TYR的蛋白及基因表达与未处理组相比均明显下调,差异有统计学意义,而与正常豚鼠相比差异无统计学意义。 五、研究结论 CaM在人自体移植皮片中的表达显著增高,刺激皮片黑素细胞合成黑色素增多,促进自体移植皮片过度色素沉着；维拉帕米作用于人黑素细胞后,能抑制黑素细胞增殖,抑制TYR的活性,减少黑素合成。维拉帕米与α-MSH共同作用黑素细胞后,细胞增殖下降,TYR活性下降,黑素细胞合成黑色素减少,说明维拉帕米在体外能拮抗α-MSH对黑素合成的促进作用。维拉帕米作用于自体移植皮片后能使皮片黑素细胞中酪氨酸酶的活性下降、皮片中黑色素含量降低,说明维拉帕米在体内亦能抑制黑素合成的作用,进一步说明了钙信号转导途径在自体移植皮片过度色素沉着中有重要调控作用。
糖尿病肾病(diabetic

很少 nephropathy, DN)是糖尿病患者最常见的微血管并发症之一也是导致糖尿病患者心血管事件增加率及其死亡率上升的主要原因。国外终末期肾衰竭患者中原发病为糖尿病的约占总数的30%-40%。随着我国糖尿病患者人数的日益增多,目前DN已跻身为我国导致慢性肾病能不全的重要原因之一。DN起病隐匿,且病程进展迅速,一旦患者确诊为DN时往往已经处于不可逆的肾脏损害并进入快速发展的阶段。DN临床治疗效果不理想、预后差成为当前临床医生面临的一个重大难题。众所周知,DN早期特征性的病理改变为肾小球肥大及细胞外基质增多,随着病情逐渐进展,进而出现肾小球硬化及间质纤维化,临床表现为慢性肾功能不全。早期DN是可以逆转的,因此,如何尽早明确糖尿病患者发展为DN的可能性,并采取有效的干预措施,延缓病变的发展是当前医学界研究热点。 时间 12-脂氧化酶(12-lipoxygensae,12-LO)是一种不饱和脂肪酸的氧化酶,在体内活化后以花生四烯酸(Arachidonic acid, AA)为基质生产12-氢氧化二十碳四烯酸(12-Hydroxyeicosatertraenioc acid,12(S)-HETE)的代谢产物。研究表明,12-LO及其代谢产物12(S)-HETE主要通过氧化应激及引起炎症反应参加多种疾病的发生、发展,如高血压、冠心病、糖尿病、动脉粥样硬化等。因此,12-LO及其代谢途径受到越来越多研究者的关注。早在1999年,Bleich D等人就发现：12-LO基因敲除的C57BL／6小鼠连续腹腔注射链脲佐菌素(streptozotocin, STZ) 5天,12-LO基因敲除的C57BL／6小鼠的血糖无明显升高。近年,Kim

YS和Kang等研究发现高糖刺激后的肾小球系膜细胞12-HETE的释放水平是明显增加,而Reddy MA等人研究发现12-LO能够通过P38MAPK信号传导途径增加DN时细胞外基质(extracellular

matrix, ECM)蛋白的表达,如：纤维连接蛋白(fibronectin, FN)、胶原蛋白(Collagen),因此,12-LO在糖尿病肾病的发生、发展中具有重要的作用。肾小球肥大和细胞外基质增多是早期DN特征性的病理改变,而肾小球肥大与细胞周期调节有关的细胞周期素激酶抑制剂(cyclin-dependent kinase inhibitor, CKI)的表达密切相关。因此,本研究主要是多角度探讨DN时12-LO及其代谢途径与CKI表达调节及与肾小球细胞肥大的关系；观察积聚的细胞外基质(Extracellular matrix, ECM)对12-LO和CKI表达的调节作用,并阐明其分子机制,明确12-LO对DN肾小球细胞肥大的发生和ECM积聚的关系,进一步明确12-LO在DN进展中的作用,为临床治疗DN提供新的治疗靶点。我们以体外培养的原代肾小球系膜细胞、微型泵注射12(S)-HETE大鼠模型及高脂饮食结合小剂量的链脲佐菌素(Streptozotocin,STZ)诱发的2型糖尿病模型大鼠作为研究对象,进行如下实验：①微型泵注射12(S)-HETE对正常大鼠肾小球内CKI及ECM的表达影响；②皮下注射12-LO抑制剂((cinnamyl-3,4-dihydroxy-cyanocinnamate,CDC)对2型糖尿病大鼠肾小球肥大及肾小球内CKI.ECM的表达影响；③12(S)-HETE刺激肾小球系膜细胞对CKI的表达影响及其信号传导；④高糖刺激肾小球系膜细胞对CKI的影响及给予CDC后CKI的表达变化；⑤模拟ECM微环境对肾小球系膜细胞CKI的表达影响和CDC对其表达的变化及其信号传导。 所以 主要研究结果如下： 1.泵注射12(S)-HETE增加正常大鼠肾小球内P21、P16及CollagenⅣ的表达p<0.01),CDC在不影响糖尿病大鼠的血糖的情况下,改善肾脏肥大及降低肾小球体积p<0.01),P21、P16及CollagenⅣ的表达也明显增加(p<0.01)；给予CDC治疗后P21、P16及CollagenⅣ的表达和12(S)-HETE水平均显著下降p<0.01),给予P38MAPK抑制剂后,P21、P16的表达明显降低(p<0.01),CDC降低高糖刺激后系膜细胞12(S)-HETE释放水平(p<0.01),CDC降低高糖刺激引起的P21、P16的表达(p<0.01),CDC降低模拟的ECM微环境中的系膜细胞12(S)-HETE释放水平(p<0.