01),但无剂量依赖性。3、MTT法检测结果显示：不同浓度的各信号通路阻断剂分别干预HSC-T6细胞,各实验组HSC-T6细胞的增殖率均低于对照组,差异有统计学意义(P
研究目的：探索极低频电磁场(ELF-EMF)对人骨肉瘤细胞增殖凋亡的影响,并研究其分子机制。研究方法：通过MTT法研究50Hz,

所以 1mT的ELF-EMF对人骨肉瘤细胞MG-63、MNNG-HOS Cl的增殖作用；通过流式细胞术检测5OHz, 1mT ELF-EMF处理人骨肉瘤细胞不同时间后细胞凋亡率、活性氧(ROS)水平以及给予活性氧抑制剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)及p38MAPK抑制剂SB203580作用后细胞凋亡率的变化；通过蛋白质免疫印迹法检测50Hz, 1mT ELF-EMF处理人骨肉瘤细胞MG-63、MNNG-HOS Cl不同时间后及NAC干预后MAPK信号通路相关蛋白变化。研究结果：ELF-EMF够显著抑制人骨肉瘤细胞的增殖,处理3h后细胞存活率仅20%,且这种效应呈明显的时间依赖性；ELF-EMF可诱导人骨肉瘤细胞凋亡及促进ROS水平上升,给予2.5mM NAC干预后人骨肉瘤细胞凋亡率显著下降；ELF-EMF处理入骨肉瘤细胞后其胞内MAPKp38激活,磷酸化p38MAPK蛋白表达增多,而NAC干预后其磷酸化水平明显下降。此外,p38MAPK抑制剂SB203580干预后人骨肉瘤细胞凋亡亦显著下降。研究结论：ELF-EMF通过上调ROS激活MAPKp38信号通路,进而诱导人骨肉瘤细胞凋亡,抑制其生长。
目的:巨噬细胞微粒是介导慢阻肺、糖尿病、慢性肾病等病发病的重要病因。目前研究已得知,巨噬细胞微粒引起的过度炎症反应导致的免疫损伤是其致病的主要原因,但是巨噬细胞微粒引起过度炎症反应的具体发病机制尚不明确。本实验研究旨在探讨巨噬细胞微粒能否诱导人单核细胞(THP-1)产生炎症因子IL-8,以及丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路在巨噬细胞微粒诱导THP-1细胞产生炎症因子IL-8的过程中的作用,进一步探讨巨噬细胞微粒的致病原理。方法:参照Nakamura和Yang SR的方法,用注射器连续抽吸收集2支完全燃烧的香烟的烟雾,随后将烟雾慢慢注射到不含血清的20ml培养基中,得到浓度为10%的香烟烟雾提取物(cigarette smoke extract,CSE)溶液。THP-1细胞用含佛波酯(PMA)的培养基处理24h后再用含2.5%的CSE的培养基刺激20h,随后收集微粒并作流式细胞术检测。分别用103、104、105、106/ml的巨噬细胞微粒处理已被用含佛波酯(PMA)的培养基刺激24h的THP-1细胞,分别在0h、3h、6h、12h、24h停止刺激。收集细胞后ELISA方法检测IL-8。105/ml的巨噬细胞微粒处理已被用含PMA的培养基刺激24h的THP-1细胞,分别在0min,15min,30min,60min停止刺激。Western

BI 2536浓度 blotting方法分别检测ERK1/2、JNK、p38的磷酸化程度。分别用1μM、10μM、30μM的p38特异性抑制剂SB203580、JNK特异性抑制剂SP600125、ERK1/2特异性抑制剂PD98059预处理已被PMA刺激的THP-1细胞,30min后再用105/ml巨噬细胞微粒刺激THP-1细胞12h,并用ELISA方法分析不同抑制剂对IL-8产生的影响。结果:(1)用含2.5%的CSE的培养基培养经PMA处理的THP-1细胞20h后,能明显诱导THP-1细胞产生巨噬细胞微粒。(2)ELISA结果表明,不同浓度组的巨噬细胞微粒都能明显刺激THP-1细胞产生IL-8。细胞上清中IL-8含量随微粒处理浓度的增加表现为逐渐升高的趋势,当微粒浓度为105/ml时达到最高。在同一浓度组间,随着处理时间的递增,IL-8的含量逐渐升高,在12h时IL-8产生最多,随后下降。(3)WB图片表明,巨噬细胞微粒处理THP-1细胞后p38/MAPK、JNK和ERK1/2/MAPK的磷酸化水平都较对照组升高,并且随着巨噬细胞微粒处理时间的递增p38/MAPK、JNK和ERK1/2/MAPK的磷酸化水平逐渐升高,三条通路的磷酸化程度基本都在处理THP-1细胞30min后升为最高。(4)ELISA检测结果表明:分别用1μM、10μM、30μM的p38特异性抑制剂SB203580、JNK特异性抑制剂SP600125、ERK1/2特异性抑制剂PD98059预处理THP-1细胞后,巨噬细胞微粒刺激THP-1细胞产生的IL-8含量都较未使用时降低,并且与抑制剂的浓度呈剂量依赖性。当三种特异性抑制剂浓度为30μM时,IL-8含量分别降到31.3%、46.1%和51.4%。结论:(1)香烟烟雾可诱导THP-1细胞产生巨噬细胞微粒;(2)巨噬细胞微粒可诱导THP-1细胞产生前炎症因子IL-8;(3)巨噬细胞微粒可激活ERK1/2/MAPK、JNK/MAPK和p38/MAPK通路,活化的ERK1/2/MAPK、JNK/MAPK和p38/MAPK通路可能与巨噬细胞微粒诱导前炎症细胞因子IL-8的产生有关。
目的:乳腺癌作为威胁女性身心健康首位的恶性肿瘤,发病率呈逐年上升趋势。由于发病原因尚未完全阐明,因此预防、早期筛查和诊断便成为治愈的关键,这就使得分子生物技术倍受关注。CCL5趋化细胞因子是一种炎症细胞因子,趋化T细胞和单核细胞,在肿瘤生长和转移中具有多重效应,包括抑制肿瘤细胞的免疫效应、促进肿瘤的生长、新血管的生成和转移等,也是乳腺肿瘤细胞表达的主要趋化因子,与乳腺癌的进展息息相关,p38是细胞内重要的信号通路,可以调节很多细胞因子的表达。本实验拟对LPS诱导小鼠乳腺癌4T1细胞系引起CCL5的表达升高的机制展开进一步研究。方法:1用RT-PCR和Western

许多 Blot的方法检测小鼠乳腺癌细胞系4T1表面TLR4的表达及诱导表达。2 LPS诱导4T1细胞,提取总RNA,用RT-PCR检测MCP-1、VEGF和CCL5在基因水平的表达情况。同时用实时定量PCR的方法进行检测MCP-1、VEGF和CCL5在基因水平的表达情况。3用Western Blot的方法检测LPS诱导4T1细胞后MAPK中T-p38和P-p38、T-Erk和P-pErk、T-JNK和P-JNK及NF-κB中T-p65和P-p65的蛋白表达变化。4采用实时定量PCR的方法来检测使用通路抑制剂后LPS诱导的4T1细胞的CCL5的表达。5构建携带目的基因重组质粒并在小鼠巨噬细胞RAW264.