05)。STAT3mRNA表达活性也受到显著抑制(p<0.05),但STAT1mRNA并未出现显著抑制效应。T-2毒素诱导IL-6基因表达在12h出现了显著的抑制p
背景：人参皂苷Rh2是中国传统中药人参中的主要活性成分，具有优异的免疫调节、抗炎、抗疲劳、抗肿瘤等药理作用。然而因其难溶于水,限制了体外实验中可应用的最大浓度，人参皂苷Rh2的生物活性在实际应用和生产研究中受到严重的制约。为了提高Rh2的水溶性和生物活性，本室制备了人参皂苷Rh2的硫酸化修饰产物Rh2-B1和Rh2-B2。两种衍生物的水溶性都获得大幅提高。在本论文中，我们研究了Rh2-B1对细胞毒性T细胞系CTLL-2细胞的作用，细胞毒性T细胞因其能够保护机体免受病毒感染而成为近年来研究的热点，此外，我们还探讨了Rh2影响CTLL-2细胞增殖和发挥免疫功能的分子机制。
目标：我们的目标是调查Rh2-B1对干扰素-（γInterferon-γ, IFN-γ）的分泌和细胞增殖的影响，并研究其可能的机制。 FDA-approved Drug Library 材料与方法：酶联免疫吸附实验（Enzyme Linked ImmunosorbentAssay,ELISA）被用于检测IFN-γ在全血培养上清和CTLL-2细胞培养上清液中的浓度。噻唑蓝染色法（MTT Cell Proliferation Assay，MTT）被用来检测CTLL-2细胞的增殖情况。蛋白免疫印迹试验（Western blot）被用来评价CTLL-2细胞中信号转导通路相关蛋白表达量及其活化程度的变化。 结果：我们的研究证明，Rh2-B1能够显著提高Balb/c小鼠全血培养上清中IFN-γ的水平。在此之后，我们评估了Rh2-B1对CTLL-2这种细胞毒性T细胞的增殖、IFN-γ的分泌情况的影响，并研究了其作用机制。Rh2-B1刺激了CTLL-2细胞的增殖和IFN-γ的分泌，还能够介导丝裂原活化蛋白激酶p38（p38mitogen-activated 点击此处 protein kinase，p38MAPK）和胞外信号调节激酶（extracellular regulated proteinkinases，ERK）的表达和活化，但对淋巴细胞特异性蛋白酪氨酸激酶（Lymphocyte-specific protein tyrosine kinase,Lck or p56Lck）和信号转导及转录激活因子（Signal transducers and activators oftranscription5，STAT5）的表达呈现抑制作用。这种作用能够被特异性的p38MAPK抑制剂SB203580和特异性ERK抑制剂U0126阻断。 结论：Rh2-B1能够通过激活p38MAPK和ERK依赖的信号通路进而刺激细胞毒性T细胞的增殖和IFN-γ的分泌。这可能成为一种新的病毒感染治疗潜在药物。
凋亡对于胚胎发育具有至关重要的作用，细胞增殖和凋亡的共同作用才雕塑出了面部复杂精细的结构。各种原因导致的凋亡改变，会干扰两侧腭突和原始腭的融合，从而引起腭裂的发生。研究证明骨形成蛋白（bone
morphogenetic protein (BMP))通过调节凋亡，能够导致上颌骨和腭骨的缺损，进而引起腭裂的发生；而其上游基因GATA-6作为与胚胎发育密切相关的转录调节因子，能引起多个胚层来源的器官发育异常。GATA-6等位基因完全被敲除的杂合子动物无法存活，而胚胎干细胞小体（embryonic stem cell–derived embryoid 或者 bodies (EBs))能够准确模拟胚胎发育早期的情况，因此是研究GATA-6与腭裂等胚胎发育异常导致的先天性畸形相关性的理想模型。 GATA蛋白家族，作为一组锌指翻译因子，对于细胞分化和胚胎器官发育具有非常重要的作用。在小鼠体内敲除GATA-6会阻碍内胚层的分化，并且引起外胚层的凋亡。之前的实验观察到，敲除GATA-6的EB内出现大量的凋亡，并且其内胚层的分化会受到影响。本实验发现，将正常的内胚层细胞的移植到突变的胚胎干细胞小体能够完全阻止细胞凋亡，并恢复外胚层极化和成腔。laminin能够诱导基底膜细胞在突变胚胎干细胞小体上组装；而laminin
γ1被敲除的内胚层细胞移植到突变胚胎干细胞小体上，由于不分泌三聚体层粘连蛋白，就不会形成基底膜，只能部分抑制凋亡。这些现象说明内胚层细胞来源的基底膜和非基底膜因素都对于GATA-6依赖的细胞存活具有重要的作用。 我们的微阵列分析显示在EB分化的过程中，BMP-2、IGF-2、TGF-β和VEGF-A的表达增加，而BMP-4，FGF-4，PDGF-A，PDGF-C和VEGF-C的表达减少。为了确定这些生长因子的表达在GATA-6被敲除的胚胎干细胞内是否发生了改变，我们采用了逆转录PCR（RT-PCR）和免疫印迹的方法对2天的EB进行分析，发现GATA-6被敲除后，BMP-4和IGF-2的mRNA表达明显减少，而FGF-4的mRNA表达不变。重要的是，BMP-2的mRNA在2天正常的EB内已经能检测到，然而在GATA-6被敲除的EB内则检测不到。为了证明各种生长因子对EB凋亡的影响，我们在1天的GATA-6-/-的EB内，使用分别使用浓度为0.1μg/ml的BMP-2, FGF-4, EGF, IGF-2,PDGF和TGF-β1分别作用24小时，并且与对照组相比，然后使用全量免疫染色，通过检测cleaved caspase-3对凋亡进行分析。结果显示凋亡广泛的出现在GATA-6-/-的EB的周围细胞内，而BMP-2的加入明显抑制了caspase-3的激活， FGF-4, EGF和PDGF则没有效果。将BMP-2的浓度增加到0.