第三部分通过DNMT1Knock-down,进一步探讨改变DNMT1表达对激活素A抑制NS-1细胞增殖及诱导凋亡的影响及其机制。第四部分建立NS-1荷瘤鼠模型,评价激活素A及DNMT1 Knock-down对小鼠体内NS-1细胞成瘤的影响。研究方法RT-PCR及Western blotting检测DNMT1在NS-1细胞的表达。MTT法、CFSE染色、Hochest3Nocodazole浓度3342染色及Annexin V-7AAD评价NS-1肿瘤细胞活力及凋亡。构建pLVX-U6/Puro-DNMT1 sh RNA表达质粒,转染NS-1细胞评价敲低DNMT1基因对细胞增殖及凋亡的影响。建立NS-1细胞荷瘤鼠模型,HE染色、免疫组织化学染色、Tunel法评价DNMT1基因Knock-down对NS-1细胞成瘤的影响。研究结果第一许多部分激活素A对多种肿瘤细胞活性及DNMT1表达的影响DNMT1在肿瘤细胞高表达,而在正常组织来源细胞低表达。Giemsa染色法显示激活素A作用于SW480、Hela、A549、NS-1细胞后发生明显的细胞形态学改变,提示激活素A可以影响NS-1细胞形态变化。且在低浓度5ng/ml时激活素A即可影响NS-1细胞形态变化。同时可见激活素A可以显著Raf 抑制剂抑制骨髓瘤细胞系NS-1细胞DNMT1表达。因此,实验采用NS-1细胞作为激活素A敏感细胞,进行后续研究。第二部分激活素A诱导小鼠骨髓瘤细胞系NS-1凋亡为了确定激活素A对NS-1细胞的作用,实验首先采用MTT法检测NS-1细胞活力,结果显示激活素A可以抑制NS-1细胞活力。CFSE染色进一步显示,激活素A抑制了NS-1细胞增殖。Hocheast染色和Annexin V-7AAD结果显示激活素A可以促进NS-1细胞凋亡。