论P38MAPK信号通路及其在肝星状细胞中发挥的作用.
目的:研究丹参酮ⅡA诱导人肝癌细胞凋亡和凋亡相关基因表达的p38MAPK信号转导通路,揭示其抗肝癌的部分机制.方法:4、8、16mg/L丹参酮ⅡA分别作用人肝癌SMMC-7721细胞48h后,免疫荧光染色观察细胞凋亡情况;琼脂糖凝胶电泳观察凋亡细胞特征性DNA条带;流式细胞仪法(Flow 还有 cytometry,FCM)检测细胞凋亡和细胞周期;荧光定量PCR检测Fas和Caspase-3基因mRNA的表达水平;并比较阻断p38MAPK信号通路后丹参酮ⅡA对肝癌细胞凋亡和Fas和Caspase-3基因mRNA的表达.结果:丹参酮ⅡA作用48h后,荧光显微镜下观察到经Hoechst染色的典型凋亡细胞.琼脂糖凝胶电泳可见凋亡细胞DNA呈规律性的梯状条带.4、8、16mg/L浓度丹参酮ⅡA作用人肝癌细胞后的细胞凋亡率分别为12.83%±1.51%,17.86%±2.70%和29.24%±7.58%,与对照组6.30%±2.08%比较均有显著性差异(P
目的探讨过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(PPAR-γ)对巨噬细胞中酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶-1(ACAT-1)表达影响及可能参与的信号途径。方法在RPMI1640培养基中培养人单核细胞(THP-1),加入佛波酯(PMA)培养48h,细胞贴壁呈巨噬细胞样分化。在高浓度胰岛素状态下,分别加入PPAR-γ的配体罗格列酮和胰岛素信号途径阻滞剂[细胞外信号调节激酶(ERK)抑制剂PD98059、p38促分裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)抑制剂SB203580和c-Jun氨基末端激酶(JNK)抑制剂SP600125],采用Western-blot法检测巨噬细胞ACAT-1蛋白水平,实时定量PCR法检测ACAT-1mRNA水平。结果在高胰岛素状态下,给予罗格列酮干预后ACAT-1mRNA和蛋白表达均降低;再加入SB203580后ACAT-1mRNA和蛋白表达较加入罗格列酮时均增加。结论p38MAPK途径参与了PPAR-γ抑制ACAT-1的表达,并发挥抗动脉粥样硬化的作用。
目的探讨p38丝裂原激活的蛋白激酶(p38)和心锚重复蛋白(CARP)的表达与大鼠心肌梗死(MI)后心肌重塑的关系。方法结扎大鼠冠脉前降支致MI,术后2

h存活大鼠随机分为MI组、p38抑制剂SB203580组(SB组)和假手术组(Sham组)。测定各组第1、7和28天左心室质量指数(LVWI)、心肌细胞横切面面积(CSA)。RT-PCR法测定p38和CARP在心脏的表达。结果与Sham组相比,MI组LVWI和CSA在第7、28天时明显增加(P均<0.05),各时间点磷酸化p38(p-p38)表达均明显升高(P均<0.05),CARP在第1、7天时表达明显升高(P均<0.05)。与MI组相比,SB组LVWI在第7天时明显降低(P<0.01);CSA在第1天时增大(P<0.

-34a在治疗肺癌继发耐药领域可能存在一定的潜力。
目的：MET是非小细胞肺癌的发生和进展的驱动基因。多项MET通路抑制剂处于临床试验中。进入临床试验受试者多为晚期非小细胞肺癌患者,其可能的获益指标为MET表达阳性和MET基因扩增阳性。然而其尚无统一的评价标准。因此,更详细地了解晚期肺腺癌患者中,MET表达免疫组化检测和MET基因扩增拷贝数的分布,评估并探索阳性标准的确立是临床试验设计的基础。 方法：本试验包括98例局部晚期/晚期肺腺癌患者,确诊时即为Ⅲ-Ⅳ期或在治疗后发生转移,收集病历资料,中位随访时间32.5月。通过免疫组织化学检测MET表达,根据染色强度和阳性细胞比例计算免疫组化评分(范围0～300)。利用免疫组化评分中位数和MetMab临床试验标准(≥50%的细胞染色强度2+以上),评估MET表达阳性率。MET基因拷贝数由荧光原位杂交法(FISH)检测,根据Cappuzzo标准,克唑替尼临床实验标准评估,并探索新的评估标准。比较MET表达和扩增与各种临床病理资料的相关性,与EGFR基因突变和用药的相关性,互相之间的相关性,及与不良预后的相关性。 结果：中位MET免疫组化评分为193分(范围0～300,98例),MET表达阳性率50%。MetMab标准判断MET表达阳性率达69/98(70%)。两种MET阳性表达判断方法均与临床、病理、基因检测、治疗和生存期无关。89例患者获得MET

FISH检测结果,根据Cappuzzo标准阳性率6/89(6.7%),根据克唑替尼临床试验标准,2/89(2.2%)患者MET/CEP7>2.2,中等强度扩增。本实验还提出,修改的UCCC标准,即扩增阳性(MET/CEP7≥2, MLN9708 MET拷贝≥4)细胞数≥10%；簇状信号细胞数≥10%；MET/CEP7≥2,任意一条阳性即判断MET扩增阳性,此标准阳性率为15.7%。MET高拷贝数更多见于Ⅲ期(p=0.03),手术标本(p=0.033),无远处转移(p=0.038)患者,与总生存期无关。修改的UCCC标准判断的MET扩增与各种临床病理特点无关,而与EGFR

时间 TKI的临床无获益(p=0.007)和不良预后(p=0.001)相关。MET免疫组化评分与MET平均拷贝数和MET/CEP7比值相关(Pearson检验系数0.210,p=0.048；0.225,p=0.034) 结论：在局部晚期/晚期肺腺癌患者中,两种方法判断MET表达阳性率高。但免疫组化中位值在不同人群中不够稳定,MetMab标准阳性率过高,可能纳入过多非获益的受试者。MET基因扩增中Cappuzzo标准和克唑替尼标准阳性率低,且评价标准单一。修改的UCCC标准在判断MET FISH扩增中,阳性率可,稳定性佳,与EGFR TKI治疗不获益和预后显著相关,有希望用于未来实验和临床研究中。但还需要更多回顾性研究和前瞻性研究对此标准进行调整和验证。
背景：胃癌作为全世界最常见的恶性肿瘤之一,也是全球癌症死亡的第二大原因。虽然在手术及化疗上取得了一定的进展,但是进展期胃癌的预后仍然较差,其五年生存率也只接近20%。在过去的十年里,靶向治疗极大的改善了许多恶性肿瘤的预后,包括乳腺癌、结直肠癌、肺癌等,然而在胃癌方面的进展却比较小。缺少与临床密切相关的动物模型是阻碍靶向药物发展的重要因素之一。小鼠体外细胞成瘤模型数十年来一直被用作临床前抗肿瘤药物研究的标准工具,但是药物进入临床试验后的高失败率让我们开始怀疑这个传统的成瘤模型对药物的预测能力。经过长期的体外培养及筛选的细胞移植成瘤后,通常已经丢失了来源肿瘤组织的分子特征和肿瘤异质性,这也是其对临床药物反应预测能力较差的原因。相比较体外细胞成瘤模型,病人组织来源肿瘤裸鼠移植瘤模型(patient derived tumor xenograft,

PDTX)能很好的保持来源病人肿瘤组织在组织病理、遗传及表型方面的特征,因而能较好的预测药物的反应性。近年来,大量PDTX模型在各种肿瘤中被建立起来,包括肺癌、结直肠癌、乳腺癌、胰腺癌及胃癌等。PDTX模型目前逐渐成为研究肿瘤生物学及评价抗肿瘤药物的有效工具。 曲妥珠单抗被批准用于治疗生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor-2, HER2)阳性的胃癌开启了胃癌靶向治疗的时代。其后至今却只有雷莫芦单抗(ramucirumab)和阿帕替尼(apatinib)两个抗血管药物被批准用于晚期胃癌的二线治疗,但是目前胃癌靶向治疗对总生存率的提高仍然是有限的。因此研发新的药物,尤其是靶向药物,对胃癌治疗尤为重要。近年来,较多的研究集中在了受体络氨酸家族(RTK)成员上,这其中就包括了肝细胞生长因子受体(cMet)、成纤维细胞生长因子受体2(Gbroblast Fludarabine数据表 growth factor receptor2, FGFR2)、表皮生长因子受体(EGFR)等。目前许多研究正在探索相关通路抑制剂在胃癌中的抗肿瘤作用。胃癌PDTX模型可以作为筛选这些潜在靶向药物的理想平台,从而为进一步的临床试验提供可靠的数据支持。 第一部分： 背景：靶向治疗正在成为胃癌新的治疗选择之一。PDTX模型能很好的保持来源肿瘤组织的特征,为临床前药物疗效评估提供了一个有效的工具。本研究旨在建立胃癌PDTX模型,并探索针对IER2, cMet和FGFR2的靶向治疗,为临床进一步药效试验提供数据支持。 方法：从32例胃癌病人获取胃癌组织移植入免疫缺陷小鼠中。利用免疫组织化学(IHC)和荧光原位杂交(FISH)评估一组胃癌病人HER2, cMet和FGFR2蛋白表达水平和基因扩增情况。最后,在PDTX模型中评价靶向药物的抗肿瘤作用。 结果：9个能传代的胃癌PDTX模型被成功的建立起来。在检测的163例胃癌患者中分别有17(10.4%),32(19.6%)和6(3.7%)例出现HER2. cMet和FGFR2的分子改变,而在32例移植瘤供体中则分别为4(12.5%),8(25.0%)和1(3.

7%（1/56），而在腺癌中的阳性率为8.3%(1/12),且该患者中无EGFR及K-Ras突变发生。本文首次对我国北方肺癌患者中的EML4-ALK的发生频率与临床特征进行研究，虽然由于病例较少未能进行统计学比较，但本文中得到的结果与我国其它地区（香港和上海）的研究以及欧美等国家研究结果基本相同，为关于我国北方患者中EML4-ALK融合基因的发生频率和临床特征的进一步研究提供了参考。 另采用PCR结合DNA测序的方法对110例肺癌及3例对应的正常肺组织中的Gp1306号外显子进行检测，在一例女性非吸烟肺腺癌患者的肿瘤和对应正常组织中检测到未报道过的的Gp130基因组（c.599C

因为 G）突变，该突变导致Gp130上第200位编码氨基酸Ala改变为Gly。该Gp130突变患者中无EGFR、K-Ras突变发生，说明肺癌的发生与EGFR和K-Ras基因无关。这是肺癌中首次发现的Gp130突变，基于IL-6/Gp130/STAT3炎性通路与肺癌发生发展的密切关系，该突变可能是肺癌发生的机制之一，值得进一步的探讨和研究。
背景与目的：BRCA1mRNA及MDM2、STAT3、COX2基因多态性与肿瘤的发生发展有密切联系,同时作为肿瘤生物标志具有潜在的临床应用价值,有助于指导临床药物选择。本文旨在探讨BRCA1mRNA及MDM2、STAT3、COX2基因多态性与鳞癌(食管癌、鼻咽癌、宫颈癌)临床治疗疗效的相关性。 方法：采用实时荧光定量PCR方法检测43例鳞癌(食管癌19例、鼻咽癌11例、宫颈癌13例)患者血浆BRCA1mRNA表达水平及MDM2、STAT3、COX2三者基因型,使用Mann-Whitney selleck 抑制剂 U检验,Kruskal-Wallis检验和卡方检验的方法研究BRCA1mRNA表达水平与MDM2、STAT3、COX2基因型与患者性别、年龄、肿瘤发生部位及其互相之间的相关性,以及四者与患者同步放化疗疗效的相关性。 结果：BRCA1mRNA表达水平及MDM2、STAT3、COX2基因型与患者性别、年龄、肿瘤发生部位等无明显相关性。BRCA1mRNA表达水平与同步放化疗疗效相关,未发现MDM2、STAT3、COX2基因型与疗效的相关性。BRCA1mRNA表达水平与MDM2、STAT3、COX2基因型相互之间无明显相关性。 结论：鳞状细胞癌BRCA1mRNA表达及MDM2、STAT3、COX2基因多态性与患者性别、年龄、肿瘤发生部位等无明显相关性。BRCA1mRNA表达水平与同步放化疗疗效相关,检测BRCA1mRNA水平可望指导临床放疗增敏药物的选择。BRCA1mRNA表达水平与MDM2、STAT3、COX2基因多态性无明显相关性,提示BRCA1mRNA表达可能是预测疗效的独立因素。

目的：观察益气养阴化瘀解毒方联合化疗治疗晚期肺腺癌的临床疗效,评价在此法指导下创制的中药复方对晚期肺腺癌患者临床作用,并考虑其安全性,阐述中医药治疗晚期肺腺癌的特色及优势,为肺癌中药制剂研究提供临床预研究基础。

方法：采用随机对照的方法,将40例晚期肺腺癌患者随机分为2组,其中治疗组(益气养阴化瘀解毒方配合培美曲塞联合铂类方案化疗)20例、对照组(单纯培美曲塞联合铂类方案化疗)20例。培美曲塞联合铂类方案化疗,21天为1个周期,连续观察2周期。治疗组在化疗间歇期给予益气养阴化瘀解毒方水煎服,每日1剂。分别记录治疗前后的近期疗效、中医症候、CEA.CA125.CYFRA21-1和毒副反应等统计分析。 GDC 941 结果：在中医症候积分方面,治疗组中医症候疗效显效1例(5.00%),有效13例(65.00%),无效6例(30.00%)；对照组中医症候疗效显效0例(0.00%),有效5例(25.00%),无效15例(75.00%)。治疗组明显优于对照组(P<0.05)。在近期疗效CEA.CA125.CYFRA21-1及毒副反应方面,两组比较差异无统计学意义(P<0.05)。在生活质量方面,治疗组和对照组相比,治疗后的躯体功能、疲乏、恶心呕吐、失眠、食欲丧失、整体生活质量领域治疗组比对照组积分高,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。治疗组前后相比,治疗后的躯体功能、疲乏、恶心呕吐、失眠、食欲丧失、整体生活质量领域较治疗前提高,差异有统计学意义(P0.05)。在卡氏评分方面,治疗后统计学比较有显著性差异(P
人类基因组中存在大量单核苷酸多态性位点(SNP, single nucletide ploymorphysim),而其中很多会随着基因的表达和翻译传递到药物靶标蛋白中,直接或间接影响药物与靶标的结合,从而产生抗药性。Hapmap数据库中记录了大量不同人种的SNP信息,由于特定SNP位点在不同人种中出现频率不同,所以同一药物靶标在不同人种间可能存在不同的SNP频率,进而显示出不同的药物抗性,也就是说不同种类的药物可能适用于不同人群。虽然现已发现很多不同人种用药问题的案例,但是并没有研究者对上市药物(FDA批准)与靶标SNP位点的关系作出评估。 本论文结合Hapmap数据库中不同人种的SNP信息对TTD (Therapeutic Targets Database)数据库中成功靶标(至少存在一种上市药物,共69个靶标,158个SNP位点)进行了分析,结果显示多数靶标的SNP位点距离靶标活性位点较远(Distance>15A,146个SNP,占总数的92.4%；57个靶标,占总数82.6%),少数SNP位点距离活性位点较近(6A

After a 6‐hydroxydopamine(6‐OHDA)‐lesioned rat model of PD was generated, the differentiated cells were transplanted into the striata of the 6‐OHDA‐lesioned PD rats. Results:

The motor behaviors of the PD rats were assessed by the number of apomorphine‐induced rotation turns. The results showed that the NSCs differentiated in vitro into neurons and DA neurons with high efficiencies. After transplantation into the striata of the PD rats, the differentiated cells significantly improved the motor deficits of the transplanted PD rats compared to those of the control nontransplanted PD rats by decreasing the apomorphine‐induced turn cycles as early as 4 weeks after transplantation. Immunofluorescence analyses showed that the differentiated DA neurons survived more than 16 weeks. Conclusions: 哪里 Our results showed that cells that were differentiated from NSCs had therapeutic effects in a rat PD model, which suggests that differentiated cells may be an effective treatment for patients with PD.
目的对积雪草苷的近年来的研究情况进行综述,为积雪草苷的深入研究提供借鉴。方法阅读近十年的国内外有关积雪草苷的文献报道,从积雪草苷的药理活性、理化性质以及提取工艺等方面对其目前的研究概况进行综述。结果积雪草苷具有抗纤维化、神经保护、抗肿瘤等多方面的药理作用。结论为积雪草苷的进一步研究提供借鉴。
多能干细胞(pluripotent

不 stem cells,PSCs)包括从胚胎内细胞团中分离出的胚胎干细胞(embryonic stem cells,ESCs),外胚层干细胞(epiblast stem cells,Epi SCs),从原始生殖细胞(primordial germ cells,PGCs)分离出的胚胎生殖细胞(embryonic 确认细节 germ cells,EGCs)和诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPSCs)。这些细胞都具有向各种类型细胞发育的潜能,因此,PSCs为再生医学的发展,人类基因疾病的动物模型的建立,异种器官移植和高质量抗病新品种的培育提供了有效的途径。迄今为止,PSCs在小鼠(Mus musculus)模型和人类物种已经做了大量研究,同时,家畜的ESCs和iPSCs也取得了有效的进展,表明其不仅可以应用于特定家畜优良品性的稳定遗传和优育,而且可以以家畜为载体生产人类需要的化学药品和抗体,甚至应用在人类疾病的临床前应用中。然而,家畜的ESCs相对来说是难分离和富集的,体外培养建立稳定的ESCs系具有更大的难度和挑战。近年来,得益于对家畜ESCs和相关iPSCs相关的持续研究,已初步揭示了家畜ESCs的独特生物学特性。PSCs已经成为生命科学和高科技农业和生物学一个创新的研究领域。在本文中,本文综述了家畜PSCs的发展历程与应用前景。
再生医学是近年问世的一门新学科,其努力达成的目标在修复或置换那些由于衰老、疾病、损伤或先天缺陷而丧失的组织或器官功能。1984年迄今的三十多年,再生医学的发展可分为”幼年期”、”青春期”与”成年期”等3个阶段,展现了兴起、衰落和复苏的马鞍形。2006—2007年,从成人皮肤成纤维细胞创建诱导型多潜能干细胞(induced

pluripotent stem cells,i PSCs)获得成功,以及继后器官芯片(organs-on-chips)的兴旺开发,是两项里程碑式的科学发明和技术突破,大大促进了再生医学在临床各领域的推广应用。对干细胞的生态位(niche)、立体生物复印(3 dimensional bioprinting)、器官芯片与再生医学的临床影像检查,本文亦作简要介绍,并指出再生医学的远景挑战,是充分利用生物医学的优势,引导人体自愈。
Tribbles同源蛋白3(TRB3)可通过介导Smad依赖与非Samd依赖信号通路调控肺纤维化的进程。转化生长因子β(TGF-β)是最强的致纤维化因子,通过与细胞因子及信号通路相互作用,在纤维化过程中发挥重要作用。丝裂素活化蛋白激酶家族(MAPK)信号通路是重要的非Smad依赖途径。本文就TRB3、TGF-β及MAPK信号通路在肺纤维化进程中的作用及相互关系进行综述。
目的研究赖诺普利对腹膜纤维化大鼠腹膜细胞因子的影响,探讨赖诺普利对腹膜纤维化的作用及可能的机制。方法 36只SD大鼠(6～8周龄,体重180～200g)随机分为3组,每组12只。生理盐水(NS)组:每日腹腔内灌注生理盐水15ml,作为正常对照;模型(PDF)组:每日腹腔内直接注射4.25%含糖透析液15ml,并在第7、14、21、28天加入红霉素6.25万单位,建立腹膜纤维化模型;赖诺普利(LIS)治疗组:与PDF组同样方法建立腹膜纤维化模型,在此基础上,每日每只大鼠灌胃赖诺普利胶囊0.

采用MTT法检测Ad-NK4单用及与BOR联合应用对RPMI8226细胞增殖的抑制作用。2.采用PI流式细胞术检测各作用组RPMI8226细胞凋亡的影响。3.采用Western Blot技术检测各作用组RPMI8226细胞Cleaved caspase-3、Bax、Bcl-2蛋白表达水平的变化。研究结果:1. RPMI8226细胞分别按Ad-GFP组、Ad-NK4组、BOR组、Ad-GFP+BOR联合组及Ad-NK4+BOR联合组进行处理，采用MTT法测量各组在24h、48h和72h的细胞增殖情况。在24h时，以上各组的细胞增殖抑制率分别为6.65%、37.4%、27.1%、21.2%和68.5%。在48h时，以上各组的细胞增殖抑制率分别为0、52.6%、29.7%、34.6%和59.7%。在72h时，以上各组的细胞增殖抑制率分别为4.9%、59.7%、50.7%、41.3%和74.1%。在不同时间点，Ad-NK4与BOR联合作用组对RPMI8226细胞增殖抑制率均明显高于BOR单独作用组。2. Ad-NK4和BOR联合作用组RPMI8226细胞凋亡率（47.5%），明显高于Ad-NK4（12.1%）或BOR（14.5%）单独作用组。3. 无 Westernblot结果显示：联合作用组RPMI8226细胞Cleaved

caspase-3和Bax蛋白水平均明显高于BOR或Ad-NK4单独作用组，而Bcl-2蛋白水平却相反，同时在联合作用组Bax/Bcl-2比率增加。结论： Ad-NK4可增强BOR对RPMI8226细胞增殖的抑制，增加RPMI8226细胞的凋亡，并且可能通过活化Caspase-3和上调Bax/Bcl-2比率的途径增强凋亡作用。
1.程序性的翻译后修饰调控FEN1降解及基因组稳定性 作为结构特异性内切和外切核酸酶,分叉DNA单链内切酶1(FEN1)在多种代谢途径中起维持稳定基因组的关键作用,包括DNA复制、修复和凋亡DNA片段化。在细胞周期各个阶段,核酸酶持久性的存在,被认为对细胞周期和基因组稳定性有着不利的影响。而对FEN1翻译后修饰(PTM)过程进行研究发现,FEN1核酸酶的降解是有细胞周期依赖性的,并由精确且有顺序性PTM步骤所调控的。通过研究发现,磷酸化FEN1在S末期从DNA复制复合物上脱落下来,作为FEN1的降解起始步骤。磷酸化对于小泛素化是一种信号,而随后小泛素化诱导FEN1泛素化,并在蛋白酶体介导下降解。对程序性PTM中的相关几个位点进行突变,会导致细胞中的FEN1不易降解、Cyclin MAPK Inhibitor Library体外 B表达稳定且明显延迟细胞周期的G1与G2/M期,另外还会造成染色体异常分离。FEN1降解过程的研究阐明了一种细胞中调控核酸活性平衡性的新机制。 2. FEN1E160D突变小鼠在苯并芘诱导下有高发性的肺癌 FEN1属于Rad2核酸家族中的一个成员,拥有5’分叉内切酶(FEN),5’外切酶(EXO)和切口依赖的核酸内切酶(GEN)等3种结构特异的核酸酶活性,因此它能加工多种DNA复制及修复途径中产生的中间产物。以前的研究发现,在多数癌症患者中的一组FEN1突变与单核苷酸多态性中,FEN1突变体的EXO与GEN活性均有不同程度的削弱和损失。本研究过程中,已经建立的携带有FEN1E160D突变的小鼠模型,它能作为人类中该突变所代表的模型进行研究。实验结果显示,当FEN1突变小鼠暴露在有碱基损伤的化学试剂下,它们会发生肺癌。我们提出的疑问是,如果具有该突变的人类个体,是否对来自烟草的烟雾更为敏感,是否会在个体成长发育的早期形成肺部肿瘤或肺癌。为解决这个疑问,本研究用苯并芘(B[α]P)处理E160D突变小鼠。B[α]P是一种来自烟草燃烧后产生的化合物,也是烟雾中最主要的DNA损伤剂。实验证明了FEN1利用GEN活性剪切泡状底物,该底物模拟了NER过程中产生的DNA中间产物。E160D突变小鼠的细胞,由于缺失了GEN活性,因此在修复B[α]P作用DNA后形成的加合物的过程中,存在着一定程度的缺陷。实验结果观察到,在长时间暴露于B[α]P后,E160D突变的MEF细胞累积了许多DNA链断裂,染色体断裂,且染色体数目也出现异常。此外,当幼鼠被注射B[α]P后,在发育早期发现E160D比野生型有更高的肺腺癌发病率。研究结果说明,携带有GEN活性缺失的FENl突变体E160D,在B[α]P诱导下将会使个体更易发生早期的肺部肿瘤,进而导致肺癌发生的高风险性。
目的：本研究比较吉非替尼在中国上市前及上市后晚期肺腺癌患者的生存差异,并对其临床因素进行分析。

一般 方法：本研究收集了2002年1月—2010年12月在中国医学科学院肿瘤医院接受过化疗的558例晚期肺腺癌患者资料进行回顾分析。按照配对病例对照研究设计,根据年龄、性别和吸烟史三个因素进行严格配对后筛选出255例仅接受过姑息化疗的上市前组患者和255例接受过吉非替尼治疗的上市后组患者。患者的临床特征包括年龄、性别、吸烟史、ECOG评分(Eastern Cooperative Oncology Group performance status,ECOG PS)、临床分期、器官转移、既往化疗方案数等也进行了分析。对于不同组间疗效比较应用χ2检验；对生存时间分析应用Kaplan-Meier法,Log-rank对生存曲线的差异进行显著性检验,COX回归进行多因素分析。以P<0.001)、年龄<0.001)是明显改善全组510例患者总生存的因素。上市后组患者的总生存在大多数亚组包括不同年龄、性别、吸烟史、ECOG0-1分、临床分期、是否有肺转移、胸膜转移、骨转移、脑转移、肾上腺转移和肝转移、既往化疗方案数亚组均较上市前组有显著延长(p<0.05)。中位总生存期(OS)为24.0个月,病理类型为腺癌(P
目的研究EML4-ALK、EGFR、KRAS及c-Met四种基因在中国肺腺癌患者中的基因状态。 方法收集110例中南大学湘雅医院肺腺癌患者的手术标本。应用FISH、直接测序法、绝对荧光定量PCR、IHC法检测EML4-ALK、 KRAS、EGFR、c-Met四种基因在中国肺腺癌患者中的基因状态。 结果四种基因EML4-ALK、EGFR、KRAS、c-Met的异常状态所占比例分别为EML4-ALK10%、EGFR52.7%、KRAS3.6%、c-Met5.5%,且两两之间基本不共存。因此,约71.8%的中国肺腺癌患者存在上述四种基因的异常状态。 结论本实验在部分中国肺腺癌患者中行上述四种基因检测,结果约71.