方法链脲霉素40mg/kg诱导C57BL/6雄鼠糖尿病,左侧股动脉高位结扎离断术造成单侧后肢缺血模型。于术前及术后1、3、7d不同

方法链脲霉素40mg/kg诱导C57BL/6雄鼠糖尿病,左侧股动脉高位结扎离断术造成单侧后肢缺血模型。于术前及术后1、3、7d不同时间点采血(n=6~10),流式细胞术检测外周血单个核细胞中细胞因子受体(c-Kit)+/干细胞抗原1(Sca-1)+/胎肝激酶1(Flk-1)+早期EPC比例。酶联免疫吸附测定(ELISA)法测定相应时间点血浆及骨髓Roscovitine价格血管内皮生长因子(VEGF)及间充质衍生因子1α(SDF-1α)水平。免疫印迹法测定术后3d骨髓单个核细胞VEGF及其受体2(VEGFR2)、蛋白激酶B(PKB,Akt)与内皮型一氧化氮合酶(eNOS)及其磷酸化产物、基质金属蛋白酶9(MMP-9)及其组织抑制因子1(TIMP-1)的蛋白表达水平,明胶酶谱法测定骨髓上清MMP-9酶活性。结果与非糖尿病组相比,糖尿病小鼠呈现缺血诱导的骨髓EPC动员障碍,动员高峰期其外周血早期EPC数量显著减少,并伴随血浆及骨髓中SDF-1α及VEGF释放减少[VEGF(85.3±22.8)比(164.1±30.4)ng/L,P<0.01;SDF-1α:(731±52)比(1267±174)ng/L,P<0p38 MAPK cancer.01],骨髓组织细胞VEGF、VEGFR2蛋白表达受抑、Akt与eNOS磷酸化减弱、MMP-9蛋白表达减少及其酶活性受损(P<0.05),而TIMP-1蛋白表达水平增加(P<0.05),且糖尿病组骨髓MMP-9酶活性受抑与其循环中EPC水平减低相关(P<0.01)。结论糖尿病动物缺血诱导的骨髓EPC动员障碍可能与组织缺血后SDF-1α/VEGF/Akt/eNOS/MMP-9信号通路的活化受损有关。

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