05)。结论:本研究中提供的实验证据表明,ZFP580可以作为缺氧环境下的新型调节分子。我们证实,ZFP580通过抑制线粒体凋亡途径在TGF-β1介导的抗化学缺氧诱导的细胞损伤中发挥重要的抗凋亡保护作用。
目的:调控血管平滑肌(VSMC)表型转换是防治PCI术后再狭窄的新策略,micro RNA作为VSMC表型转换的调节因子,可通过转录后水平调控下游靶基因的的表达从而影响VSMC的表型转换。本组首先克隆的C2H2型锌指核转录因子ZFP580可调控内皮细胞及VSMC的增殖及迁移而影响血管重塑。本组新近实验证明:micro
RNA-206既可靶向调控ZFP580的表达,又可促进VSMC从收缩型向合成型转换。本实验拟采用micro RNA-up与micro RNA-down技术,观察micro RNA-206表达水平的变化对大鼠VSMC分化功能的影响,并验证其可能的分子机制。方法:提取分离大鼠VSMC,通过形态学观察及免疫组化法进行鉴定。生物信息学分析ZFP580与mi R-206的结合位点。利用TGF-β(根据文献参考选取2ng/ml)对大鼠VSMC进行不同时间点刺激,对照组选用等量的DMEM。Realtime-PCR测定mi R-206的表达水平;Western-blot检测ZFP580、SMa-actin、SM22a、Smad2/3、phospho-Smad2/3的表达水平;使用慢病毒过表达或低表达mi R-206、慢病毒过表达或低表达ZFP580和应用SB431542抑制剂后检测相关指标;荧光素酶报告实验(Luciferase)检测mi R-206与ZFP580 3‘UTR的结合作用。结果:(1)在大鼠VSMC加入适宜的TGF-β(根据文献参考选取2ng/ml)进行预处理,分别刺激大鼠VSMC 6h、12h、24h、48h,对照组中加入等量的DMEM。利用Realtime-PCR测定mi R-206的表达水平,结果发现在12h的时候mi 购买DAPT secretase R-206的水平降至最低点,与对照组相比具有统计学差异(P<0.05)。Western-blot检测ZFP580的表达水平,结果显示同样在12h时ZFP580的表达水平达到最高,与对照组相比具有统计学差异(P<0.05)。与此同时,Western-blot检测SMa-actin、SM22a的表达水平结果显示:SMa-actin、SM22a的表达较对照组相比均不同程度的降低(P<0.05)。(7)过表达或低表达ZFP580慢病毒感染大鼠VSMC72h后。Western-blot检测ZFP580的表达水平,结果显示:高表达ZFP580感染组与对照组相比,SMa-actin与SM22a的表达水平上调(P<0.05),低表达ZFP580感染组与对照组相比,SMa-actin、SM22a的表达水平显著上升(P
目的TGFβ1即转化生长因子beta1是一种小分子蛋白因子,有报道显示TGFβ1在炎症局部组织中分泌量显著增加,并在局部组织的伤口愈合以及促使纤维化过程中扮演着重要角色。然而,TGFβ1在外周伤害性感觉传递过程中所起的作用尚不太清楚。本研究旨在探讨TGFβ1对外周初级感觉神经元兴奋性的急性作用及其在慢性胰腺炎大鼠的痛觉过敏中扮演的角色。方法1.在180-200
g雄性SD大鼠胰管内注射三硝基苯磺酸(TNBS)诱导慢性胰腺炎(CP)模型。2.胰腺壁注射荧光素(Dil)逆行标记胰腺特异性背根神经节(DRG)神经元。运用全细胞膜片钳方法研究TGFβ1对胰腺相关DRG神经元膜电位和兴奋性的作用。3.运用钙成像方法研究TGFβ1对胰腺相关DRG神经元胞内钙离子浓度的影响。4.运用Western AP24534 selleckchem Blotting检测TGFβ1及其受体在大鼠胰腺和胰腺相关节段DRG(T9-T13)中的表达水平。5.运用Von frey filament(VFF)评测正常大鼠或CP大鼠在注射药物前后痛行为反应。结果1.全细胞膜片钳记录显示,灌流TGFβ1引起胰腺特异性DRG神经元细胞膜去极化并进一步诱发动作电位,升高神经元兴奋性;与对照组比较,灌流TGFβ1使CP大鼠胰腺相关DRG神经元去极化及放电更加显著。2.钙成像结果显示,灌流TGFβ1可使正常大鼠胰腺相关DRG神经元胞内钙离子浓度上升;与对照组比较,灌流TGFβ1使CP大鼠胰腺相关DRG神经元胞内钙离子浓度上升更加显著。3.与对照组比较,CP大鼠胰腺中TGFβ1及其前体表达水平显著升高,胰腺相关DRG中的TGFβ1及其前体,TGFβI型和II型受体表达水平显著升高。4.鞘内注射TGFβ1诱发正常大鼠产生腹部痛觉过敏;鞘内注射TGFβ受体拮抗剂SB431542明显缓解CP大鼠的痛觉过敏。结论我们的研究提示TGFβ1对初级感觉神经元有急性的兴奋作用,在慢性胰腺炎大鼠外周神经系统中激活的TGFβ1/TGFβ受体信号通路参与介导慢性胰腺炎的痛觉过敏。这些结果以及后续的研究将有助于发现慢性胰腺炎疼痛治疗的新靶标。
目的:前期研究证实,补肾法、疏肝法具有提高体外受精-胚胎移植(in
vitro fertilization-embryo transfer,IVF-ET)患者临床妊娠率、改善妊娠结局、提高卵母细胞质量的作用,本研究拟通过观察补肾法、疏肝法对IVF-ET患者体外培养卵巢壁颗粒细胞ACTA及其信号通路的调控作用,以探讨两法促进卵泡发育、提高卵母细胞质量作用机制及其途经的异同。方法:1含药血清制备补肾调经方、逍遥散方含药血清:选取年龄在20-30岁,身体健康,月经规律,B超显示有成熟卵泡,且无卵巢、子宫器质性疾病的女性志愿者10名,分别服用补肾调经方和逍遥散方。补肾调经方、逍遥散方服用方法是每日1剂,300ml,早晚分服。补肾调经方和逍遥散方连续服药3天,第4天清晨空腹服用全天剂量药物(服药前禁食12h),于末次服药1h后静脉取血5ml,室温静置2h,3000r/min离心10min,取上清,56℃水浴30 min灭活补体,0.