5,5, 10μg/ml)或protoapigenone (2.5,5,10μg/ml) 24 h后,使用台盼蓝染色法、流式细胞术、和Western LBH589订单 blot技术检测了细胞存活率、凋亡百分比、胞内ROS积累、线粒体膜电位变化情况及Procaspase-3,-8,-9、Bcl-2家族成员、MAPK通路蛋白等凋亡相关因子的蛋白表达水平。结果显示： 与正常肝细胞相比,肝癌细胞HepG2对DEDC高度敏感(#P
AGR2(anterior gradient-2)是一种分泌蛋白,广泛存在于肺、乳腺、前列腺、胰腺和结肠等腺体组织,并在这些腺体的肿瘤组织中过量表达,与肿瘤细胞的存活、生长和转移相关。AGR2的表达与乳腺癌、前列腺癌、胰腺癌等癌症的发生发展和预后相关,被认为是一个很有前途的早期诊断和判定预后的标志物。 已有的研究主要集中于AGR2在相关肿瘤中的作用,观察肿瘤细胞系过表达或敲除AGR2之后,对其生长、迁移等的影响；然而AGR2作为一个分泌蛋白,究竟是如何作用于靶细胞,相关的信号通路等信息知之甚少。 本研究中,我们首先利用原核表达纯化技术得到高浓度无标记的AGR2蛋白,然后用它去处理乳腺癌细胞系MCF7；实时细胞分析仪监测发现,在AGR2处理后的20分钟就能观察到信号的升高,而一些细胞质蛋白激酶的抑制剂可以特异性的阻止这些信号的产生；利用Western Bloting也检测到了AGR2刺激的P38、AKT的活化；这些结果表明,我们纯化的AGR2能够作为分泌蛋白,迅速激活靶细胞内的信号。

为了深入了解其作用机理,我们用AGR2蛋白处理MCF7细胞,然后利用基因表达谱芯片分析其靶基因的表达,并结合生物信息学方法,分析AGR2调控可能涉及的信号通路。AGR2刺激细胞12小时后,能够调控大量基因的表达,对其中20个差异基因的表达进行Q-RT-PCR验证,证实了VEGFA、VLDLR、 很少 FZD10、CCL2、AXIN2等基因表达被上调或下调；通过GO分析、Pathway分析和聚类分析,发现分泌蛋白AGR2蛋白可能通过mTOR等信号通路发挥作用。 本研究证明AGR2作为分泌蛋白可以快速激活靶细胞内的信号,并通过靶基因表达谱分析,初步探讨了其作用机制,为后续的详细研究奠定了基础；研究结果对于了解相关肿瘤发生发展的分子机制,以及在临床上开展以AGR2为分子靶点的个体化诊疗、预后判断等具有重要参考意义。
丝裂原活化蛋白激酶（Mitogen-activated protein kinases，MAPKs）是一类广泛存在于细胞内的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶。研究证实，MAPKs通路是重要的信号转导系统，可将细胞外的刺激信号转导至细胞及其胞核内，在引起一系列的细胞生物学反应如细胞增殖、转化、分化及凋亡等过程中发挥重要的作用。MAPKs家族主要包括4个亚族: ERK、JNK、p38MAPK和ERK5。p38MAPK在1993年被Brewster、Han等发现，是MAPKs家族中的重要一员。

谷氨酸是中枢神经系统内主要的兴奋性神经递质，脑缺血时细胞外液中异常升高的谷氨酸可引起兴奋性毒性作用，损伤神经元。而脑内突触间隙缺乏谷氨酸的代谢酶，主要依赖兴奋性氨基酸转运体（excitatory aminoacid transporters, EAATs）来调节其浓度，目前认为EAAT2在维持细胞外液谷氨酸浓度方面发挥着主要作用，因其蛋白主要存在于星型胶质细胞，又被称为胶质细胞谷氨酸转运体1（glial

glutamate transporter-1, GLT-1）。因此，调制GLT-1的功能，是防止由过多的谷氨酸导致的兴奋性毒性作用的有效方法。 我室既往的研究结果表明，脑缺血预处理（cerebral ischemicpreconditioning，CIP）可上调p-p38MAPK及GLT-1蛋白的表达，p-p38MAPK蛋白表达的上调早于GLT-1蛋白表达的上调；且p38MAPK的特异性抑制剂SB203580可抑制CIP诱导的脑缺血耐受及GLT-1表达上调。反义寡核苷酸（antisense Seliciclib制造商 oligodeoxynucleotides，AS-ODNs）是一类人工合成的、可与靶基因DNA或mRNA结合而抑制目的基因和蛋白表达的单链核苷酸片段。本实验通过应用p38MAPK AS-ODNs，观察其对CIP诱导的脑缺血耐受及GLT-1蛋白表达的影响，进一步探讨p38MAPK信号通路在CIP上调GLT-1表达诱导的脑缺血耐受中的作用。 1CIP诱导脑缺血耐受过程中p38MAPK的活化和GLT-1蛋白的表达上调 方法：40只健康雄性Wistar大鼠（280～300g），永久凝闭椎动脉，恢复2天后，随机分为以下4组：①sham组（n=10）：只暴露双侧颈总动脉，但不阻断其血流；②CIP组（n=10）：夹闭双侧颈总动脉3min作为CIP，之后恢复血流灌注；③脑缺血损伤（ischemic insult，II）组（n=10）：夹闭双侧颈总动脉8min作为损伤性脑缺血，之后恢复脑血流灌注；④CIP+II组（n=10）：夹闭双侧颈总动脉3min，恢复血流再灌注2天后，再次夹闭双侧颈总动脉8min。以上各组动物均在sham手术或末次脑缺血/再灌注后6h和2d（每个时间点n=5）断头取脑，分离海马CA1区，应用Western blot分析p-p38MAPK及GLT-1蛋白的表达。 结果： p-p38MAPK蛋白的表达在6h时间点sham组大鼠海马CA1区的p-p38MAPK蛋白有一定量的基础表达。与sham组相比，CIP组p-p38MAPK蛋白的表达明显升高（P＜0.05），为基础表达值的1.25倍；II组p-p38MAPK蛋白表达显著上升，为基础表达值1.64倍（P＜0.01），为CIP组的1.32倍（P＜0.05）。CIP+II组与II组相比，p-p38MAPK蛋白表达明显下降（P＜0.05），接近sham水平。2d时间点p-p38MAPK蛋白在各组表达的变化趋势均与6h时间点相类似。 GLT-1蛋白的表达在6h时间点，Sham组大鼠海马CA1区的GLT-1蛋白有一定量的基础表达。与sham组相比，CIP组GLT-1蛋白表达升高（P＜0.05），为基础表达的1.18倍；II组GLT-1蛋白的表达显著下调，是基础值的0.28倍（P＜0.01），是CIP组的0.24倍（P＜0.05）。CIP+II组与II组相比，GLT-1蛋白表达明显上升（P＜0.