4.统计分析随访数据,结果显示ISOC1表达增高组与结肠癌患者的不良预后正相关,差异具有显著性(P<0.05)。5.用qRT-PCR与Western blot方法检测不同结肠癌细胞株中ISOC1的表达,结果显示,除RKO外,与人正常结肠上皮细胞NCM-460相比,ISOC1在HCT-116、SW-480、DLD1和HT-29细胞株中表达均明显升高(P均<获悉更多0.05)。选择表达较高的HCT-116与SW-480作后续研究对象。小结1. 与癌旁非癌组织相比,结肠癌组织中ISOC1基因在m RNA及蛋白表达水平上调。2.ISOC1表达水平与结肠癌患者肿瘤大小、TNM分期、肿瘤侵润深度和局部淋巴结转移明显相关。3.ISOC1高表达与结肠癌患者的不良预后相关。4.与人正常结肠上皮细胞NCMGDC 0032小鼠-460相比,4株结肠癌细胞中ISOC1的m RNA与蛋白水平均表达增加。选定ISOC1表达较高的HCT-116与SW-480细胞株用于进一步的ISOC1抑制研究。第二部分下调ISOC1表达对结肠癌细胞生物学功能的影响目的研究下调ISOC1表达对人结肠癌胞株增殖、凋亡以及迁移能力的影响。方法1. 以慢病毒为载体,构建含绿色荧光蛋VX-765购买白的两种不同干扰序列的小发卡样干扰RNA(sh RNA),侵染目的细胞并检测ISOC1干扰效率。2.利用MTS实验和平板克隆形成实验检测肿瘤细胞的增殖和克隆能力。3.检测Caspase3/7活性、行流式细胞凋亡实验评估肿瘤细胞凋亡。Western blot检测凋亡相关蛋白的表达。4.应用划痕实验及Transwell实验来检测肿瘤细胞的迁移能力。结果1. 荧光显微镜下观察到细胞感染病毒阳性率均达到80%以上。