第二部分检测高糖诱导人视网膜内皮细胞炎性凋亡机制1、透射电镜高糖培养下的视网膜内皮细胞出现明显的凋亡形态学变化,表现为线粒体中的空泡化,染色质浓缩和内质网的脱颗粒,而在高糖+抑制剂组上述变化显著减轻;2、Western-blot检测凋亡相关蛋白表达应用pifithrin-α抑制p53蛋白表达后,促凋亡蛋白Bax、Cl-caspase-3表达Pim抑制剂减少,凋亡抑制蛋白Bcl-2表达升高;3、Western-blot检测p53和NF-κB通路蛋白在高糖培养下的RECs细胞,p53、p-p53、p65、p-p65、IκB、p-IκB表达量均有不同程度升高,pifithrin-α抑制p53蛋白表达后,p53表达量显著降低,p-p53/p53比值显著升高,且NF-κBVS-6063通路蛋白p65、IκB表达量显著降低,p-p65/p65和p-IκB/IκB比值显著降低。4、免疫荧光检测p53和NF-κB p65蛋白表达共定位高糖组,p53、p65荧光信号呈现强阳性,较正常对照组显著增强,抑制p53蛋白后高糖培养下的RECs细胞p53、p65荧光信号显著降低,以p53蛋白荧光信号降低明显,在细VX-661价格胞核及细胞质内仍可观察到p65荧光信号。5、q-PCR检测p53、p65 mRNA转录水平高糖组p53、p65的mRNA表达显著升高;抑制p53蛋白后高糖培养下的RECs细胞p53和p65的mRNA表达水平明显降低。结论高浓度葡萄糖可以对视网膜内皮细胞造成实质性损伤,早期即导致其形态学改变;高浓度葡萄糖可激活视网膜内皮细胞凋亡通路和炎症反应通路,导致视网膜内皮细胞凋亡率上升、炎症因子表达增加。