OxLDL对外周血EPC迁移功能的影响:OxLDL各浓度组明显减少EPC的迁移能力,而LDL对EPC的迁移无影响。50μg/ml,100μg/ml,200μg/ml的oxLDL组导致EPC迁移数分别为16.5±1.73,10.8±1.13,6.2±0.65都较对照组EPC的25.5±2.67低,差异有显著性,P＜0.05。而oxLDL

25μg/ml及LDL导致EPC迁移数为22.3±2.34,23.8±2.50,差异无显著性,P＞0.05。 5.OxLDL对外周血EPC增殖功能的影响:EPC的增殖能力在OxLDL各浓度组抑制了EPC的增殖,并且随着其浓度的增加而加剧。LDL对EPC的增殖无影响。50μg/ml,100μg/ml,200μg/ml的oxLDL组导致EPC增值率分别为0.73±0.762,0.45±0.048,0.31±0.033都较对照组EPC的1.29±0.135低,差异有显著性,P＜0.05。而oxLDL25μg/ml及LDL导致EPC增值率为1.12±0.118,1.198±0.126,差异无显著性,P＞0.05。 什么 6.OxLDL对外周血EPC体外血管生成能力的影响:体外血管生成实验模拟体内血管生成,检测EPC参与血管新生的能力.结果显示,OxLDL各浓度组显著减弱EPC的体外血管生成能力,在浓度为200μg/ml时最为显著。而LDL对EPC的成血管能力无影响。50μg/ml,100μg/ml,200μg/ml的oxLDL组导致EPC成血管数数分别为19.2±2.01,13.2±1.38,9.5±1.00都较对照组EPC的26.2±2.75低,差异有显著性,P＜0.05。而oxLDL 25μg/ml及LDL导致EPC迁移数为23.0±2.41,25.8±2.70,差异无显著性,P＞0.05。

结论: 1.OxLDL在体外能减少EPC数量,作用呈浓度依赖性; 2.OxLDL在体外能抑制EPC的增殖、迁移、粘附能力,作用呈浓度和依赖性; 3.OxLDL能降低EPC的体外血管生成能力: 提示OxLDL是导致EPC数量及功能减弱的因素之一。 第二章P38信号通路参与oxLDL对内皮祖细胞数量和功能的影响 目的: 研究oxLDL是否导致EPC细胞内P38及P-P38的表达异常,以及oxLDL对EPC的作用是否与细胞内P38的信号有关。 方法: 1.EPC分离,培养,及分组:EPC的分离及培养见第一章,收集贴壁细胞。贴壁细胞随机三组:①对照组:②oxLDL组:在培养液中加入100μg/ml的oxLDL③SB203580组:在培养液中加入100μg/ml的oxLDL前,预先半小时加入0.5μM的SB203580。 2.Western检测p38及p-p38的表达:oxLDL(100μg/ml)处理EPC后0,5,15,25,35分钟及SB203580预处理后细胞内p38,及p-p38蛋白的表达;以及oxLDL 25,50,100,200μg/ml以及LDL100μg/ml处理30分钟后细胞内p38,及p-p38蛋白的表达。 selleck化学药品 3.EPC凋亡分析: 按BD Biosciences公司的说明进行操作:各组EPC处理结束后,用0.1%胰酶消化,4°C PBS洗两次后,重悬于结合缓冲液中,调整细胞浓度为1 X 106/ml。取100μl细胞悬液至5 ml试管中,加5μlAnnexin V-FITC标记液和5μl PI,轻轻混匀。并设立无Annexin V及PI的空白对照、仅Annexin V的对照、仅PI的对照。室温避光孵育15min后,加400μl结合缓冲液,1小时内上流式细胞仪检测EPC双染色鉴定EPC数量,EPC粘附能力检测,迁移能力检测,EPC增殖能力检测,体外血管生成能力检测实验方法见第一章

结果: 1.western检测结果:100μg/ml的oxLDL处理EPC后,细胞内p-p38成时间依赖性表达增强,大约25min时达顶峰,5,15,25,25,35分钟细胞内p-p38的表达是对照组的1.4±0.15倍,2.1±0.22倍,3.2±0.34倍,1.5±0.13倍,且p38拮抗剂sb203580可抑制其表达,是对照组的1.2±0.13倍,与各时间点比较有显著性差异,P＜0.05。不同浓度的OxLDL处理25min后观察,细胞内p-p38成剂量依赖性表达增强,25μg/ml,50μg/ml,100μg/ml,200μg/ml处理EPC后,其细胞内p-p38的表达是分别对照组的1.2±0.13,1.7±0.18,3.2±0.35,3.4±0.35。而LDL对其没影响。细胞内p38表达不受时间和浓度的影响。 Sorafenib化学结构 2.100μg/ml的oxLDL处理EPC后,导致EPC数量减少,增殖减低,凋亡增加,粘附及迁移能力减低,体外成血管能力减弱。而sb203580能减弱100μg/ml的oxLDL对EPC的作用。其中对照组,oxLDL组和SB+oxLDL组的EPC数量分别为71.8±7.52,32.5±3.40,52.8±5.85;粘附细胞数分别为31.7±3.32,16.3±1.71,24.5±2.57;迁移细胞数分别为24.2±2.53,10.5±1.10,18.2±1.91;体外成血管细胞数分别为25.2±2.64,12.3±1.29,17.8±1.87。各组增殖率分别为1.32±0.139,0.45±0.048,1.133±0.119。各组的凋亡率分别10.2±1.07%,21.3±2.23%,13.2±1.4%。SB+oxLDL与oxLDL组比较,在细胞数量,增殖,凋亡及黏附,迁移,体外成血管能力方面有差异显著性,P＜0.